基于网络药理学分析白头翁治疗奶牛乳腺炎的作用机制.pdf

李雄婕，严作廷，曹随忠.基于网络药理学分析白头翁治疗奶牛乳腺炎的作用机制J.中兽医医药杂志，2023，42（5）：51-56近年来，中国奶牛养殖业发展迅速，乳腺炎尤其是隐性乳腺炎，对牧场的经济效益造成了巨大影响。引起乳腺炎的病因复杂，主要与遗传、病原微生物感染和饲养管理等多个因素有关，其中信号通路的活性状态与乳腺炎的易感性密切相关，研究表明NF-B及其信号通路的激活与乳腺炎的发生相关1。中药在畜禽疾病防治方面使用广泛，其中白头翁在奶牛乳腺炎的防治中受到广泛关注，但以现有研究成果来看，其治疗机制的探索局限于白头翁中的某种活性成分，白头翁治疗奶牛乳腺炎相关机制分析并不全面。白头翁味苦、性寒，具有清热解毒和凉血止痢之功效，现代药理学试验表明，白头翁有行瘀散结作用，可治疗乳腺增生2。研究最多的白头翁活性成分之一白头翁皂苷B4对CCl4致小鼠急性肝损伤具有保护作用，该作用与抑制 TLR-4/NF-B信号通路介导的炎症反应及抗氧化应激作用有关3。研究发现白头翁皂苷B4可显著促使临床型奶牛乳房炎血清炎性因子CRP、SAA、HP、IL-1、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-和免疫因子IgA、IgD、IgE、IgG、IgM恢复到正常水平4。本研究旨在应用网络药理学研究方法探究白头翁多种活性成分对奶牛乳腺炎的治疗作用机制，为白头翁的临床应用提供依据。1材料与方法1.1药物-疾病-靶点网络图的构建利用中药系统药理学分析数据库TCMSP（http：/ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php）检索白头翁所有化学成分，依据药代动力学参数（ADME），按照OB30%、DL0.18进行筛选。将取得的SMILES结构式置于相收稿日期：2022-09-01；网络首发时间：2023-07-07网络首发链接：https：/ X 受体（LXRs）、雌激素受体 1（ESR1）、Toll样受体等关键基因靶点，对促分裂原活化蛋白激酶（MARK）信号通络、蛋白酪氨酸激酶（JAK）-转录活化因子（STAT）信号通路、磷酯酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（AKT）、核因子 B（NF-B）信号轴等通路及 T细胞膜糖蛋白分子CD4、细胞色素 P450、一氧化氮合酶 NOS2等基因进行靶点调控，从而发挥降低炎症反应、调节乳腺上皮细胞生长的作用，达到对乳腺炎的治疗效果。通过网络药理学研究方法探索白头翁活性成分、药物和疾病影响靶标及其映射关系，分析药物治疗疾病的影响通路，为奶牛乳腺炎的治疗提供参考。关键词：白头翁；奶牛乳腺炎；蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图；KEGG信号通路 51Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine2023年42卷第5期Vol.42 No.5 2023似化合物集合数据库SEA（https：/sea.bkslab.org/），查询活性物质对应靶点基因，整理符合条件的白头翁活性化合物及其对应靶点，求得药物对应的基因靶点并集。利用 GenBank 数据库（http：/www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）搜索奶牛乳腺炎相关词条乳腺炎、炎症，求得疾病基因靶点并集。药物对应靶点集合与疾病对应靶点集合求交集得到共同靶点，运用Cytoscape软件进行网络图绘制。1.2蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络的构建将白头翁和奶牛乳腺炎疾病的共同靶点基因上传至STRING10.5软件（https：/string-db.org/），输出白头翁作用于奶牛乳腺炎的蛋白质-蛋白质互相作用（PPI）网络图。1.3KEGG通路富集通路图的构建将白头翁和奶牛乳腺炎疾病的共同靶点基因上传 至 注 释、可 视 化 和 集 成 发 现 的 数 据 库 DAVID（https：/david.ncifcrf.gov/），输出与相关靶点匹配的反应通路。2结果2.1药物-疾病-靶点网络图的构建利用中药系统药理学分析数据库，从白头翁266个相关活性化合物中筛选出11个符合条件的活性化合物（见表 1），利用 SEA 数据库淘汰 3 个无法查询SMILES结构式的化合物，对保留的8个化合物进行下一步分析。