微生物基础知识2.pptx

微生物基础知识微生物基础知识2要点提纲n n凝集试验n n金黄色葡萄球菌n n大肠埃希菌n n乙型溶血性链球菌n n白色假丝酵母菌凝集试验n凝集试验：颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。正离子负离子层负电荷负电荷抗原负电荷抗原 细菌和红细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围细菌和红细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双层离子云。在松散层内界散的负离子层，构成一个双层离子云。在松散层内界和外界之间的电位差形成和外界之间的电位差形成Z电位。溶液中的离子强度电位。溶液中的离子强度愈大，愈大，Z电位也就愈大。电位也就愈大。Z电位使颗粒相互排斥。当特电位使颗粒相互排斥。当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒聚集在一起电位，而使颗粒聚集在一起抗原抗体反应的原理基本原理：特异性（AD-HVR）可见性（凝集、沉淀、溶血等凝集、沉淀、溶血等）结合力(4种)高度互补高度互补紧密接触紧密接触产生产生结合力结合力抗原抗体带电离子带电离子异性相吸异性相吸静电引力静电引力分子极化分子极化范德华引力范德华引力形成氢键形成氢键氢键引力氢键引力形成疏水基团形成疏水基团 疏水作用力疏水作用力作用最小作用最小最具特异性最具特异性作用最大作用最大抗抗原原抗抗体体结结合合可见反应可见反应比例合适比例合适血型血型红细胞抗原血清中的抗体AABBBAABAB无ABO无ABAB血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板及血浆血型是指血液成分（包括红细胞、白细胞、血小板及血浆蛋白）表面的抗原类型。通常所说的血型是指红细胞膜上蛋白）表面的抗原类型。通常所说的血型是指红细胞膜上特异性抗原类型，而与临床关系最密切，人们所熟知的是特异性抗原类型，而与临床关系最密切，人们所熟知的是红细胞红细胞ABO血型系统及血型系统及Rh血型系统。血型系统。金黄色葡萄球菌n定义：在Baird Paiker培养基或血平板上生长良好，分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性，革兰氏阳性葡萄状球菌。（GB/T18204.4-2013)n标准限值：理发店、美容店卫生标准 9666-1996规定美容工具、理发工具、胡刷用后应消毒，不得检出大肠菌群和金黄色葡萄球菌。生物学性状n形态和染色 革兰氏染色阳性，球形，直径约1微米，呈葡萄串状排列。无芽孢，无鞭毛，无荚膜。在某些化学物质如青霉素作用下，可裂解或变成L型菌。在衰老、死亡、陈旧培养物中或被中性粒细胞吞噬后常转为革兰阴性。n培养特性 需养或兼性厌氧。营养要求不高，普通培养基37摄氏度生长良好。n生化反应 多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶（过氧化氢酶）阳性，可与链球菌相区分。所致疾病n化脓性感染 皮肤化脓性感染、各种器官化脓性感染、全身感染如败血症、脓毒血症n毒素性疾病 食物中毒、烫伤样皮炎综合征、毒素性休克综合征毛囊炎 脓疱疮 金葡菌性烫伤样皮肤综合征微生物学检测n增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤n接种BP或血平板n革兰氏染色、镜检n甘露醇发酵试验n血浆凝固酶试验增菌：氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤接种BP或血平板革兰氏染色、镜检：革兰阳性、葡萄串珠状球菌n革兰染色：n结晶紫染色n卢氏碘液媒染n酒精脱色n沙黄复染金黄色葡萄球菌电镜观察n葡萄串珠状球菌甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验0.5ml灭菌生理盐水与冻干血浆混匀溶解，挑取适量菌苔与溶解血浆混匀，36培养，6小时内观察，如果血浆里有凝块现象，即为凝固酶阳性。肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌 是一大群生物学性状相似的革兰阴性是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦杆菌，常寄居在人和动物的肠道内，亦存在于土壤、水和腐物中。