附子品质评价及影响因素研究进展_蒲婷婷.pdf

Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化综述附子品质评价及影响因素研究进展蒲婷婷1，王宇飞1，周忠瑜1，严靖婷2，杨燕2，段宝忠1（1.大理大学药学院 大理 671000；2.云南省科学技术院 昆明 650051）摘要：附子为常用的大宗传统药材，其质量关系到用药安全性和有效性。本文对古代及现代附子的品质评价和影响因素进行了系统综述。研究发现，加工过程炮制不规范，以及相关标准缺乏，存在过度炮制，是导致附子饮片质量差异较大的原因；同时附子的质量控制标准不完善，如在附子重金属、农残、二氧化硫等有害物质，以及去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱等强心成分的质量控制方面均较为薄弱，应进一步加强相关研究，建立附子炮制质量规范；此外，种质、产地、栽培方式、采收、加工、贮藏及商品规格等均是影响附子品质的重要因素，这些因素与成分及功效的相关性尚需进一步深入，上述问题的阐明，是附子品质提升和科学评价体系建立的基础。关键词：附子 品质影响因素 有效性 安全性doi:10.11842/wst.20211206011 中图分类号:R283.1 文献标识码:A附 子 为 毛 茛 科 植 物 乌 头 Aconitum carmichaelii Debx.的子根加工品，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛等功效，用于亡阳虚脱，肢冷脉微，心阳不足，胸痹心痛，虚寒吐泻，脘腹冷痛，肾阳虚衰，阳痿宫冷，阴寒水肿，阳虚外感，寒湿痹痛1，是参附注射液、附子理中丸等300余种中成药的重要原料，其年需求量高达3000吨2。然而由于产地、栽培方式、采收时间和加工炮制等因素造成附子质量参差不齐3，严重影响了临床疗效和用药安全。近年来，有关附子的研究不断深入，已有学者对附子的化学成分、药理作用、质量控制等进行了研究4-5，亦有学者从附子的化学评价、生物评价、质量标准、炮制规范和检测方法等角度，对附子的品质评价进行了综述6-7，但尚未见从附子品质的有效性和安全性评价，以及附子品质影响因素的系统综述，限制了对附子品质提升和评价体系建立的认识。鉴于此，本文首次对古代和现代附子品质评价及影响因素进行系统总结，以期为附子品质提升和评价体系的建立提供科学参考。1 古代附子品质评价 古代附子品质评价始载于南北朝时期 雷公炮灸论，其认为底平、有九角、如铁色、一个个重一两，即是气全，堪用；此后宋代从角、节、花色角度评价附子品质，认为蹲坐正节角少，花色白为上；而明代则从肉色、皮色、角和形出发，认为色肉微黄，黑色顶全圆正者佳；清代从附子节、角、花色、皮色、产地和加工等角度，对附子品质评价方法进行了丰富，形成了以形态顶圆正底，角少，肉微黄，皮黑，花白为最佳的认识，详细见表1。2 现代附子品质评价 2.1附子的有效性评价2.1.1化学成分评价紫 外 分 光 光 度 法（Ultraviolet and visible 收稿日期：2021-12-06 修回日期：2022-06-08 云南省科技人才与平台计划院士专家工作站项目（202205AF150026）：滇产高品质中药材种质创新与规范化生产示范研究，负责人：段宝忠；云南省科学技术厅重大科技专项子课题（202002AA100007）：生物数字资源化开发应用，负责人：段宝忠；云南省人才工作领导小组高层次人才培养项目（YNWR-QNBJ-2020-251）：万人“青年拔尖人才”计划，负责人：段宝忠。通讯作者：杨燕，副研究员，主要研究方向：生物医药产业及大数据；段宝忠，教授，主要研究方向：中药资源与种质创新。4189 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 2022 第二十四卷 第十一期 Vol.24 No.11 spectrophotometry，UV）主要用于附子中总生物碱含量的测定，如贝自英等8建立了酸性染料萃取光度法，用于附子中乌头碱和次乌头碱含量的测定，5-25 gmL-1，多位学者亦采用该法对附子及其炮制品中的总生物碱含量9-10和镁含量及溶出率11进行了测定，但由于该法灵敏度和准确性存在较大问题5，2015年版中国药典取消了该法用于总生物碱的检测。