根据查询化合物的SMILES结构式，在爱化学网站（http：/ acetate（-谷甾醇乙酸酯）、aureusidin（金鱼草素）、lanosterol（羊毛甾醇）、peltatin（鬼臼素）、mairin（白桦脂酸）、isorhamnetin（异鼠李素）、-谷甾醇、stigmasterol（豆甾醇），8 种化合物在SEA数据库中分别求靶点，统计得到381个不重复基因靶点；奶牛乳腺炎相关的疾病词条乳腺炎、炎症共匹配到567个基因靶点；与疾病、活性化合物匹配的共同靶点共有 63 个，构建网络图（图 1，见封二彩图）。将化合物对应靶点数量作为其重要性的参考，改变形状大小用于提示，随重要性由大到小进行形状尺寸的表1白头翁有效活性成分及其SMILES结构式Table 1Active ingredients and SMILES structure of Pulsatilla chinensis分子IDMOL001971MOL001973MOL001978MOL001979MOL001984MOL001985MOL001987MOL000211MOL000354MOL000358MOL000449分子名称pulchinenoside C_qt-谷甾醇乙酸酯金鱼草素羊毛甾醇3beta，23-Dihydroxy-lup-20（29）-ene-28-O-alpha-L-rhamnopyranosyl-（1-4）-beta-D-glucopyranosyl（1-6）-beta-D-glucopyranoside_qt鬼臼素-sitosterol白桦脂酸异鼠李素-谷甾醇豆甾醇OB/%37.7940.3953.4242.1237.5956.3833.9455.3849.6036.9143.83DL0.760.850.240.750.790.870.700.780.310.750.76SMILESCCC（CCC（C）C1CCC2C1（CCC3C2CC=C4C3（CCC（C4）OC（=O）C）C）C）C（C）CC1=CC（=C（C=C1/C=C2/C（=O）C3=C（C=C（C=C3O2）O）O）O）OCC（CCC=C（C）C）C1CCC2（C1（CCC3=C2CCC4C3（CCC（C4（C）C）O）C）C）CCOC1=CC（=CC（=C1OC）OC）C2C3C（CC4=C（C5=C（C=C24）OCO5）O）COC3=OCC（=C）C1CCC2（C1C3CCC4C5（CCC（C（C5CCC4（C3（CC2）C）C）（C）C）O）C）C（=O）OCOC1=C（C=CC（=C1）C2=C（C（=O）C3=C（C=C（C=C3O2）O）O）O）OCCC（CCC（C）C1CCC2C1（CCC3C2CC=C4C3（CCC（C4）O）C）C）C（C）CCCC（C=CC（C）C1CCC2C1（CCC3C2CC=C4C3（CCC（C4）O）C）C）C（C）C 52李雄婕，严作廷，曹随忠.基于网络药理学分析白头翁治疗奶牛乳腺炎的作用机制J.中兽医医药杂志，2023，42（5）：51-56正向变化，可见活性化合物中重要性最强的是异鼠李素（isorhamnetin），其作用靶点用黄色表示。将基因靶点按照连接药物活性化合物的边数进行排序，作为其重要性程度参考，随重要性由大到小进行形状尺寸的正向变化，可见其中较为重要的基因靶点为细胞色素P450酶1（CYP19A1）、雌激素受体1（estrogen receptor，ESR1）、孕烷 X 受体（NR1H2）、组成型雄甾烷受体（NR1H3）、法尼醇X受体（NR1H4）、糖皮质激素受体（NR3C1）、一氧化氮合酶2（NOS2）。2.2蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络的构建PPI 网络中有相互作用能力的蛋白质靶点共计60个，按照相互作用关系绘制PPI网络图（图2，见封二彩图），并按各靶点基因节点相互作用关系数量指标degree大小表征形状大小的变化，相互作用关系越多，处于关键位置的靶点基因形状越大。可见其中蛋白激酶B（AKT1）、T细胞膜糖蛋白分子CD4、血管内皮生 长 因 子（VEGFA）、STAT3、表 皮 生 长 因 子 受 体（EGFR）、Toll样受体4（TLR4）、SRC激酶、基质金属蛋白9（MMP9）这8个靶点基因调控的蛋白与剩余52种基因调控的蛋白联系较多，推测与疾病治疗相关性较大。2.3KEGG通路富集通路图的构建白头翁作用于奶牛乳腺炎的 KEGG信号通路中共富集到疑似相关通路52条，去除无关通路，可见其中目标基因占比高于10%的有10条（表2）。按照目标靶点基因所占各通路组成基因的比例绘制气泡图（图3），可见癌症通路比例达31%，癌症中的蛋白聚糖通路、PI3K-Akt信号通路、趋化因子通路中目标基因所占通路涉及基因比例均在20%以上。