麻风分枝杆菌的实验室检查.ppt

麻风分枝杆菌的实验室检查麻风分枝杆菌的实验室检查一、临床意义一、临床意义n（1 1）麻风病人的诊断；麻风病人的诊断；n（2 2）麻风病人的疗效观察；麻风病人的疗效观察；n（3 3）确定三联化疗治疗方案；确定三联化疗治疗方案；n（4 4）判断预后、确定复发；判断预后、确定复发；n（5 5）科科研研。如如鼠鼠足足垫垫接接种种、药药物筛选等。物筛选等。二取材部位的选择二取材部位的选择n n （1 1）常常规规查查菌菌部部位位:眉眉弓弓、耳耳垂垂、下颌、皮损。下颌、皮损。n （2 2）结结节节取取中中央央、斑斑块块取取边边缘缘交界处。交界处。n （3 3）不不要要选选择择冻冻疮疮、溃溃疡疡、裂裂口口和结痂部位。和结痂部位。麻风面部结节伴巩膜麻风瘤 三取材方法三取材方法n（1 1）消毒。消毒。n（2 2）使局部贫血。使局部贫血。n（3 3）伤伤口口长长约约5 5毫毫米米、深深约约2-32-3毫米。毫米。n（4 4）止血。止血。n（5 5）取取足足够够的的组组织织液液。（不不得得少于绿豆大小。）少于绿豆大小。）四涂片四涂片n（1 1）以以4545度度角角将将皮皮肤肤组组织织液液均均匀匀地地涂涂布布于于载载玻玻片片上上，涂涂点点大大小小7 7毫米。毫米。n（2 2）自自然然干干燥燥后后妥妥善善保保管管，防防蚊蚊蝇蝇吃吃掉掉，防防玻玻片片断断裂裂，注注意意编编号号，查查对对真真实实姓姓名名，保保证证玻玻片片编编号及姓名与真实姓名吻合。号及姓名与真实姓名吻合。n（3 3）防止混血和污染。防止混血和污染。麻风病人面部温度示意图 耳垂取材操作图 组织液涂片操作图 五染片五染片 n n（1 1）染液配制：）染液配制：n n A A 石石碳碳酸酸复复红红液液，取取碱碱性性复复红红4 4G G，溶溶于于95%95%酒酒精精100100MLML中中制制成成饱饱和和液液。再再取取饱饱和和液液1010MLML与与5%5%石碳酸液石碳酸液9090MLML混匀即成。混匀即成。n n B B 1%1%的的盐盐酸酸酒酒精精，取取浓浓盐盐酸酸1 1MLML，70%70%酒酒精精9999MLML混匀即成。混匀即成。n n C C 碱碱性性美美兰兰液液，取取美美兰兰2 2G G，溶溶于于95%95%酒酒精精100100MLML中中制制成成饱饱和和液液，再再取取饱饱和和液液3030MLML加加入入蒸馏水蒸馏水100100MLML及及10%10%的氢氧化钾的氢氧化钾0.10.1MLML混匀即成。混匀即成。n n（2 2）染色染色：n n A A 固固定定，以以钟钟摆摆的的速速度度将将涂涂片片通通过过酒精灯火焰中部酒精灯火焰中部3 3次。次。n n B B 滴入足够的石碳酸复红液（将滴入足够的石碳酸复红液（将涂膜全部覆盖）于玻片涂片上，加热使涂膜全部覆盖）于玻片涂片上，加热使冒气，保持冒气，保持1010分钟。分钟。n n C C 待冷后用水冲去玻片上的染液，待冷后用水冲去玻片上的染液，1%1%的盐酸酒精脱色的盐酸酒精脱色10-3010-30秒，以涂膜呈极秒，以涂膜呈极淡红色或无色为宜。用水冲去脱色剂。淡红色或无色为宜。用水冲去脱色剂。n n D D 加加美美兰兰液液复复染染半半至至一一分分钟钟，水水洗，自然干燥。洗，自然干燥。六镜检六镜检 n n （1 1）麻麻风风杆杆菌菌形形态态：麻麻风风杆杆菌菌一一般般为为短短小小直直棒棒状状或或稍稍有有弯弯曲曲，长长约约1-81-8微微米米，宽宽约约0.3-0.40.3-0.4微微米米。没没有有鞭鞭毛毛、芽芽胞胞和和荚荚膜膜。麻麻风风杆杆菌菌具具有有抗抗酸酸性性，即即具具有有抵抵抗抗稀稀酸酸类类脱脱色色剂剂脱脱色色作作用用的的性性质质。抗抗酸酸性性是是麻麻风风杆杆菌菌的的一一个个重重要要特特征征。麻麻风风杆杆菌菌革革蓝蓝氏氏染染色色呈呈阳阳性性。麻麻风风杆杆菌菌另另一一个个重重要要特特点点就就是是多多形形性性。未未经经治治疗疗的的早早期期病病人人或或复复发发病病人人其其形形态态较较为为完完整整。治治疗疗后后多多为为断断裂裂或或颗颗粒粒形形。此此外外麻麻风风杆杆菌菌数数量量较较多多时时往往往往集集簇簇存在，形成菌团或菌束。存在，形成菌团或菌束。