常见性病实验室检测技术.ppt

常见性病实验室检测技术常见性病实验室检测技术2性病实验室检测工作概述性病实验室检测工作概述病原体病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒病病 种种淋病梅毒:生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣:HIV感染/艾滋病:软下疳:性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病:疥疮:阴虱病:肝炎（乙、丙）：性传播疾病性传播疾病(STD)/(STD)/性传播感染性传播感染(STI)(STI)梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿50-6050-60年代年代经典性病经典性病80-9080-90年代年代监测性病监测性病目目 前前传染法报告病例传染法报告病例 监测性病监测性病梅毒淋病沙眼衣原体感染生殖器疱疹尖锐湿疣我国目前重点防治性传播疾病（性病）我国目前重点防治性传播疾病（性病）沙眼衣原体沙眼衣原体:30%:30%50%50%生殖支原体生殖支原体:10%:10%40%40%其它其它:20%:20%30%30%梅毒淋病HIV/AIDSHIV/AIDS1995-20101995-2010全国淋病流行状况全国淋病流行状况全国性病流行状况全国性病流行状况1995-20101995-2010全国梅毒流行状况全国梅毒流行状况n卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）n卫生部2011年2月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案n性病防治管理办法（修订征求意见稿）即将下发7近期卫生部相关政策近期卫生部相关政策/规划文件规划文件预防与控制措施n广泛开展宣传教育，普及梅毒防治知识n开展综合防治，阻断梅毒传播n提高监测检测质量，开展主动检测，梅毒早期发现n提供规范化梅毒医疗服务n预防和控制先天梅毒n加强国际合作和应用性研究8中国预防与控制梅毒规划中国预防与控制梅毒规划性病防治管理办法性病防治管理办法(各级机构职责各级机构职责)n第十一条国家级性病预防控制机构：（三）组织制定和完善性病实验室检测等技术规范，开展性病实验室检测质量控制，定期开展性病诊断试剂临床应用质量评价。n第十二条 省级及以下性病预防控制机构（四）组织开展本行政区域性病实验室检测质量控制n第十三条 性病诊疗业务的医疗机构：开展实验室检验质量控制9性病检测实验室能力建设性病检测实验室能力建设与发展规划与发展规划(2011-2015)(2011-2015)（上报稿）（上报稿）工作目标及原则工作目标及原则加强各级性病实验室的能力建设（1）国家性病参比实验室应具备。（2）省级中心实验室应具备开展常见重要性病病原体的检测、药物敏感性检测以及质量评价的能力。（3）县（区）级以上医疗卫生机构应具备开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌培养以及生殖道沙眼衣原体抗原或核酸检测的能力；县（区）级以下的基层医疗机构至少应具备开展梅毒快速血清学检测的能力。11建设任务和标准建设任务和标准1）95%的省级以上医疗卫生机构能够开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测或核酸检测。60%的省级以上医疗卫生机构能够开展淋球菌药物敏感性检测。2）90%的地市级医疗卫生机构能够开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测或核酸检测。3）85%的县区级医疗卫生机构能够开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测。4）85%的县区级以下医疗卫生机构至少能够开展梅毒快速血清学检测。12常见性病实验室检测技术常见性病实验室检测技术介绍介绍n梅毒梅毒n淋病淋病n生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染n生殖器疱疹及其他 一、梅一、梅 毒毒梅毒概述梅毒概述（一）（一）性接触是主要的传染途径l 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性l 随着病期的延长，传染性越来越小l 到感染后2年，通过性接触一般无传染性母 婴 传 播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小;梅毒概述梅毒概述（二）（二）n一期梅毒一期梅毒 硬下疳和(或)腹股沟淋巴结肿大n二期梅毒二期梅毒 可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等n三期（晚期）梅毒三期（晚期）梅毒 可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上 皮肤黏膜损害等，包括神经梅毒、心血管梅毒n隐性（潜伏）梅毒隐性（潜伏）梅毒 早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征n胎传（先天）梅毒胎传（先天）梅毒 早期：在2岁前发生；晚期：在2岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现 梅毒概述梅毒概述（三）（三）疑似病例、确证病例诊断依据：疑似病例、确证病例诊断依据：病史症状实验室检查梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义常用梅毒实验室检测方法常用梅毒实验室检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测梅毒病原体梅毒病原体小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细0.2m有6 12个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律 -围绕其长轴旋转中前后移动 -伸缩其圈间之距离而移动 -全身弯曲如蛇行 病原学检查病原学检查n原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。n方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。n螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。