对所有富集到的疑似相关通路做基因分析统计，用数据透视表求出各靶点基因被富集总次数，共计12个基因富集次数在 10 次及以上，其中磷脂酰肌醇-3 激酶催化亚基（PIK3CA）、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基（PIK3CD）、磷 脂 酰 肌 醇-4，5-双 磷 酸-3 激 酶 催 化 亚 基（PIK3CG）富集次数均达 40 次，AKT1 富集次数达36次。根据药物结构相关性进行比对，将白头翁的8种活性成分与上文所得的63个白头翁与奶牛乳腺炎的共同基因靶点进行作用关系匹配，发现能匹配3个以上活性化合物的基因靶点有18个（见表3），且与活性化合物相互作用最多的靶点是 CYP19A1、NR3C1、NR1H4、ESR1。表2KEGG富集通路图中目标基因占比高于15%的通路Table 2The pathways where target genes accounted for more than 15%in KEGG enrichment pathway map通路对象PI3K-Akt信号通路趋化因子信号通路HIF-1信号通路Toll样受体信号通路Ras 信号通路催乳素信号通路雌激素信号通路T细胞受体信号通路TNF信号通路胰岛素抵抗通路数量15131211111010101010比例/%23.4420.3118.7517.1917.1915.6315.6315.6315.6315.63目标靶点SYK，PIK3CD，FGF2，MTOR，IL2，EGFR，PIK3CG，NFB1，VEGFA，PIK3CA，AKT1，TEK，IKBKG，TLR4，TLR2CXCL12，CXCR1，PIK3CA，SRC，CXCR3，STAT3，PIK3CD，AKT1，IKBKG，CCR4，PIK3CG，NFB1PIK3CA，NOS2，STAT3，PIK3CD，AKT1，TEK，TLR4，EGFR，PIK3CG，NFB1，MTOR，VEGFATLR1，MAPK8，PIK3CA，PIK3CD，AKT1，IKBKG，FOS，TLR4，PIK3CG，NFB1，TLR2MAPK8，PIK3CA，PIK3CD，AKT1，IKBKG，TEK，FGF2，EGFR，PIK3CG，NFB1，VEGFAMAPK8，PIK3CA，SRC，STAT3，PIK3CD，AKT1，FOS，ESR1，PIK3CG，NFB1PIK3CA，SRC，MMP2，PIK3CD，AKT1，FOS，ESR1，MMP9，EGFR，PIK3CGCD4，IL5，PIK3CA，PIK3CD，AKT1，IKBKG，FOS，IL2，PIK3CG，NFB1MAPK8，PIK3CA，MMP3，PIK3CD，AKT1，IKBKG，FOS，MMP9，PIK3CG，NFB1MAPK8，PIK3CA，NR1H2，STAT3，PIK3CD，AKT1，NR1H3，PIK3CG，NFB1，MTOR 53Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine2023年42卷第5期Vol.42 No.5 20233讨论3.1白头翁参与抗炎的活性成分异鼠李素是槲皮素的直接衍生物，可以通过抑制NF-B信号通路5、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）6通路减少中性粒细胞的浸润，并能抑制模式识别受体和促炎因子的表达，起到抗炎、抗氧化、抗过敏等作用7。朱敏等8在用卵清蛋白诱导的哮喘模型小鼠肺组织病理学变化的实验中，发现异鼠李素能降低CysLT1、CysLTR1、IL-4、IL-5、IL-13和TNF-等炎性因子的含量8。另外，研究表明豆甾醇可能通过介导糖皮质激素而表现出抗炎作用9，可使中性粒细胞增多，以及在局部应用TPA诱导的血清中出现TNF-水平降低10，对NF-B途径有抑制作用11，对GABA受体存在正调控作用12。3.2重要靶点及通路3.2.1疾病、药物的重要共同靶点PPI网络图显示，白头翁的8种活性化合物对CYP19A1、ESR1、NR1H2、NR1H3、NR1H4、NR3C1、NOS2 等基因表达均有调控作用。研究表明，在Th1和Th2细胞介导的1型免疫和2型免疫中，大多数细胞色素酶（CYPs）存在活性下降的现象，同时该酶可能受肝X受体的调控13。肝X受体（LXRs）为一种孤核受体，是配体激活的转录因子，在调节某些基因分化、合成和代谢中发挥关键作用，NR1H4、NR1H2、NR1H3、维生素 D受体（NR1H1）为其中4种亚型。LXRs活化后可促进限速酶CYP7A1表达，可以抑制NF-B活性以及LPS等炎性物质引起的多种炎症反应14。雌激素受体1（ESR1）的基因突变与乳腺增生症发生相关15。NOS2作为自由基NO合成酶，其活性变化直接调节NO生成量及其生物学效应，NO对氧自由基的损伤效应起放大作用，进而引起炎症反应和组织损伤16。3.2.2PPI网络及KEGG通路中关键靶点和通路CD4是一种主要在T淋巴细胞、单核细胞和树突细胞上表达的膜糖蛋白分子，可与主要组织相容性复合体类分子多肽区结合而参与T细胞受体识别抗原的信号转导17。