红外光谱法（Infrared absorption spectrometry，IRS）被广泛用于附子质量评价研究。如采用近红外光谱（Near-Infrared spectroscopy，NIRS），结合偏最小二乘和最小二乘支持向量机法，对38批附子进行了研究，发现LS-SVM模型的相对预测偏差4.0-8.8，验证集相关系数均在 0.95以上，表明 NIRS可用于附子中的单酯型和双酯型生物碱总量检测12；亦用于附子及炮制品中双酯型生物碱含量的快速测定13。此外，研究发现附子、黑顺片、白附片的近红外光谱特征存在差异14，与吴志生等15研究结果一致。NIRS方法操作简单，无需样品预处理，实现了快速、绿色分析的目的，逐渐得到推广应用。薄层色谱法（Thin layer chromatography，TLC）在中国药典2020年版、韩国药典-06均用于附子质量的评价，见表2；上述标准根据薄层色谱上附子提取液斑点的密度、颜色及位置来评价样品质量。曹玲丽等16建立了生附子中乌头碱的薄层色谱指纹图谱法，发现TLC法的7个特征斑点颜色深浅与HPLC含量测定结果基本相符，可用于生附子质量初步评价。此外，多位学者采用薄层色谱法，对附子中乌头碱分进行分离，发现该法分离效果良好，斑点清晰17-18。TLC法简单易行，准确性和稳定性较理想，但灵敏度低，且无法测定成分的具体含量。高 效 液 相 色 谱 法（High performance liquid chromatography，HPLC）是附子中生物碱成分检测最主要的方法，如2020年版中国药典、中国台湾中药材标准-03和中国香港中药材标准-07，均采用HPLC方法测定，并规定毒性成分含量上限和有效成分下限，详见表2。研究发现“一测多评法”可用于附子药材及同属植物的质量控制19-20，例如，Huang等21采用HPLC-ELSD法同时测定了5种醇胺型二萜生物碱。此外，指纹图谱技术也被用于附子的质量评价，多位学者建立了附子的HPLC指纹图谱，用于附子药材及其炮制品的质量控制22-24；研究显示不同采摘批次的生附子相似度0.9以上，各主要成分组成变化不大，但成分含量存在一定差异25。HPLC具有高速、高灵敏度、高分辨度等优点，因其能同时测定多种成分、结果准确而极受欢迎。液相色谱-质谱联用（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC/MS）被广泛用于附子中生物碱含量的测定。研究显示液相色谱-串联质谱（Liquid chromatography tandem-mass spectrometry，LC-MS/MS）可用于乌头属中药的质量评价26-27，共检测出145个化表1附子历代品质评价年代南北南北吴越宋宋明明清清清清清清清品质评价底平、有九角、如铁色、一个个重一两，即是气全，堪用八月上旬采也，八角者良。其用灰杀之时，有冰强者并不佳附子大短有角平稳而实以八角者为上。岂令人种莳之法，用力倍至，故尔繁盛也附子之形。以蹲坐正节角少为上，有节多鼠乳者次之，形不正而伤缺风皱者为下；附子之色。以花白为上，铁色次之，青绿为下以八月上旬采，八角者良。肆售者以盐水浸之，取其润湿体重卖者，当以体色、干湿度、质地干坚实，顶圆正底平者为良体重而大实，色肉微黄皮黑，气雄壮，取黑色顶全圆正者佳。一枚重一两外，力大可用附子之形以蹲坐正节，而侧子少者为上，有节多乳者次之。形不正而伤缺风皱者为下。其色以花白者为上，黑色者次之，青色者为下皮黑体圆、底平八角、重一两以上者良必正节、角少、顶细、脐正者为上，顶粗、有节、多鼠乳者次之，伤缺偏绉者为下陕西出者为西附，四川出者为川附，川产为胜。以皮黑体圆、底平八角，顶大者良皮黑体圆，底平八角，重三两者良则附子之形，以蹲坐正节角少者为上，有节多鼠乳者次之，形不正而伤缺风皱者为下。