观察DNA和RNA在细胞中分布的实验原理.doc

观察DNA和RNA在细胞中分布的实验原理：
1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。
2．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。;②30℃水浴保温5min,作用为配合盐酸水解,盐酸浓度,水浴温度和保温时间都会影响水解效果,如水解度过低会影响后面染色效果,解度过高则会严重破坏细胞结构,干扰DNA和RNA观察;盐酸水解的作用是"加速"和"有利于",该步骤可以省略,但会增加染色环节时间.

水解当中，主要是质量分数为8%的盐酸起作用。

盐酸的作用：1.使染色体中的蛋白质和DNA分离，易于染色（主）。
2.使细胞膜的通透性改变，染色剂更易进入细胞，进而加快
染色速度。

烘干的作用：利于细胞贴在载玻片上，而不至于在水解和冲洗装片的过程
中滑入溶液中（杀死细胞并不是烘干的本质意图）。

一、问题研究

1、原理与解析
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。
(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
(3)盐酸的作用
① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
注意事项
1.材料的选择
① 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；
② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)
2.取材要点
① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。
3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。
4.安全要点
① 用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；
② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。
5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。
主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
1.取材
① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2.水解
① 解： 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
② 保： 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3.冲洗涂片
① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4.染色
① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
② 吸： 吸去多余染色剂；
③ 盖： 盖上盖玻片。
5.观察
① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。