n如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，22梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。问题问题问题问题1 1 1 1：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理n梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗体主要是IgM和IgG混合抗体。n未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。问题问题问题问题2 2 2 2：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法两种检测方法两种检测方法两种检测方法 非梅毒螺旋体抗原血清学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理n所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样n方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。n基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇n抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见n上述方法的敏感性和特异性都基本相似非梅毒螺旋体抗原血清学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理VDRLVDRL试验试验USRRPR/TRUSTVDRL试验n抗原组成：0.03%心磷脂n 0.21%卵磷脂n 0.90%胆固醇n抗原需新鲜配制 不能保存n待检血清需灭活n目前主要用于脑脊液检查n显微镜观测结果USR试验n是VDRL试验的改良n抗原组成：同VDRL，另含 （1）乙二胺四醋酸(EDTA)使抗原可长期保存，能维持一年；（2）含有氯化胆碱 对血清能起到化学灭活的作用 不必加热灭活 （3）制成试剂盒 使用方便RPRRPR试验试验n在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉淀的指示物 n用白色的硬纸片替代玻片n血清不需要灭活n不需要显微镜观测结果n可作定量试验n有现成的试剂盒 携带方便n操作简单n价格便宜 非梅毒螺旋体抗原血清学原理非梅毒螺旋体抗原血清学原理TRUSTn其原理和成分与RPR试验相同n用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 n其余的特点均与RPR相同非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点1 1、仪器：水平旋转仪。仪器：水平旋转仪。2、定性试验n加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原n反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果3、定量试验n稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义n早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。n 一期梅毒1年后转为阴性n 二期梅毒2年后转为阴性。n 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。n经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清反应假阳性。n 技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。n 生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n梅毒假阳性反应的处理n技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。n对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点n前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点耐血清性（血清固定）指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验原理梅毒螺旋体抗原血清学试验原理n梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。n感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。问问问问题题题题3 3 3 3：梅梅梅梅毒毒毒毒螺螺螺螺旋旋旋旋体体体体抗抗抗抗原原原原血血血血清清清清学学学学试试试试验验验验的的的的定定定定量量量量试试试试验验验验在在在在梅梅梅梅毒毒毒毒诊诊诊诊疗中有意义吗？疗中有意义吗？疗中有意义吗？疗中有意义吗？梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体抗原血清学试验方法n梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)n 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）n 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)n 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）n 化学发光免疫分析法（CLIA）n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）TPPA/TPHATPPA/TPHAn TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。nTPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照标准。+Sheep red cellT.pallidum+Sensitised cellSensitised cellSpecific AntibodyHemagglutinationTPPA(TPHA)TPPA(TPHA)试验原理示意图试验原理示意图FTA-ABSFTA-ABS试验试验n FTA-ABS试验原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。