之色，花白者为上，铁色者次之，青绿者为下体松而外皮多细块，以皮黑体圆底平，八角顶大者良出处雷公炮灸论本草经集注日华子本草本草图经彰明附子记本草原始药品化义本草崇原本草备要本经逢原本草从新本草求真本草述钩元本草害利4190 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化综述合物以及77个质量标志物28；LC/MS可用于测定没有紫外吸收的胺醇型二萜生物碱含量29；Zhang等30采用UPLC-MS技术从附子中鉴定出99个双酯型生物碱。此外，采用HPLC与电喷雾质谱联用技术检测附子研究显示，双酯型生物碱为附子主要成分，而单酯型生物碱的含量和种类较少31。相比于HPLC，LC/MS技术测定的成分种类、数量更加丰富，还能进一步确定生物碱结构。高效毛细管电泳法（High performance capillary electrophoresis，HPCE）亦被用于附子质量评价。韩乐等32建立了检测附子中新乌头碱、次乌头碱等6种生物碱含量的 HPCE 法，r20.9997，加样回收率 95.25%-103.91%，用于附子类药材内在质量的评价和控制；付昆等33建立了分析附子多糖中单糖组分的高效毛细管电泳法，结果显示该法灵敏度高，分离效果好。此外，Zhao等34发现较之传统方法，HPCE法的分离度好且显著提高分析效率，总分离时间只需13 min，但由于通常HPCE所采用的内径为75 m的毛细管色谱柱光程较短，其灵敏度受到影响。为增加化学成分信号响应强度，采用场放大进样-高效毛细管电泳（Field amplified sample stacking-high performance capillary electrophoresis，FASS-HPCE）法35，对10批附子饮片的指纹图谱进行了研究，结果显示采用FASS富集后，其检测灵敏度明显提高并在18 min内完成测定工作，可用于附子的质量评价。与HPLC法相比，HPCE法分析时间短、杂质干扰少、使用有机溶剂少、操作方便，是一种很有应用前景的分析方法。此外，采用酶联免疫吸附剂测定法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA法），对川乌和附子中双酯型生物碱的含量进行了测定，发现与现行药典收载的表2各主要国家或地区对附子的质量规定标准来源中国药典中国香港中药材标准中国台湾中药材标准日本药典韩国药典指标苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱乌头碱+次乌头碱+新乌头碱苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱乌头碱结乌头碱次乌头碱新乌头碱-质量标准0.010%0.020%0.052%-0.18%0.010%0.020%0.006%0.006%0.028%0.014%斑点密度不能多于标准溶液-污染物监测对象-AsCrPbHg狄氏剂六六六滴滴涕六氯苯黄曲霉毒素总重金属AsPbAs-CrAsHg狄氏剂总六六六艾氏剂异狄氏剂总DDTSO2污染物限量标准（mgkg-1）-2.03.05.00.20.050.310.10.05105105-0.330.20.010.20.010.010.1304191 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 2022 第二十四卷 第十一期 Vol.24 No.11 HPLC法相比，两者检测结果基本一致，但ELISA法测定灵敏度提高了约200倍，该法适用于川乌、附子药材及其饮片中微量甚至痕量双酯型生物碱的检测36。2.1.2生物效应评价附子常见的生物效应包括强心、抗炎、镇痛和抗氧化等。采用大鼠室性早搏最小量测定法，对8种附子炮制品的生物毒性评价显示，生附片醇提液最小中毒剂量远低于其余附片，其次为黑顺片、白附片、刨附片、炮附子及蒸附片；炒附片与炮天雄未检测出心毒性，安全性好37，且 8 种附片均具有明确的强心效果；黑顺片、白附片等 5种附片具有中等强度强心活性，而炮附子与炮天雄强心活性最弱；强心活性验证结果显示去甲乌药碱与去甲猪毛菜碱是强心活性物质38。