7-yyb-肿瘤免疫治疗临床应用及进展(4学时)20170331医学PPT课件.ppt

肿瘤免疫治疗肿瘤免疫治疗临床应用及进展临床应用及进展 -肿瘤生物治疗学基础与临床肿瘤生物治疗学基础与临床福建医科大学教学医院福建省肿瘤医院福建省肿瘤转化医学重点实验室叶韵斌教学目的与要求教学目的与要求熟悉肿瘤免疫治疗的策略和方法熟悉肿瘤免疫治疗的策略和方法认认识识免免疫疫治治疗疗在在肿肿瘤瘤综综合合治治疗疗中中的的地位和作用地位和作用了解肿瘤免疫治疗的最新进展了解肿瘤免疫治疗的最新进展一、肿瘤一、肿瘤的免疫治疗的免疫治疗 基本原理基本原理：提高肿瘤抗原免疫原性，激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，提高肿瘤对抗瘤免疫效应的敏感性，在体内外诱生肿瘤特异性效应细胞和分子等。抗肿瘤免疫治疗包括主动免疫治疗、被动免疫治疗。1 1、干扰素、干扰素1）I型干扰素：由单核巨噬细胞、病毒诱导的成纤维细胞、转化的B细胞产生 种类：IFN-、IFN-、IFN-、IFN-等 作用：抑制肿瘤细胞周期、诱导细胞凋亡 调节免疫反应 感染肿瘤血管生成 其它作用：抗病毒2）II型干扰素：由活化的T细胞、原始的Th0细胞和NK细胞产生 种类：IFN-作用:激活巨噬细胞、NK细胞等直接杀伤癌细胞 延长细胞周期、抑制肿瘤细胞的生长和增殖 促进MHC-I、II类分子和抗原递呈细胞尚共刺激分子的表达 在干扰素的调节下，IFN-可诱导Th0向Th1分化，抑制向Th2分化，增强细胞免疫和CTL的杀伤活性临床药物：基因工程产品，已国产化。干扰灵、赛若金、因特芬、派罗欣。（一）细胞因子治疗（一）细胞因子治疗适适应应症症：干扰素主要用于治疗晚期毛细胞白血病、肾癌、黑色素瘤、kaposi肉瘤、慢性粒细胞性白血病和中低度恶性非霍奇金淋巴瘤，其他曾用于骨肉瘤、乳腺癌、多发性骨髓瘤、头颈部癌和膀胱癌等。对慢性乙、丙型肝炎也有效。用用法法：第1周300万单位，皮下注射，每周23次，第2周每次加到500600万单位，第3周加到9001000万单位连续6周，共8周为1疗程。干扰素亦可局部注射（瘤周浸润）、腔内注射（癌性胸腹腔积液）或膀胱内灌注。毒毒副副作作用用：高剂量干扰素具有一般生物制剂的反应即发热、流感样症状，肌肉酸痛等，其次是轻度骨髓抑制。一般对肝肾功能无影响，少数有转氨酶、血肌酐升高。2 2、白细胞介素、白细胞介素-2-2（IL-2)IL-2)来源：主要由激活的T淋巴细胞分泌和表达，此外NK、转化的B细胞和LAK细胞也可产生 作用：促进T细胞增殖及相应的细胞因子分泌 刺激NK生长并增强其杀细胞活性 诱导LAK、NK、TIL扩增及细胞因子的分泌 促进B细胞分化、增殖和产生抗体 参与机体的炎症反应、抗肿瘤免疫反应和移植排斥反应临床药物：基因工程IL-2 欣吉尔、德路生、远策欣。适适应应症症：用于肾细胞癌、黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直肠癌、淋巴瘤、肺癌等恶性肿瘤的治疗。用于癌性胸腹水的控制。用于手术后、放疗及化疗后的肿瘤治疗，可增强机体免疫功能。也用于自身免疫性疾病和病毒性、细菌性疾病的治疗，如乙肝、结核病。用用法法：1）胸腹腔注射 100-200万IU/次，每周1-2次，2-4周为一疗程。2）局部注射 根据癌灶大小决定剂量，每次每个病灶不少于610万IU，隔日1次，4周为一疗程。3）皮下注射 60-100万IU/m3，每日1次，每周5次，4周为一疗程。4）静脉滴注 40-80万IUIU/m3，每日1次，缓慢滴注，每周5次，4周为一疗程。毒毒副副作作用用：治疗中常见副反应为发热、寒战、乏力、恶心、轻度食欲下降等。其他少见的副反应包括局部反应、皮疹、血压下降、水潴留、转氨酶升高等。这些副反应多为轻度、易耐受，停药后可自行缓解。必要时可给与消炎痛或给予升压等措施对症处理。