抗酸染色镜下的麻风杆菌 抗酸染色镜下的麻风杆菌n n （2 2）镜镜检检方方法法：涂涂片片自自然然凉凉干干后后放放入入分分辨辨率率较较高高的的显显微微镜镜上上，先先用用低低倍倍镜镜对对焦焦，找找到到涂涂膜膜中中间间部部分分，然然后后移移去去低低倍倍镜镜，放放入入镜镜油油，换换上上油油镜镜，以以弓弓字字形形方方式式逐逐一一检检视视整整个个涂涂膜膜，按按雷雷德德里里记记数数标标准准计计算算结结果果。要要求求，阳阳性性涂涂膜膜至至少少检检视视50 50 个个视视野野，阴阴性性涂涂膜膜至至少检视少检视200200个视野。个视野。（3）雷德里计数标准：n n0=0=0=0=观察观察观察观察100100100100个油镜视野未查见个油镜视野未查见个油镜视野未查见个油镜视野未查见MLMLMLML。n n1=1=1=1=观察观察观察观察100100100100个油镜视野查见个油镜视野查见个油镜视野查见个油镜视野查见1-101-101-101-10条条条条MLMLMLML。n n2=2=2=2=观察观察观察观察100100100100个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，平均每平均每平均每平均每10101010个视野有个视野有个视野有个视野有1-101-101-101-10条条条条MLMLMLML。n n3=3=3=3=观察观察观察观察25252525个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，平均每视野有平均每视野有平均每视野有平均每视野有1-101-101-101-10条条条条MLMLMLML。n n4=4=4=4=观察观察观察观察25252525个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，平均每视野有平均每视野有平均每视野有平均每视野有10-10010-10010-10010-100条条条条MLMLMLML。n n5=5=5=5=观察观察观察观察25252525个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，平均每视野有平均每视野有平均每视野有平均每视野有100-1000100-1000100-1000100-1000条条条条MLMLMLML。n n6=6=6=6=观察观察观察观察25252525个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，个油镜视野，平均每视野有平均每视野有平均每视野有平均每视野有1000100010001000或或或或1000100010001000条以上条以上条以上条以上MLMLMLML。平均每视野有平均每视野有100-1000100-1000条条MLMLn n n n（4 4）BIBI指数（细菌指数）计算公式：指数（细菌指数）计算公式：n n 各涂膜各涂膜BIBI总和总和 n nBI BI（细菌指数）（细菌指数）=n n 涂膜数涂膜数：n（5）菌团细菌数的估计方法：n n 细细菌菌计计数数时时，经经常常会会遇遇到到菌菌球球或或菌菌团团，因因此此需需按按照照菌菌团团或或菌菌束束的的大大小小估估计计其其细细菌菌数数。一一般般大大菌菌球球约约百百条条细细菌菌，中中菌菌球球约约5050条条细细菌菌，小小菌菌球球约约2020条条细细菌菌。能能直直接接计计数数的的尽尽量直接计数。量直接计数。麻风分枝杆菌形成的菌团 七报告七报告 n n （1 1）麻麻风风病病细细菌菌学学检检查查需需报报告告检检查查部部位位的的细细菌菌（“+”数数）和和雷雷德德里里分分级级数数（BIBI指指数数）两两种结果。种结果。n （2 2）不不要要直直接接报报告告“查查见见麻麻风风杆杆菌菌”或或“未未查查见见麻麻风风杆杆菌菌”。八、注意事项八、注意事项n n 1 1、涂片质量要高：涂片厚薄一、涂片质量要高：涂片厚薄一致，涂点大小一致，不含红细胞，致，涂点大小一致，不含红细胞，最好每个视野有一两个巨噬细胞。最好每个视野有一两个巨噬细胞。n 2 2、染色质量要好：麻风杆菌成、染色质量要好：麻风杆菌成鲜红色，淋巴细胞呈兰色。鲜红色，淋巴细胞呈兰色。n 3 3、显微镜分辨率要好；、显微镜分辨率要好；n 4 4、检验人员技术要硬。、检验人员技术要硬。