李立纪等39发现新法加工附子总生物碱高于附片13倍，但两者抗炎、镇痛的效果无明显差异。附子水煎液可以增强老年大鼠血清中的总抗氧化能力（TAA）以及红细胞超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低脑组织脂褐素（LPF）和肝组织丙二醛（MDA）的含量，改善肝细胞膜脂流动性（LFU）40；同样Xu等41也发现附子水煎液可降低心衰标志 ANP，NT-proBNP 等表达，改善慢性心力衰竭情况。上述研究为附子临床早期心脏毒性评价、抗炎镇痛、强心、抗氧化活性与质量控制提供了整体、综合的方法，可作为化学评价方法的有益补充。2.2附子的安全性评价2.2.1内源性有害物质附子的内源性有害物质主要为其所含的毒性成分。现代研究表明，附子中含有大量乌头碱成分，其中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱等双酯型生物碱既是有效又是强毒性成分，苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头原碱等单酯型生物碱为低毒性有效成分，但在大剂量、高浓度条件下也有导致中毒的可能42。中国药典和中国台湾中药材标准规定较为全面，使用上述6种生物碱对附子质量进行评价，但中国药典并未规定其重金属、农残、霉菌素等限量标准，详见表2。日本药典使用4个指标对附子进行质控，规定乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、结乌头碱含量分别低于0.006%、0.028%、0.014%和 0.006%；中国香港中药材标准仅规定3种有效成分之和的范围，尚未对单独成分进行规定。此外，韩国药典采用TLC，利用斑点密度对附子进行质控，其要求明显低于中国药典。2.2.2外源性有害物质外源性有害物质主要包括重金属及有害元素、真菌毒素、残留农兽药、亚硫酸盐以及有机污染物等43。作为国际广泛使用的药材，附子被多个国家药典或地方标准收录。日本药典-17、韩国药典-06、中国香港中药材标准-07、中国台湾中药材标准-03均规定了附子中重金属和农药残留限量，详见表2。中国药典未对附子中重金属等相关指标作限制，依据 药用植物及制剂进出口绿色行业标准，多位学者对市售附子中的重金属及有害元素进行了研究，结果显示中国产区的附子绝大部分符合标准44-47。研究发现种植环境，如土壤，大气、水源、加工等均会影响附子中重金属及有害元素的组成，土壤中的Cd、Cu、Zn等元素容易被附子吸收，而土壤中的 Cr、Pb、Ni、As、Hg相对不易吸收48；同时水质也是影响附子重金属质量浓度的重要因素之一45。此外，研究发现市售附子的胆巴残留量中钙残留较低，但Na、Mg、K残留过大，质量分数分别为88.60，1252.39，7864.12 mgkg-1，建议制定附子相关元素质量分数的限量标准47；附子炮制前后元素变化的结果显示，炮制后Cu、Cr和Ni营养元素的浓度分别增加至1.03，18.90，5.02 gg-1，Pb和Cd含量分别降低44和1.4倍49。目前国内外针对附子农药残留的研究报道较少，仅见对四川省抽检的100批附子进行了研究50，结果显示32批附子SO2残留超标不合格，残留量为210-2079 mgkg-1；有12批次样品检测出喹禾灵，平均检出量为0.03 mgkg-1；1批次样品镉超标，含量为2.99 mgkg-1，表明附子种植中有违规使用农药。综上，外源性物质是影响附子安全性的重要因素，但目前中国药典尚未规定有关指标的检测限量，应进一步加强附子饮片质量标准研究，并完善优质种植基地和中药材溯源体系建设。3 影响附子品质的因素 3.1种质因素种质是影响附子品质的重要因素之一。研究发现，不同品种附子总生物碱和双酯型生物碱含量差异较大，多糖含量差异不显著51。