表皮生长因子受体（EGFR）JAKs 和 STATs信号传导通路 EGFR 配体可以激活转录活化因子STAT1、STAT3和STAT5。EGFR和乳腺癌预后判断因子（Her2）在乳腺组织中过度表达可促进Src激酶基因调节自身活性，Src激酶是催乳素受体表达增加及下游信号成功表达所必须的，同时Src激酶基因能够激活STAT5，后者的缺失会影响乳腺的发育和乳汁的分泌18。JAK2/STAT3通路系统可调节EGFR的转录功能19，苦杏仁苷可通过 JAK2-STAT3 通路调控 CD4+/表363个白头翁和奶牛乳腺炎的共同靶点与白头翁8种活性成分的对应关系Table 3Correspondence between 63 common targets ofPulsatilla chinensis&dairy cow mastitis and 8 activecomponents of Pulsatilla chinensis作用靶点CYP19A1NR3C1NR1H4ESR1NR1H2NOS2PTGER2VDRF2NR1H3PIK3CGTERTIL2FGF2POLA1ABCB11Srd5a1PGR-谷甾醇乙酸酯金黄色葡萄球菌素羊毛甾醇鬼臼素白桦脂酸异鼠李素-谷甾醇豆甾醇合计655544443433333333表示活性成分与目标靶点之间存在调控作用 indicated that there was a regulatory effect between the activeingredient and the target图3通路富集气泡图Figure 3Bubble diagram of channel enrichment 54李雄婕，严作廷，曹随忠.基于网络药理学分析白头翁治疗奶牛乳腺炎的作用机制J.中兽医医药杂志，2023，42（5）：51-56CD8+T细胞介导炎症20。JAK2/STAT3信号通路是多种细胞因子和生长因子在哺乳动物体内进行信号转导的重要通路之一，通过激活该通路对下游基因进行调控，能够影响细胞增殖、分化、迁移、凋亡等，从而对造血、免疫、发育、脂肪合成等生理反应进行调控。Toll 样受体 4（TLR4）在免疫系统中发挥关键作用，参与介导机体对病原体引起的炎症反应，在淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、多形核白细胞和脾细胞中高度表达。TLR4激活后，在细胞质内形成复合体，经NF-B活化转移至细胞核，介导炎症和Th1/Th2分化调节21。牛乳腺上皮细胞中NF-B的亚基P65过表达后，可以促进基质金属肽酶9（MMP9）蛋白表达，表明在牛乳腺上皮细胞中MMP9的表达可受转录水平调节22，MMP9 能促进脑微血管内皮细胞（BMECs）增殖和迁移，其基因表达可被PI3K/AKT哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和MAPK信号通路调节，促进奶牛乳腺上皮细胞增殖23，参与乳腺重塑，使乳腺发育逐步积累，提高奶牛乳产量。B细胞轻肽基因增强子核因子1（NF-B1）基因启动子区-94 ins/del ATTG多态性位点能够显著影响p50 亚基的表达，p50 能够与 p65 组成异源二聚体NF-B，广泛参与免疫应答、细胞黏附、分化增殖以及细胞凋亡等，故NF-B1可影响NF-B信号通路P50蛋白的表达水平，从而影响通路的活化水平24。NF-B信号通路可对TNF-进行正向调节25。p38 MAPK是无乳链球菌溶血素CylE基因调节免疫力的途径，可以被识别和纯化，成为阻断信号通路的新靶点，从而提高预防和治疗牛乳腺炎的有效性26。3.3白头翁治疗奶牛乳腺炎的关键靶点及通路的网络分析综上所述，关键靶点、通路大多与体内免疫相关，另外，STAT、MMP9、LXRs、MARK与雌激素、乳腺发育等生理功能直接相关，LXRs、EGFR、PI3K/Akt信号通路与癌症发生相关，推测白头翁治疗奶牛乳腺炎机制为在白头翁中以异鼠李素为主的各活性成分的作用下，通过影响EGFR、LXRs、ESR1、Toll等关键靶点，对MARK、JAK-STAT、PI3K-ATK、NF-B 等通路及 CD4、P450、NOS2等靶点进行调控，降低炎症反应，调节乳腺上皮细胞生长，从而发挥治疗奶牛乳腺炎的作用。参考文献1李宇航，罗仍卓么，王兴平，等.NF-B信号通路调控奶牛乳腺炎的分子作用机制 J.畜牧兽医学报，2021，52（10）：2740-2752.2张翠贞.白头翁治疗乳腺增生 J.中医杂志，2006（12）：895.3杨帆，魏小果，赵鑫，等.白头翁皂苷B4对四氯化碳致急性肝损伤模型小鼠的保护作用及机制研究 J.中药材，2021，44（12）：2938-2942.4沈留红，钱柏霖，尤留超，等.