SN∕T 2316-2019 出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T23162019出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法Determination of p-arsanilic acid、4-nitrophenylarsonic acid、3-nitro-4-hydroxy-phenylarsonic acid residues in animal foods for exportICS2019-12-27 发布2020-07-01 实施中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署发布ISN/T23162019前 言本标准按照 GB/T1.12009 给出的规则起草。本标准代替 SN/T23162009动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量检测方法液相色谱-电感耦合等离子体/质谱法。本标准与 SN/T23162009 相比，主要技术变化如下：标准名称修改为“出口动物源食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法”。增加了液相色谱-原子荧光光谱法（LC-AFS）为第二法。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津海关动植物与食品检测中心、中华人民共和国合肥海关、北京海光仪器有限公司、上海新仪微波化学科技有限公司。本标准主要起草人：肖亚兵、董志珍、高健会、韩芳、宋伟、马兴、宋旭、杨爽、逯玉凤、徐渊。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T23162009。1SN/T23162019出口动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测方法1 范围本标准规定了出口动物源性食品中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量测定的高效液相色谱-电感耦合等离子体/质谱检测方法、液相色谱-原子荧光光谱检测方法。本标准适用于鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡可食用下水、猪肉、猪肝、猪肾、猪可食用下水中阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷残留量的检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法第一法 液相色谱-电感耦合等离子体/质谱法3 方法提要试样中残留的阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷用甲醇+水（11，体积比）提取，离心后定容，过0.45m 滤膜，供高效液相色谱-电感耦合等离子体/质谱（HPLC-ICP/MS）测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 三氟乙酸：优级纯。4.3 0.1%三氟乙酸：准确移取 1mL 三氟乙酸至 1000mL 容量瓶中，定容。4.4 滤膜：0.45m，直径 47mm。4.5 甲醇溶液：甲醇+水（11，体积比）。4.6 阿散酸（CAS 号：2045-00-3，C6H8AsNO3）标准物质：纯度大于等于 99。4.7 硝苯砷酸（CAS 号：98-72-6，C6H6AsNO5）标准物质：纯度大于等于 95%。4.8 洛克沙砷（CAS 号：121-19-7，C6H6AsNO6）标准物质：纯度大于等于 97.5%。4.9 阿散酸标准储备溶液：准确称取适量的阿散酸标准物质，用去离子水配成浓度为 500g/mL 的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。4.10 硝苯砷酸标准储备溶液：准确称取适量的硝苯砷酸标准物质，用去离子水配成浓度为 500g/mL的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。4.11 洛克沙砷标准储备溶液：准确称取适量的洛克沙砷标准物质，用去离子水配成浓度为 500g/mL的标准储备液。根据需要用去离子水稀释成适当浓度的标准工作液。2SN/T23162019标准储备液在 0 4冰箱中保存，有效期为 12 个月，标准工作液在 0 4冰箱中保存。有效期为 6 个月。5 仪器和设备5.1 高效液相色谱-电感耦合等离子体/质谱仪。5.2 高速均质器：15000r/min。5.3 离心机：3000r/min。5.4 涡旋混合器。5.5 超纯水仪。5.6 天平：感量为 0.1mg 和 1mg。6 试样制备与保存6.1 试样制备将鸡肉、鸡肝、鸡可食用下水、猪肉、猪肝、猪肾、猪可食用下水等有代表性样品约 500g、鸡肾样品 100g用绞肉机绞碎，混匀，均分成 2 份试样，分装入洁净的盛样袋内,密闭并标明标记。6.2 试样保存动物源性食品等试样于-18以下冷冻保存。7 测定步骤7.1 提取称取试样 1g（精确至 0.001g）置于微波辅助萃取内罐中，准确加入 10mL 甲醇溶液（4.5），按照微波辅助萃取仪的标准操作步骤进行提取（参见附录 A 中表 A.1）。提取完毕，取出冷却至室温，10000r/min 离心 10min。