nFTA-ABS试验是检测梅毒的经典“金标准”试验。但由于操作比较步骤比较繁琐，所以不适用于常规实验室检测。FTA-ABSFTA-ABS试验示意图及结果试验示意图及结果TPELISATPELISA试验原理试验原理n TPELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。n本法可用于大样本血清检测。梅毒免疫层析快速检测方法梅毒免疫层析快速检测方法梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义n一般情况下，一旦梅毒患者梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性，即使经过正规有效治疗治，仍将终身阳性。问题4：梅毒实验室确证试验的意义是什么？梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义 特异性较高，但报道亦有1%的生物学假阳性发生。n如系统性红斑狼疮患者血清可使FTAABS试验呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光。n传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所致，可使TPHA呈假阳性。n 麻风患者也可使特异试验呈阳性。梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。nTPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。nTPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图非梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期晚期一期二期早期潜伏晚期潜伏三期 治疗前治疗前 治疗后治疗后 阳性阴性梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图梅毒螺旋体抗原血清试验结果解释示意图早期一期二期早期潜伏晚期晚期潜伏三期 治疗前治疗前 治疗后治疗后阳性阴性梅毒血清学试验结果的临床意义总汇梅毒血清学试验结果的临床意义总汇 RPR TPPA TRUST TP-ELISA 临床意义 VDRL TP-RT _ _ _ _ 排除梅毒排除梅毒 （一期梅毒的早期）（一期梅毒的早期）（一期梅毒的早期）（一期梅毒的早期）+现症梅毒现症梅毒 (梅毒孕妇所生的婴儿除外梅毒孕妇所生的婴儿除外梅毒孕妇所生的婴儿除外梅毒孕妇所生的婴儿除外)+-生物学假阳性生物学假阳性 -+-+早期梅毒经治疗后早期梅毒经治疗后 （早早期梅毒）（早早期梅毒）（早早期梅毒）（早早期梅毒）先天梅毒的实验室诊断方法先天梅毒的实验室诊断方法依据实验指标诊断n查到螺旋体n其抗心磷脂抗体滴度持续上升n其抗心磷脂抗体滴度高于其母亲四倍（2个稀释滴度）n检测抗梅毒的IgM特异性抗体阳性n随访18个月观察抗体的变化梅毒实验室诊断检测策略新进展-全国梅毒检测技术规范简介背景介绍近年来我国严峻的梅毒流行形势近年来我国严峻的梅毒流行形势今年卫生部出台梅毒今年卫生部出台梅毒10年控制规划年控制规划全国梅毒检测技术规范（讨论稿）全国梅毒检测技术规范（讨论稿）n梅毒实验室检测梅毒实验室检测 不规范现状不规范现状n梅毒血清学检测梅毒血清学检测 新方法、新技术的新方法、新技术的 应用性评估应用性评估20102010年梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果（以TPPATPPA作为参照标准）方法方法试剂简称试剂简称 特异性特异性(%)(%)敏感性（敏感性（%）ELISA厦门英科 100.0 98.2珠海丽珠 100.0 96.5北京万泰 100.0 96.5潍坊三维 100.0 96.5北京科卫 100.0 95.6北京华大 99.5 99.1上海科华 99.5 98.5 北京金豪 99.1 97.4 化学发光北京科美 100.0 97.3快速试剂厦门英科 99.4 93.9杭州艾康 94.7 96.5北京万泰 94.7 93.9北京蓝十字 93.4 81.620102010年非梅毒梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂评估结果 试剂简称试剂简称 敏感性敏感性(%)(%)特异性特异性(%)(%)北京万泰TRUST 97.8 88.0上海荣盛TRUST 96.7 97.7上海科华RPR 96.7 90.3郑州安图TRUST 92.4 97.2北京金豪TRUST 92.4 92.6英科新创TRUST 91.3 98.6北京科卫RPR 89.1 87.0表表3 3 非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验试验用用试剂评试剂评估估结结果果梅毒实验室检测策略思考57非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验n排除试验假阳性排除试验假阳性n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者n确证梅毒螺旋体现症感染确证梅毒螺旋体现症感染？RPR：初筛试验：初筛试验 TPPA：确证试验：确证试验梅毒实验室检测策略选择n根据目的选择检测方法及检测策略。其中梅毒螺旋体抗原血清学试验方法选用原则：临床检测：推荐选用“金标准”方法，如TPPA 等 血液筛查：可选用快速、简便的方法，如免疫层析快速检测、ELISA等 流行病调查：可选用大通量的检测方法，如ELISA等n可采用任何一类敏感性高的梅毒血清学检测方法作为筛查试验n临床上采用两种方法同时检测，可以快速诊断梅毒，使病人能够得到及时治疗。策略一采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛策略二采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初筛策略三？