白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎疗效和血清炎性因子、免疫因子的影响 J.浙江农业学报，2021，33（7）：1184-1191.5李扬，沈冰玉，田野，等.异鼠李素通过下调NF-B通路缓解炎症反应 C/中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集.长沙，2015.6闫姗，王晓坤，杨林燕，等.异鼠李素的抗炎作用研究进展 J.甘肃科技，2020，36（13）：115-118.7MULATI A，ZHANG X，ZHAO T，et al.Isorhamnetinattenuates high-fat and high-fructose diet induced cognitiveimpairments and neuroinflammation by mediating MAPK andNF-B signaling pathways J.Food Funct，2021，12（19）：9261-9272.8朱敏，赵丽敏，王培，等.异鼠李素抑制卵清蛋白诱导的哮喘小鼠肺部炎症 J.中国病理生理杂志，2021，37（1）：106-111.9MORGAN L V，PETRY F，SCATOLIN M，et al.Investigation of the anti-inflammatory effects of stigmasterol in mice：insight into its mechanism of action J.Behavioural Pharmacology，2021，32（8）：640-651.10ANTWI A O，OBIRI D D，OSAFO N，et al.Stigmasterolalleviates cutaneous allergic responses in rodentsJ.BioMed Research International，2018，2018：3984068.11GABAY O，SANCHEZ C，SALVAT C，et al.Stigmasterol：a phytosterol with potential anti-osteoarthritic properties J.Osteoarthritis and Cartilage，2010，18（1）：106-116.12KARIM N，KHAN I，ABDELHALIM A，et al.Stigmasterolcan be new steroidal drug for neurological disorders：evidenceof the GABAergic mechanism via receptor modulationJ.Phytomedicine，2021，90：153646.13虞茜，李巍.炎症性疾病中细胞色素P450表达调控的研究进展 J.大连医科大学学报，2017，39（1）：87-91.14王宇超，袁荣志，胡啸竹.肝X受体与炎症的关系 J.中国动物保健，2016，18（6）：74-75.15陶苹，田超，李卉，等.乳腺增生症与ESR1基因遗传多态性的相关性研究 J.四川医学，2012，33（12）：2041-2043.16尹柏双，李静姬，呼显生，等.自由基氧化损伤与奶牛乳房 55Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine2023年42卷第5期Vol.42 No.5 2023炎关系的研究 J.动物医学进展，2011，32（10）：50-53.17许金根，赵磊，顾有方，等.猪CD4基因多态性及生物信息学分析 J.基因组学与应用生物学，2018，37（11）：4736-4741.18刘文艳，鞠志花，刘顺德，等.Src基因研究进展 J.家畜生态学报，2010，31（2）：87-90.19于晓棠，张帆，陆世伦.EGFR-STAT3信号转导通路在大鼠实验性肝内胆管细胞癌发生中的作用 J.中国肿瘤，2011，20（6）：457-461.20毛凯荣，田岳凤，支博远，等.JAK2/STAT3信号通路调节机体免疫功能及针灸干预效应分析 J.中医药学报，2022，50（3）：80-85.21魏然，姚玉廷.TLR4/NF-B信号通路在鼻炎灵治疗过敏性鼻炎中的作用分析 J.解放军医药杂志，2022，34（1）：109-112.22汤云飞.MMP9对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的作用研究 D.哈尔滨：东北农业大学，2019.23苏晨，毛永尽，杨慧琳，等.牛 MMP9启动子与转录因子NF-B作用的研究 J.中国乳品工业，2021，49（12）：4-7.24周韵.氧化应激损伤中NF-B1多态性对NF-B信号通路及细胞凋亡的分子机制研究 D.