取 4mL 上清液，氮气吹扫，用甲醇溶液（4.5）定容至 2mL，经 0.45m有机微孔滤膜过滤后进行测定。按同一操作方法作空白试验。7.2 测定7.2.1 液相色谱条件7.2.1.1 色谱柱：C18柱，粒径 5m，250mm4.60mm 或性能相当者。7.2.1.2 流动相：甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液（1090，体积比）。7.2.1.3 流速：1.0mL/min。7.2.1.4 进样量：20L。7.2.2 电感耦合等离子体-质谱工作条件和测量参数电感耦合等离子体-质谱工作条件和测量参数见附录 B。7.2.3 高效液相色谱-电感耦合等离子体-质谱测定分别配制阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷标准使用液 0.0ug/L，0.4ug/L，2.0ug/L，10.0ug/L，25.0ug/L，50.0ug/L，100.0ug/L，测得其峰面积并求出峰面积与浓度关系的一元线性回归方程。阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷标准溶液（25ug/L）的高效液相色谱-电感耦合等离子体、质谱图参见3SN/T23162019附录 C。7.2.4 空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。7.2.5 结果计算和表述按式（1）计算试样中阿散酸（或硝苯砷酸或洛克沙砷）残留量，计算结果应将空白值扣除。Xi=（c1 c0）Vm1000V2V1（1）式中：Xi试样中被测物的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c1样液中被测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；c0空白液中被测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；V1吸取上清液体积，单位为毫升（mL）；V2最终定容体积，单位为毫升（mL）；m最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。8 测定低限和回收率8.1 测定低限阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的测定低限均为 0.01mg/kg。8.2 回收率样品添加回收率见表 D.1。第二法 液相色谱-原子荧光光谱法9 方法提要试样中残留的阿散酸、硝苯砷酸、洛克沙砷经甲醇+水（11，体积比）提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环境下与硼氢化钾反应，生成气态砷化合物，用原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。10 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为优级纯，水为 GB/T6682 规定的一级水。10.1 试剂10.1.1 甲醇：色谱纯。10.1.2 盐酸。10.1.3 硼氢化钾。4SN/T2316201910.1.4 氢氧化钠。10.1.5 磷酸二氢钾。10.1.6 三氟乙酸。10.1.7 过硫酸钾。10.1.8 微孔滤膜：0.45m，有机系。10.2 试剂配制10.2.1 甲醇溶液：甲醇（10.1.1）+水（11，体积比）。10.2.2 盐酸溶液（5%，体积分数）：量取 50mL 盐酸（10.1.2），溶于水并定容至 1000mL。10.2.3 硼氢化钾溶液（20g/L）：称取 5g 氢氧化钠溶（10.1.4）于水，待氢氧化钠（10.1.4）充分溶解后，称取 20g硼氢化钾（10.1.3）于氢氧化钠（10.1.4）溶液中，溶于水并定容至 1000mL。10.2.4 三氟乙酸（0.1%）-磷酸二氢钾溶液（50mmol/L）：称取 3.402g磷酸二氢钾（10.1.5）溶于水，待固体完全溶解后，添加 0.5mL 三氟乙酸（10.1.6），溶于水并定容至 500mL。经 0.45m 有机滤膜（10.1.8）过滤后，于超声水浴中超声脱气 15min，备用。10.2.5 过硫酸钾溶液（3%，体积分数）：称取 0.5g 氢氧化钠（10.1.4）溶于水，待氢氧化钠（10.1.4）充分溶解后，称取 3g 过硫酸钾（10.1.7）于氢氧化钠溶液中，溶于水并定容至 100mL。10.3 标物质10.3.1 阿散酸（CAS 号：2045-00-3，C6H8AsNO3）标准物质：纯度大于等于 99。10.3.2 洛克沙砷（CAS 号：121-19-7，C6H6AsNO6）标准物质：纯度大于等于 97.5%。10.3.3 硝苯砷酸（CAS 号：98-72-6，C6H6AsNO5）标准物质：纯度大于等于 95%。10.4 标准溶液配制见 4.94.11。标准储备液在 0 4冰箱中保存，有效期为 6 个月。11 仪器和设备所有玻璃器皿均应以硝酸溶液（14，体积比）浸泡 24h，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。11.1 液相色谱-原子荧光光谱仪（LC-AFS）：由液相色谱仪（包括液相色谱泵和进样装置）与原子荧光光谱仪组成。11.2 组织匀浆机。11.3 高速粉碎机。11.4 天平：感量为 0.1mg 和 1mg。