存在于土壤、水和腐物中。目前已有目前已有44个属，个属，170多个种。但该多个种。但该科引起人类科引起人类95以上感染的菌种却不到以上感染的菌种却不到20个。个。肠杆菌科细菌共同生物学特性：肠杆菌科细菌共同生物学特性：1 1.形形态态与与结结构构 中中等等大大小小GG杆杆菌菌。大大多多有有菌菌毛毛，多数有周鞭毛，少数有多数有周鞭毛，少数有荚荚膜，不膜，不产产生芽胞。生芽胞。2 2 2 2.培养培养培养培养兼性兼性兼性兼性厌厌氧或需氧。氧或需氧。氧或需氧。氧或需氧。3 3 3 3.生生生生化化化化反反反反应应 乳乳乳乳糖糖糖糖发发酵酵酵酵试试验验可可可可初初初初步步步步鉴鉴别别志志志志贺贺菌菌菌菌、沙沙沙沙门门菌菌菌菌等等等等致致致致病病病病菌菌菌菌和和和和其其其其他他他他大大大大部部部部分分分分非非非非致致致致病病病病肠肠道道道道杆杆杆杆菌菌菌菌，前二者不前二者不前二者不前二者不发发酵乳糖。酵乳糖。酵乳糖。酵乳糖。4 4 4 4.抗抗抗抗原原原原结结构构构构 主主主主要要要要有有有有菌菌菌菌体体体体O O O O抗抗抗抗原原原原、鞭鞭鞭鞭毛毛毛毛H H H H抗抗抗抗原原原原和和和和荚荚膜抗原。膜抗原。膜抗原。膜抗原。5 5 5 5.抵抗力抵抗力抵抗力抵抗力对对理化因素抵抗力不理化因素抵抗力不理化因素抵抗力不理化因素抵抗力不强强。6 6 6 6.变变异异异异 肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科细细菌菌菌菌易易易易出出出出现现变变异异异异菌菌菌菌株株株株，其其其其中中中中最最最最常常常常见见的是耐的是耐的是耐的是耐药药性性性性变变异。异。异。异。埃希菌属埃希菌属埃埃希希菌菌属属（EscherichiaEscherichia）有有6 6个个种种，只只有有大大肠肠埃埃希希菌菌（E E.colicoli）是是临临床床最最常常见见、最最重重要的一个菌种。要的一个菌种。大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即可成为机会致病菌，引起肠道外感染会致病菌，引起肠道外感染会致病菌，引起肠道外感染会致病菌，引起肠道外感染一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人类胃肠炎在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的卫生学检测指标。测指标。测指标。测指标。志贺菌属志贺菌属感感染染几几乎乎只只局局限限于于肠肠道道，一一般般不不侵入血液。侵入血液。典典型型的的急急性性细细菌菌性性痢痢疾疾：潜潜伏伏期期1 13 3天天，突突然然发发病病，常常有有发发热热、腹腹痛痛、脓脓血血黏黏液液便便，伴伴有有里里急急后后重（重（tenesmus）。）。沙门菌属沙门菌属n n1 1 1 1.肠热症肠热症肠热症肠热症(enteric fever,enteric fever,typhoid fevertyphoid fever)包括伤寒包括伤寒包括伤寒包括伤寒沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌沙门菌引起的伤寒，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤（原称乙型副伤寒沙门菌）和希氏沙门菌引起的副伤寒。寒。寒。寒。n n2.2.2.2.胃肠炎（食物中毒）胃肠炎（食物中毒）胃肠炎（食物中毒）胃肠炎（食物中毒）常见食物主要为肉类食品、蛋常见食物主要为肉类食品、蛋常见食物主要为肉类食品、蛋常见食物主要为肉类食品、蛋类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污类、奶和奶制品，系动物生前感染或加工处理过程污染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。染所致。多见于老人、婴儿和体弱者。n n3.3.3.3.败血症败血症败血症败血症 多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染多见于儿童和免疫力低下成人。经口感染后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重后，病菌即侵入血循环。败血症症状严重n n4.4.4.4.