同时采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验和任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行检测二、淋二、淋 病病1995-20101995-2010年全国淋病疫情趋势男女性男女性别比：比：3.861概况-病原学l淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,简称淋球菌)引起的各种化脓性感染，是一种经典的常见的性传播疾病.l淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约0.60.8m。通常成对生长，两菌接触面平坦。l淋球菌与奈瑟属的另一种致病菌脑膜炎球菌及其他共栖奈瑟菌在生物学上有许多相似性，可通过生化特性加以鉴别。发性感染部位主要为男性尿道或女性宫颈管内膜标本的采集l 取材部位依据年龄性别性接触方式 临床表现l取材拭子种类藻酸钙拭子普通棉拭子涤纶拭子 取材部位男性男性异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部标本；同性恋者:采集尿道、直肠及咽部标本.女性女性 采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材.幼女幼女 幼女和/或处女膜未破的感染者标本：采集阴道分泌物新生儿眼炎患者新生儿眼炎患者 采集眼结膜分泌物 取材方法尿道尿道n男性患者男性患者 用手指从阴茎根部向尿道口方向挤压，有症状患者可挤出脓液，用取样拭子蘸取脓液作涂片或培养。对挤压后无明显分泌物时，采用男用取材拭子插入尿道 23cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出，以采集到粘膜上皮细胞。n女性患者女性患者 可抵着耻骨联合轻轻按摩尿道口，挤压出分泌物。如果无明显分泌物，可用同男性相似的上述方法取材。取材方法宫颈宫颈 避免使用防腐剂和润滑剂，因为这些物质对淋球菌有抑制作用。仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样拭子插入宫颈管内12cm，稍用力转动，保留1030秒后取出。眼部眼部 用男性采样拭子在眼结膜处蘸取分泌物或轻绕眼结膜。直肠直肠 将取样拭子插入肛门23cm，从紧靠肛环边的隐窝中取材。避免接触粪便。阴道阴道 青春期前女孩可采集阴道标本。将取样拭子置于阴道后穹窿1015秒，采集阴道分泌物。咽部咽部 从咽后壁或扁桃体隐窝取材常用淋病检测方法n直接显微镜检查n分离培养淋球菌直接显微镜检查直接显微镜检查n原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。n方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。直接显微镜检查的临床意义直接显微镜检查的临床意义n男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。n宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。n不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。淋球菌培养淋球菌培养1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：n敏感性 81100%。n 特异性 100%淋球菌培养淋球菌培养n培养条件：35 36，含5%10%CO2，湿润（70%湿度）的环境。nCO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。n培养时间：2448小时淋球菌的初步鉴定淋球菌的初步鉴定初步鉴定淋球菌的依据n菌落特征n氧化酶试验n革兰染色淋球菌的鉴定试验淋球菌的鉴定试验菌落形态淋球菌样革兰染色革兰阴性双球菌氧化酶试验阳性糖发酵试验糖发酵试验G+L-M-S-糖发酵试验糖发酵试验 糖发酵试验检测奈瑟球菌分解特定糖类(葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖)产酸的能力。根据淋球菌仅分解葡萄糖，脑膜炎球菌分解葡萄糖和麦芽糖，乳屑奈瑟球菌分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或不分解这些糖类，可将淋球菌与可能在淋球菌选择性培养基上分离出的其他奈瑟球菌加以鉴别。糖发酵试验糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征奈瑟球菌属的糖发酵特征细菌葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖淋球菌+-脑膜炎球菌+-乳酰胺奈瑟菌+-灰色奈瑟球菌-布兰汉卡他球菌-淋球菌培养的临床意义淋球菌培养的临床意义 生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染简介生殖道沙眼衣原体感染简介50年代80年代梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体沙眼衣原体:30%:30%:30%:30%50%50%50%50%生殖支原体生殖支原体生殖支原体生殖支原体:10%:10%:10%:10%40%40%40%40%其它其它其它其它:20%:20%:20%:20%30%30%30%30%生殖道沙眼衣原体感染简介生殖道沙眼衣原体感染简介50年代80年代梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿梅毒梅毒淋病淋病软下疳软下疳性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS2007年后梅毒梅毒淋病淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹生殖器疱疹尖锐湿疣尖锐湿疣HIV/AIDSHIV/AIDS生殖道沙眼衣原体感染病例定义生殖道沙眼衣原体感染病例定义79确诊病例确诊病例 同时符合同时符合1 1（流行病学史）（可缺）（流行病学史）（可缺）和和2 2（临床表现）（临床表现）和和3 3（实验室检查）（实验室检查）病原携带者病原携带者 符合符合3 3（实验室检查）（实验室检查）且无症状且无症状生殖道沙眼衣原体感染特点生殖道沙眼衣原体感染特点80l高流行高流行l无症状感染无症状感染l严重并发症严重并发症l依赖实验室诊断依赖实验室诊断病原体检测病原体检测病原体检测病原体检测:镜检镜检镜检镜检,培养培养培养培养抗原检测抗原检测抗原检测抗原检测:快速快速快速快速,EIA,EIA,EIA,EIA核酸检测核酸检测核酸检测核酸检测:PCR:PCR:PCR:PCR生殖道沙眼衣原体感染特点生殖道沙眼衣原体感染特点81新发感染每年以新发感染每年以1010的速度递增的速度递增新发病例新发病例300300万万/年，治疗费年，治疗费2020亿美元亿美元/年年中国至今无确切病例报告数：中国至今无确切病例报告数：部分地区调查：部分地区调查：MSM MSM：28%28%FSW:58%FSW:58%全国全国105105哨点监测：哨点监测：2008 2008：2711227112 2009 2009：2482124821上升上升9.23%9.23%生殖道沙眼衣原体感染特点生殖道沙眼衣原体感染特点82n感染后：感染后：n约约7070女性和女性和5050男性为无症状男性为无症状n8686的女性和的女性和5555的男性感染者持续感染时间的男性感染者持续感染时间为为1 1年以上。