11.5 真空抽滤装置。11.6 超声波水浴器。11.7 超纯水仪。11.8 微波辅助萃取仪。11.9 冷冻离心机：转速 10000r/min。12 样品制备与保存见第 6 章。5SN/T2316201913 分析步骤13.1 提取称取试样 1g（精确至 0.001g）置于微波辅助萃取内罐中，准确加入 10mL 甲醇溶液（10.2.1），按照微波辅助萃取仪的标准操作步骤进行提取（参见表 A.1）。提取完毕，取出冷却至室温，10000r/min 离心 10min。取 4mL 上清液，氮气吹扫，用甲醇溶液（10.2.1）定容至 2mL，经 0.45m有机滤膜过滤后进行测定。按同一操作方法作空白试验。13.2 测定13.2.1 液相色谱参考条件13.2.1.1 色谱柱：C18柱（粒径 5m，250mm4.60mm），或性能相当者。13.2.1.2 流动相：甲醇-三氟乙酸（0.1%）-磷酸二氢钾溶液（10.2.4）（595，体积比）。13.2.1.3 流速：1.2mL/min。13.2.1.4 进样体积：100L。13.2.2 原子荧光检测参考条件13.2.2.1 负高压：330V。13.2.2.2 灯电流：100mA。13.2.2.3 载气流量：400mL/min。13.2.2.4 屏蔽气流量：900mL/min。13.2.2.5 盐酸溶液流速：120r/min。13.2.2.6 硼氢化钾流速：120r/min。13.2.2.7 过硫酸钾溶液流速：110r/min。13.2.2.8 读数模式：峰面积。13.2.3 标准曲线制作分别准确吸取 1.00mg/L 硝苯砷酸标准工作液和 1.00mg/L 洛克沙砷标准工作液 0.00mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL 和 1.20mL，及 1.00mg/L 阿散酸标准工作液 0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL 和 1.00mL 于 6 个 10mL 容量瓶，用水稀释至刻度，此混合标准系列溶液的阿散酸浓度为 0.0g/L，20.0g/L，40.0g/L，60.0g/L，80.0g/L 和 100.0g/L，硝苯砷酸和洛克沙砷浓度均为 0.0g/L，40.0g/L，60.0g/L，80.0g/L，100.0g/L 和 120.0g/L。测定标准系列溶液得到色谱图，以保留时间定性，以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液（100g/L）色谱图见图 E.1。13.2.4 空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。13.2.5 结果计算和表述按式（2）计算试样中阿散酸（或硝苯砷酸或洛克沙砷）残留量，计算结果应将空白值扣除。Xi=（c1 c0）Vm1000V2V1（2）6SN/T23162019式中：Xi试样中被测物的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c1样液中被测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；c0空白液中被测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；V样液体积，单位为毫升（mL）；V1吸取上清液体积，单位为毫升（mL）；V2最终定容体积，单位为毫升（mL）；m最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。14 测定低限和回收率14.1 测定低限阿散酸的测定低限为 0.1mg/kg、硝苯砷酸和洛克沙砷的测定低限均为 0.2mg/kg。14.2 回收率样品添加回收率见附录 D 中表 D.2。7SN/T23162019附 录（资料性附录）微波辅助萃取参考条件微波辅助萃取参考条件见表 A.1。表 A.1 微波辅助萃取参考条件步骤功率/W温度/升温时间/min保留时间/min13005555230060253400651608SN/T23162019附 录 B（资料性附录）电感耦合等离子体-质谱仪器工作条件和测量参数B.1 电感耦合等离子体-质谱仪器工作条件见表 B.1。表 B.1 电感耦合等离子体-质谱仪器工作条件雾化器同心雾化器炬管石英双通道，2.5mm采样锥/截取锥1.0/0.4mm(Ni)锥高频发射功率1300W采样深度7.5mm辅助气流量1.00L/min雾化室石英雾化室温度2载气流量0.65L/min冷却气流量15.00L/min载气补偿气流量0.30L/min待测同位素75AsB.2 用电感耦合等离子体-质谱调谐液(10g/L)7Li，89Y，140Ce，205Tl，59Co 溶液，调整仪器的各种参数，见表 B.2。