无症状带菌者无症状带菌者无症状带菌者无症状带菌者 约约约约1 1 1 15 5 5 5伤寒或副伤寒患者，在伤寒或副伤寒患者，在伤寒或副伤寒患者，在伤寒或副伤寒患者，在症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为症状消失后一年仍可在其粪便中检出沙门菌，转变为无症状（健康）带菌者。无症状（健康）带菌者。无症状（健康）带菌者。无症状（健康）带菌者。其他菌属n一、克雷伯菌属 n二、变形杆菌属n三、肠杆菌属n四、沙雷菌属n五、枸橼酸杆菌属n六、摩根菌属总大肠菌群n一个卫生学概念，作为饮水、食品等粪便污染的指标之一n总大肠菌群：指在37摄氏度24小时内发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌（GB/T5750.12-2006之2.1）。包括埃希氏菌属、枸橼酸杆菌、克雷伯杆菌属及肠杆菌属等n标准限值：生活饮用水卫生标准GB5749-2006规定总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌不得检出大肠埃希氏菌n大肠埃希氏菌多管发酵法：多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5培养24小时产生-葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中的大肠埃希氏菌的方法。（GB/T5750.12-2006之4.1）大肠埃希氏菌n大肠埃希氏菌（E.coli）通常被称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。n直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核微生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类：肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠黏附性大肠杆菌（EAEC）和弥散粘附性大肠杆菌(DAEC)。耐热大肠菌群和粪大肠菌群n北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA。SN中的“粪大肠菌群”概念为等同采用AOAC方法，故而使用粪大肠菌群概念；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”。一般欧洲学者认为，“粪大肠菌群”的提法不太科学，耐热大肠菌群的范围比粪大肠菌群范围大。n项目依据定义耐热大肠菌群NMKL、ISO 在44.5培养，24h天内能产酸产气的细菌 粪大肠菌群NMKL 在胰蛋白胨肉汤中于44.5，24h内产生吲哚的耐热大肠菌群 AOAC 于LST中36培养48h内产气，并于EC内培养4424h产气的一群细菌 n在认证活动中，经常有实验室将耐热大肠菌群等同于粪大肠菌群，标准的解释比网络解释更具权威性。耐热大肠菌群的卫生学意义 n 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等）和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度，且检测方法比大肠杆菌简单地多，而受到重视 总大肠菌群的检测（GB/T5750.12-2006之2.1）n乳糖发酵试验（15管法）：根据污染程度，对水样进行稀释，选择3个适当的稀释度，每个稀释度接种5管。n培养基：乳糖蛋白胨培养液，有单料、双料之分。（GB/T18204.4-2013检测用品用具的大肠菌群用到的是乳糖胆盐发酵培养基）n分离培养：伊红美蓝培养，革兰氏染色，镜检n证实试验：挑取以上革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落，进行乳糖蛋白胨培养液复发酵。乳糖发酵接种EMB培养基n深紫黑色，有金属光泽的菌落n深紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落n淡紫红色，中心较深的菌落革兰氏染色、镜检：革兰阴性、无芽孢杆菌证实试验n初发酵产酸产气，革兰氏染色阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖发酵管，37摄氏度24小时产酸产气者，即证实为有大肠菌群存在结果报告n查MPN（Most Proble Number，最可能数）检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群可能数MPNn稀释样品查表后乘以稀释倍数报告之n所有乳糖发酵管均阴性时，报总大肠菌群未检出nMPN检索表应用到的是泊松分布的统计方法-溶血性链球菌集中空调通风系统送风中采集的样品，经3537，2448h培养，在血琼脂平板上形成的典型菌落。