夏燕莉等52、朱彦西等53对附子种质资源的生物学性状和产量进行了比较，筛选出“中附1号”、“中附2号”、“中附3号”、“中附4号”4个优良种质品系，结果表明4个新品种具有良好的丰产4192 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化综述性能，可作为优良株系在生产中应用52-53；此外，缪璐琳等54比较了不同种质附子的水煎液抗炎、镇痛作用，发现四川布拖产大花叶、小花叶型附子和四川江油产小花叶附子的抗炎作用较好；布拖产小花叶附子的镇痛作用最强；高继海等55研究显示小花叶与瓜叶子型附子间，其根表土壤的优势真菌种类、群落多样性均存在差异。综上，不同种质的附子在产量、成分及药效等方面存在差异，因此，筛选培育附子优质种质资源，对保障附子品质和产业可持续发展具有重要意义。3.2产地因素附子在四川、陕西、云南等地均有栽培，土壤及气候的不同是影响附子品质的重要因素。研究表明，不同栽培区附子的浸出物、总生物碱、双酯型生物碱、多糖及蛋白质存在明显差异56-57；四川江油栽培附子的双酯型二萜生物碱远高于云南和湖北58；对20份不同产地的附子生物碱含量的研究显示59，新乌头碱与附子灵在布拖和巍山产区中含量较高，而次乌头碱、尼奥灵、卡米查林、宋果灵等在江油和汉中产区较高；研究还发现不同产区附子中附子灵、尼奥灵和宋果灵3种水溶性生物碱的含量差异较大，其中江油附子中尼奥灵含量明显高于其他产区60，与蒋荡等61的研究结果一致；此外，对四川江油、布拖和云南的黑顺片进行研究，发现指纹图谱相似度大于0.9，化学计量学结果显示，35批样品可聚为3类，四川江油产黑顺片与四川布拖、云南产存在一定差异性62；四川江油产区不同商品之间的相似度均大于0.9，其它产区与四川江油产区比较，相似度小于0.963-64，该研究结果与王晓雅等62结果有一定差异；梅超南等65研究发现，四川产江油附子对维拉帕米注射液诱发的大鼠缓慢型心律失常作用，较四川凉山附子、云南禄劝、陕西汉中等产区强。查阅文献整理了云南、陕西、贵州、四川的 18个县市（以县为单位，同一县如有多个样品取平均值）102批生附子，对其药典指标成分单酯型生物碱（苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱）和双酯型生物碱（新乌头碱、乌头碱和次乌头碱）的平均含量进行分析，结果见图1。可见各产地附子所含双酯型生物碱（图1a）及单酯型生物碱（图1b）的含量不尽相同，表明产地是影响附子品质的重要因素。3.3栽培因素气候、土壤因子及栽培管理方式与附子质量密切相关，且肥沃的土壤有利于产量和质量的提高66。研究显示土壤养分对附子生物碱含量有较大影响，其中全氮和速效磷对附子中双酯型生物碱含量影响作用较大67；在同一气候条件下，不同地块附子生物碱类成分含量存在差异68；适时打顶可以提高附子产量和品质，同时可促进总生物碱、双酯型生物碱及单酯型生物碱的积累69。此外，在生产过程中喷施烯效唑，对附子总生物碱含量无显著影响，但可增加茎粗、叶片数、须根数、干物质量70；6-苄氨基嘌呤和对总生物碱的含量有抑制作用71；萘乙酸可提高附子中新乌头碱和乌头碱的含量，降低次乌头碱的含量；赤霉素和细胞分裂素类对附子生物碱成分影响不大。锌、硼、铁、锰微量元素肥料，对附子生物碱成分含量可产生显著影响72。综上，不同产区气候、土壤及栽培措施，可导致附子化学成分和产量等的不同，实际生产中，需综合 0.0 0.1 0.2 陕西宁强四川安县四川布拖四川江油云南宾川云南大理云南鹤庆云南禄劝云南云龙苯甲酰新乌头碱苯甲酰乌头碱苯甲酰次乌头碱0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 贵州兴义陕西城固陕西勉县四川北川四川布拖四川江油四川平武四川青川四川昭觉云南宾川云南鹤庆云南鲁甸云南禄劝云南巍山云南云龙新乌头碱次乌头碱乌头碱 a b图1各产地样本中主要化学成分含量的总结注：a：各产地样本双酯型生物碱含量的柱状图；b：各产地样本单酯型生物碱的含量柱状图。