年以上。n 不寻求治疗不寻求治疗.83生殖道沙眼衣原体感染特点生殖道沙眼衣原体感染特点n近年来研究：近年来研究：引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病有关 与HIV感染的促进作用 沙眼衣原体感染已成为全世界范围的公共卫生问题沙眼衣原体感染已成为全世界范围的公共卫生问题!常用生殖道衣原体感染检测方法常用生殖道衣原体感染检测方法n抗原检测抗原检测 酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）免疫层析快速检测免疫层析快速检测n核酸检测核酸检测酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1、原理：于衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。2、方法特点n 敏感性：7997n 特异性:9799n试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故n结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。n在沙眼衣原体高流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于5%）的人群中应用时，结果解释应慎重。酶联免疫吸附试验临床意义酶联免疫吸附试验临床意义抗原快速检测抗原快速检测1、原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。2、方法特点n简易，方便，快速，尤其适用于基层单位n标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果抗原快速检测临床意义抗原快速检测临床意义n该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。n该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。核酸扩增检测核酸扩增检测1、原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。2、方法包括聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实时荧光PCR。核酸扩增检测临床意义核酸扩增检测临床意义n核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。n核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。n开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。方法评价方法评价n核酸检测 是目前为止最好的检测方法但方法建立的成本以及对人员要求较高ELISA抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法高通量，自动化n快速抗原检测 操作时间短，单人份操作，但敏感性极低生殖器疱疹生殖器疱疹 常用生殖器疱疹检测方法常用生殖器疱疹检测方法n抗原检测n抗体检测抗原检测抗原检测1、原理：将HSV特异性单克隆抗体包被在酶标板微孔壁上，捕获标本中的HSV抗原，形成抗原抗体复合物，继而与酶标记的二抗结合，通过酶联显色反应检测HSV。2、方法：ELISA为目前临床上HSV抗原检测的常用方法之一抗原检测临床意义抗原检测临床意义 生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准确性不足50%70%，通过实验室检测手段可确证HSV感染抗体检测抗体检测n原理：将HSV特异性抗原包被在酶标板微孔底上，捕获标本中的HSV抗体，形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测HSV抗体。n方法：有检测IgG 和IgM 两种ELISA方法抗体检测临床意义抗体检测临床意义n检测抗HSV抗体的血清学试验可用于证实既往HSV感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大。nHSV型特异性血清学抗体检测是发现亚临床无症状生殖器HSV感染者的手段之一。细菌性阴道病细菌性阴道病n加特纳菌是健康妇女阴道中寄生的一种定殖菌。细菌性阴道病主要是由阴道加特细菌性阴道病是因阴道内加特纳菌、厌氧菌等增多，而乳酸杆菌减少，阴道内生态平衡系统改变而引起的炎症性疾病，可通过性生活传播。实验室检查实验室检查分泌物pH4.5；分泌物加10氢氧化钾出现胺味；阳性实验室化验结果(革兰染色检测分泌物细菌，或湿片查线索细胞)。均匀一致的阴道分泌物；符合以上标准中任何三项(但最后一项是必需的)即可诊断。实验室检查实验室检查线索细胞检查线索细胞检查n取分泌物作生理盐水湿片，可见散在的上皮细胞及其间的细菌，上皮细胞多于白细胞，其表面有很多细菌，使其边缘呈锯齿状而不清晰，形成所谓线索细胞(clue cell)，如20以上的上皮细胞有此表现，可作为诊断此病的指标。加0.1美蓝盐水作湿片，细菌染成深蓝色，易与乳酸杆菌区别。实验室检查实验室检查实验室检查实验室检查唾液酸酶测定法唾液酸酶测定法 原理：唾液酸酶是BV致病因子之一，BV妇女阴道分泌物中的唾液酸酶活性明显高于正常妇女。通过检测阴道分泌物中唾液酸酶的含量，判断是否患BV.检测试剂中主要含有细菌唾液酸酶特异性显色底物溶液。当试剂与样品中的唾液酸酶接触时，底物被水解，产生唾液酸和发色基团，发色基团进一步被空气中的O2氧化变成蓝色。实验室检查实验室检查结果判断：测试管和拭子头变蓝即为阳性，无颜色变化即为阴性。实验操作方法：将采样拭子浸入BV测试管的溶液中，轻轻搅动混匀，置35-37中温育20分钟。取出测试管，直接观察溶液和拭子头的颜色变化。Thanks！