（WS394-2012附录F）标准限值：WS394-2012规定-溶血性链球菌不得检出溶血性链球菌不得检出根据溶血根据溶血现象将象将练球菌分球菌分类溶血环现象溶血环现象名称名称类别类别致病性致病性草绿色溶血环草绿色溶血环溶血溶血甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌多为条件致病菌多为条件致病菌完全溶血环完全溶血环溶血溶血乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌溶血性链球菌溶血性链球菌致病力强致病力强不溶血不溶血丙型链球菌不溶血性丙型链球菌不溶血性链球菌链球菌无致病性无致病性A群（化脓性）链球菌（群（化脓性）链球菌（溶血性链球菌）n n本属细菌的代表种，致病性强，对人致病本属细菌的代表种，致病性强，对人致病的链球菌有的链球菌有90%属此种。属此种。1.1.形态与染色形态与染色 球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性（G G），无芽胞，无鞭毛。），无芽胞，无鞭毛。），无芽胞，无鞭毛。），无芽胞，无鞭毛。2.培养要求高：血平板或含血清培养基3.3.生化反应生化反应n n分解葡萄糖，产酸不产气。分解葡萄糖，产酸不产气。n n分解葡萄糖。分解葡萄糖。n n不不分分解解菊菊糖糖，不不被被胆胆汁汁溶溶解解（可可鉴鉴别别甲甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。n n链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。链球菌不产生触酶，与葡萄球菌不同。4.抵抗力 一一般般链链球球菌菌均均可可在在60被被杀杀死死，对对常常用用消消毒毒剂剂敏敏感感。在在干干燥燥尘尘埃埃中中生生存存数数月月。乙乙型型链链球球菌菌对对青青霉霉素素、红红霉霉素素，四四环环素素、杆菌肽和磺胺药都很敏感。杆菌肽和磺胺药都很敏感。5 5.所致疾病所致疾病A A群链球菌引起的疾病约群链球菌引起的疾病约群链球菌引起的疾病约群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的占人类链球菌感染的占人类链球菌感染的占人类链球菌感染的90%90%淋淋淋淋巴巴巴巴管管管管炎炎炎炎、蜂蜂蜂蜂窝窝窝窝组组组组织织织织炎炎炎炎、扁桃体炎等。扁桃体炎等。扁桃体炎等。扁桃体炎等。猩红热猩红热猩红热猩红热（红色杨梅舌）（红色杨梅舌）（红色杨梅舌）（红色杨梅舌）(3)(3)(3)(3)超敏反应性疾病超敏反应性疾病超敏反应性疾病超敏反应性疾病(1)(1)(1)(1)化脓性感染化脓性感染化脓性感染化脓性感染(2)(2)(2)(2)中毒性疾病中毒性疾病中毒性疾病中毒性疾病风湿热风湿热风湿热风湿热急性肾小球肾炎急性肾小球肾炎急性肾小球肾炎急性肾小球肾炎6.血平板培养n35-37,24-48小时。灰白色，0.5-0.7mm菌落，表面光滑有乳光，周围有2-4mm完全透明溶血环。7.革兰染色、镜检 n革兰阳性无芽孢球菌，圆形或卵圆形，链状排列，受培养和操作条件影响，长度为数个至数十个细胞之间8.链激酶试验 食品微生物中溶血性链球菌检验 GB/T 4789.11-20039.杆菌肽敏感试验白色假丝酵母菌n培养观察n芽管试验n厚膜孢子形成试验n糖发酵试验和糖同化试验培养观察n在沙保培养基于室温或37培养13天长出菌落，呈奶油色或呈蜡状，柔软、光滑、湿润，有浓厚的酵母气味。培养稍久，有大量向下生长的营养假菌丝，无向上生长的气中菌丝，呈类酵母型菌落。染色镜检芽管试验：取少许菌苔接种于0.5ml人或兔血清中，混匀，37水浴2-3h后，取出一接种环菌液，涂片镜检。厚膜孢子形成试验：玉米粉聚山梨脂-80琼脂培养基，培养后镜检观察到厚膜孢子及假菌丝。糖发酵试验和糖同化试验n同化又称有氧呼吸,有氧条件下,真菌分解为CO2和水,同时获取能量,利用此反应所设计的实验称为同化试验,以此判断真菌某种酶的存在而区别真菌,如:热带念珠菌同化麦芽糖,而光滑球拟酵母菌不能同化麦芽糖.真菌能同化某种糖不一定能发酵某种糖,能发酵某种糖必定能同化某种糖.Thank you for your attention!