4193 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 2022 第二十四卷 第十一期 Vol.24 No.11 考虑相关因素。3.4加工方式产地加工是影响附子品质的重要因素之一，不同的加工方法会导致附子的品质差异。生物碱是附子发挥药效的主要成分，但其中的双酯型生物碱具有剧毒，为临床应用所忌惮，因此附子入药前须经加工炮制以降低其毒性。此外，由于新鲜附子易腐烂变质，采收后需趁鲜加工。目前有关附子加工对品质的影响，主要集中在泡胆和不同蒸制方式领域。3.4.1泡胆泡胆加工使用历史悠久，其对附子化学成分含量、饮片形态和物理性质等均会产生影响。研究发现有胆与无胆两种炮制方法，均降低双酯型生物碱含量，但增加单酯型生物碱含量73；泡胆能使双酯型生物碱含量降低74，经胆巴浸泡 20 天后生物碱含量损失70%左右75；匡青芬等76研究发现无胆炮制的4种附子饮片，生物碱指标符合药典规定，毒性双酯型生物碱含量明显低于有胆附片。此外，亦有研究发现泥附子洗净后在胆巴溶液中浸泡，新乌头碱、次乌头碱、乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量逐渐降低，20天以后含量趋于稳定75，并发现浸泡25天后，胆巴含量达到饱和77；附子在10%浓度的胆巴液中浸泡，质量不稳定，在20%及以上浓度质量相对稳定。在胆巴液浸泡过程中，附子的效/毒比也在发生变化，18-24天期间，呈现出活性成分较高，而毒性成分较少的状态，有利于实际生产78。此外，胆巴可对附子起到固形作用，30%浓度是固形的最优浓度79，300 gL-1氯化钠浸泡后得到的附子饮片较佳，还可避免胆巴中的重金属在附子中残留80。还有报道指出，黑顺片与其他无胆及含胆少的附片相比，其对不同脏器毒性也有所不同81，且在黑顺片的炮制过程中，不同炮制阶段胆巴的残留量也会影响黑顺片的毒性82。3.4.2蒸制或煎煮附子毒性大小与加工密切相关，尤其是蒸制或煎煮时间不足或方法不当，是附子中毒的公认原因之一。多位学者对附子加工过程成分动态变化进行了研究，发现附子经煎煮炮制后，双酯型生物碱水解转化为单酯型生物碱及原碱，如焦新乌头碱、焦乌头碱、焦次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等，毒性大大降低83-85。同时，附子煎煮2-10 min后，乌头碱、中乌头碱、次乌头碱等双酯型二萜类生物碱含量较高，而苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱等毒性较小的单酯型生物碱在煎煮60 min内逐渐增加，随后趋于稳定86；附子煎煮2 h后，双酯型生物碱无法检出，单酯型生物碱逐渐升高，在6-8 h达到峰值，后逐渐降低87。综上，适宜的泡胆、煎煮及蒸制可降低附子毒性，一定程度增加有效成分含量，具有减毒增效作用，但胆巴残留量及蒸制时间等显著影响附子药材质量，目前有关炮制标准并未对这些参数进行规定，有待进一步规范。3.5采收时间对不同采收期附子新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量研究显示，随着时间（7-9月）的推移，新乌头碱的含量呈下降趋势，次乌头碱、乌头碱的含量呈上升趋势88。拓亚琴等89对陕西汉中地区不同采收期附子产量、总生物碱和乌头碱含量进行研究，认为8月15日前后为附子的最佳采收时期，此阶段附子的产量最高，含量也符合要求；对四川布拖不同生长期的附子产量和总生物碱含量研究显示，从药材内在质量和产量两方面综合考虑，8月20日-9月10日为附子的最佳采收期90。此外，附子中多糖的含量因采收期不同差异较大，在生长后期含量较高91。3.6贮藏对附子自然堆放、麻袋覆盖、沙藏、冷藏4种贮藏方式下的含水量、生物碱、粗多糖含量变化研究显示，随着贮藏期的延长，其含水量、生物碱成分逐渐降低。