表 B.2 电感耦合等离子体-质谱仪器测量参数7Li89Y205Tl轴偏移(amu)7.000.1089.000.10205.000.10分辨率(W-10)0.65 0.800.65 0.800.65 0.80灵敏度（cps）330000380000300000氧化物比值156CeO/140Ce：0.5%双电荷比值70Ce+/140Ce+：2%9SN/T23162019附 录 C（资料性附录）阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷混合标准溶液（25g/L）HPLC-ICP/MS 图1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.00 11.00 12.00050100150200250300350400450500550t/minAbundanceTIC:4.D(+,-)图 C.1 阿散酸 2.09min、硝苯砷酸 5.41min、洛克沙砷 7.92min 标准溶液(25g/L)高效液相色谱-电感耦合等离子体/质谱图10SN/T23162019附 录 D（资料性附录）不同样品中阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的添加回收率（n=6）D.1 在 8 种不同基质样品中添加 3 个水平的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷，经高效液相色谱-电感耦合等离子体/质谱仪测定，回收率结果见表 D.1。表 D.1 不同样品中阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的添加回收率（HPLC-ICP/MS）化合物添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%鸡肉鸡肝鸡肾鸡可食用下水猪肉猪肝猪肾猪可食用下水阿散酸0.0182.489.680.186.482.588.581.785.683.688.986.988.681.090.482.392.70.0292.294.382.290.489.393.782.291.587.4109.488.793.682.186.983.9102.50.583.294.684.790.193.9102.582.0104.782.499.782.689.786.789.584.2104.2洛克沙砷0.0189.094.681.893.083.7101.187.999.287.4107.383.189.484.787.986.5101.90.0286.0101.384.793.994.2107.485.2101.781.6102.082.188.890.495.685.2109.40.587.794.284.292.381.796.584.2109.389.3103.983.196.091.796.680.9107.4硝苯砷酸0.0187.192.381.4104.5 92.5106.587.193.787.193.789.9104.288.6104.684.5104.20.0284.498.581.9104.681.997.080.4102.580.4104.387.9104.792.4106.281.7101.90.584.1104.490.4107.0 85.2109.382.391.187.7102.295.4108.789.7107.590.8104.2D.2 在 8 种不同基质样品中添加三个水平的阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷，经液相色谱-原子荧光光谱仪测定，回收率结果见表 D.2。表 D.2 不同样品中阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷的添加回收率（LC-AFS）化合物添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%鸡肉鸡肝鸡肾鸡可食用下水猪肉猪肝猪肾猪可食用下水阿散酸0.181.087.081.087.081.090.080.084.081.091.086.0100.083.091.081.0100.00.286.0102.583.587.080.587.080.587.581.089.582.086.580.587.582.592.50.592.296.481.489.080.292.481.092.481.886.281.892.282.690.283.8103.6洛克沙砷0.283.586.083.595.081.086.581.090.581.089.081.089.081.089.584.088.50.582.688.282.6101.883.487.283.487.082.492.282.885.681.487.285.297.0281.094.181.194.282.186.381.288.181.889.583.689.184.891.180.1101.711SN/T23162019表 D.2（续）化合物添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%/kg）鸡肝鸡肾鸡可食用下水猪肉猪肝猪肾猪可食用下水硝苯砷酸0.281.088.081.088.082.089.583.087.580.087.082.589.582.586.580.086.00.581.887.283.687.881.085.683.486.284.487.881.087.484.298.880.096.4280.786.180.486.382.187.587.7101.280.694.480.589.186.8104.980.696.812SN/T23162019附 录 E（资料性附录）阿散酸、硝苯砷酸和洛克沙砷混合标准溶液（100g/L）LC-AFS 图说明：ASA阿散酸；ROX洛克沙砷；NIT硝苯砷酸。图 E.1 阿散酸 4.05min、洛克沙砷 11.79min、硝苯砷酸 16.87min 标准溶液(100g/L)液相色谱-原子荧光光谱图