乌鲁木齐：新疆医科大学，2016.25CHEN T L，ZHU G L，WANG J A，et al.Protective effectsof isorhamnetin on apoptosis and inflammation in TNF-induced HUVECs injury J.Int J Clin Exp Pathol，2015，8（3）：2311-2320.26布日额，吴金花，锡林高娃，等.牛乳腺炎无乳链球菌溶血素CylE基因对牛巨噬细胞炎性细胞因子的转录和表达及对信号通路MAPK的影响机制研究 J.中国病原生物学杂志，2021，16（10）：1178-1182.Analysis on the mechanism of Pulsatilla chinensis in treating dairy cowmastitis based on network pharmacologyLI Xiongjie1,YAN Zuoting2,CAO Suizhong1(1.College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Chengdu Sichuan 611130,China;2.LanzhouInstitute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS,Lanzhou Gansu 730050,China)Abstract:Using network pharmacological research method,this experiment tried to reveal the active components,targets,gene functions and signal pathway mechanism of Pulsatilla chinensis in treating mastitis of dairy cows.Themechanism of Pulsatilla chinensis in treating cow mastitis was described by comprehensive data analysis of the chemicalcomponents and target sites of Pulsatilla chinensis,drug-disease-target network map,protein-protein interaction(PPI)network map and target-pathway bubble map.Based on the data results,the active components of Pulsatilla chinensis,mainly isorhamnetin,affect key gene targets such as epidermal growth factor receptor(EGFR),liver X receptor(LXRs),estrogen receptor 1(ESR1)and Toll-like receptor to stimulate mitogen-activated protein kinase(MARK)signalingpathways,protein tyrosine kinase(JAK)-transcriptional activation factor(STAT)signaling pathways,phosphoinositol-3kinase(PI3K)/protein kinase B(AKT),nuclear factor B(NF-B)signaling axis,and gene target of T cell membraneglycoprotein molecules CD4,cytochrome P450,nitric oxide synthase NOS2 and other genes.These actions play the roleeffects in reducing inflammation and regulating the growth of mammary epithelial cells to treat mastitis.The results canprovide reference for the treatment of cow mastitis.Keywords:Pulsatilla chinensis;mastitis in dairy cows;protein-protein interaction network(PPI);KEGG signalingpathway 56