冷藏条件下，附子生物碱含量由贮藏初期的1.67%逐渐下降到 1.27%，品质优于比其它储藏方式92；上述4种贮藏条件下，附子的呼吸速率、可溶性蛋白、淀粉含量及淀粉酶活性的研究显示，冷藏处理使附子外形始终完好，含水量维持在64%，保水效果最好，呼吸速率最低，淀粉酶活性最低，可溶性蛋白含量从1.56%上升到2.9%，优于其他方式。生产上有条件的地方应采用低温处理的方法保藏新鲜附子，也可采用沙藏和麻袋覆盖进行短期保存，但水分需保持在50%以上93。3.7不同商品规格附子常见的商品规格有泥附子、盐附子、黑顺片、白附片等1，研究显示不同商品规格其化学成分差异明显，如盐附子中乌头碱的含量明显高于白附片和黑顺片94；蒸附片中单酯型生物碱、原碱和总生物碱的含量明显高于烘附片，但双酯型生物碱含量低于烘附片95。此外，研究表明不同商品规格其药理功效亦有差异，如4194 Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology 世界科学技术-中医药现代化综述生附子可引起心电图异常变化和不同程度的心肌损伤，而黑顺片、白附片导致的心电异常较生附子弱96；强心活性分析结果显示生附片强心作用较强，明显优于黑顺片、白附片等传统饮片规格38；亦有研究发现黑顺片、刨附片、蒸附片、炒附片均具有镇痛、抗炎、提高免疫作用，但各商品规格的作用效果存在差异97；黑顺片抗炎作用优于白附片，抗免疫力作用优于淡附片；白附片的强心、耐缺氧作用较强；炮附片的镇痛效果优于黑顺片98；随着附子质量的增大，双酯型生物碱的含有量呈降低趋势，强心成分呈升高趋势，单酯类生物碱变化不明显；各商品规格镇痛效果无显著性差异99。4 结论与展望 附子作为传统大宗中药，其品质对临床用药的有效性和安全性意义重大，目前中国药典对其毒性成分上限和活性成分下限进行了规定，但未规定双酯型生物碱的最低含量，这导致附子饮片中的双酯型生物碱含量普遍很低，且不同厂家相差很大。已有多项研究表明，在附子加工过程中，双酯型乌头碱分解为乌头原碱，强心功效显著降低100，且存在炮制过度的现象，难于保证临床用药的有效性101。另外已有药效研究表明，去甲乌药碱与去甲猪毛菜碱是附子的主要强心成分38，但目前尚缺乏这些成分与附子品质的相关研究，因此对附子品质评价指标及其限量应开展更深入系统的研究。多个国际标准均已规定了农残、重金属、SO2等外源性有害物质的限量，但目前中国药典尚未对附子的外源性有害物质进行规定，应加强这方面的研究，为附子进入国际贸易市场提供依据。同时，附子的药效和毒性等相关研究比较有限，现有资料还不能完全揭示其“回阳救逆”的功能本质，且当前附子加工缺乏统一炮制规范，导致其饮片质量参差不齐，胆巴残留、生物碱含量差异较大102，应加强相关基础研究，明确附子毒性和药效相关成分。在继承传统的基础上，对附子炮制工艺参数进行优化和确定，最大程度上保留有效成分、降低毒性，保证饮片质量的稳定、可控。此外，种质、产地、加工、栽培及采收等因素对附子品质的形成具有重要影响。鉴于上述分析，今后应进一步加强附子质量标准的研究，健全质量控制体系建设，如将强心活性成分去甲乌药碱和去甲猪毛菜碱等，作为附子质量控制指标之一，并对胆巴、农药和重金属残留限量等进行明确，以保障临床用药安全；其次，确定附子炮制过程中泡胆、蒸煮、晾晒等工艺的具体时间，保证饮片质量的均一性；加强附子优质种质的筛选培育，探究品质与其影响因素的作用机制，保障附子产业的可持续发展，制定科学规范的种植和加工技术体系，确保附子优质原料和药材饮片的供应，以满足市场对高品质附子的需求。参考文献 21国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京,中国医药科技出版社,2020：200.2商务部市场秩序司.中药材流通市场分析报告(2016)Z.(2017-07-20).http:/ G,Tang L,Zhou X,et al.A review on phytochemistry and pharmacological activities of the processed lateral root of 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