3 3、ILIL-1212 主主要要是是由由抗抗原原呈呈递递细细胞胞（如如单单核核巨巨噬噬细细胞胞、树树突突细细胞胞及及B B淋淋巴细胞产生）巴细胞产生）作用：作用：诱导诱导Th0Th0分化为分化为Th1Th1，增强细胞免疫应答，增强细胞免疫应答 促进促进NKNK、T T细胞增殖，诱导细胞增殖，诱导LAKLAK、TILTIL产生，产生，并增强上述细胞的杀伤功能并增强上述细胞的杀伤功能 诱导诱导Th1Th1、NKNK分泌分泌IFN-IFN-促进巨噬细胞分泌一氧化氮，杀伤肿瘤细胞促进巨噬细胞分泌一氧化氮，杀伤肿瘤细胞 抑制肿瘤血管的生成抑制肿瘤血管的生成 增强肿瘤细胞表达增强肿瘤细胞表达MHC-I IIMHC-I II类分子，提高肿类分子，提高肿 瘤细胞对免疫效应细胞的易感性瘤细胞对免疫效应细胞的易感性 增加抗原递呈细胞对肿瘤抗原的递呈功能增加抗原递呈细胞对肿瘤抗原的递呈功能动物试验动物试验：应用基因工程技术，将IL-12基因导入肿瘤细胞、树突细胞、成纤维细胞等，制成肿瘤疫苗，使IL-12在局部分泌，诱发机体的抗肿瘤免疫。临床试验临床试验：重组人(rHu)IL-12治疗慢性乙型肝炎，效应与剂量相关，但较大剂量较易有不良反应，IL-12能恢复由实体瘤转移患者PBMC获得的NK细胞活性，IL12还能增强毛细胞白血病患者NK细胞活性，IL-12抗肿瘤作用4 4、IL-4IL-4主要由活化的T淋巴细胞（特别是Th2细胞）产生。作作用用：促进休止期的B细胞活化，促进B细胞分泌IgE，增加B细胞的抗原递呈功能，促进体液免疫应答。维持胸腺细胞和活化T细胞的生长，诱导Th2产生，抑 制Th1分泌细胞因子。诱导NK细胞增殖。激活巨噬细胞，促进其抗原递呈和杀伤肿瘤细胞的作用。诱导外周血单个核细胞分泌M-CSF和G-CSF，增强中性粒细胞介导的吞噬、杀伤功能和抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应（ADCC）应用应用：主要用于DC细胞的诱导、扩增。5 5、肿瘤坏死因子、肿瘤坏死因子TNFTNF1 1）TNF-TNF-：主要来源于LPS、细菌DNA等抗原分子激活的单核巨噬细胞、其它细胞如T淋巴细胞、B淋巴细胞等产生的。作用：影响免疫反应过程 影响非免疫细胞 促进细胞因子分泌 调控细胞凋亡 全身反应2 2）TNF-TNF-：主要由Th1、CD8T细胞和早期的B细胞产生作用作用：是炎症过程的重要组成成分6 6、集落刺激因子、集落刺激因子 是一种低分子量糖蛋白，能够在体内外选择性刺激造血干细胞增生、分化成某一谱系的细胞分 类：G-CSF,M-CSF,GM-CSF,IL-3,EPO,SCF7 7、胸腺素、胸腺素 分为两族 作用：1）具有免疫增强作用，可促进T细 胞、NK、LAK等细胞的增殖及杀伤 活性 2）参与细胞骨架的形成，通过对 肌动蛋白的调节，参与某些肿瘤的 转移（二）肿瘤的主动免疫治疗（二）肿瘤的主动免疫治疗 应用肿瘤抗原或模拟肿瘤抗原的疫苗刺激机体免疫系统，激发或增强机体的抗肿瘤特异性免疫应答，阻止肿瘤生长、扩散和复发。肿瘤疫苗肿瘤疫苗 肿瘤疫苗与传统疫苗在概念上不同，它主要不是用于肿瘤的预防，而是通过瘤苗的接种来刺激机体对肿瘤的免疫应答来治疗肿瘤。该法应用的前提是肿瘤抗原能刺激机体产生免疫反应。对手术后清除微小转移瘤灶和隐匿瘤、预防肿瘤转移和复发有较好的效果。1、肿瘤细胞疫苗 即即通通过过自自体体肿肿瘤瘤细细胞胞粗粗提提取取物物，经经物物理理化化学学或或生生物物手手段段处处理理后后抑抑制制其其生生长长能能力力，保保持持其其免免疫疫原原性性，需加入佐剂如卡介苗等以增强免疫原性。需加入佐剂如卡介苗等以增强免疫原性。2、肿瘤基因工程疫苗 肿瘤基因工程疫苗通过基因重组技术，将目的基因导入受体细胞而制备的疫苗。2 2、肿瘤基因工程疫苗、肿瘤基因工程疫苗1)1)、提高机体抗肿瘤能力、提高机体抗肿瘤能力 将外源基因导入免疫细胞，其表达产物作用于免疫细胞，促进免疫细胞生长、分化，从而提高机体的抗肿瘤能力。目前研究较多的是细胞因子基因的转导，如IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-以及GM-CSF等。实验显示，在各种细胞因子中，以GMCSF基因修饰的肿瘤细胞疫苗效果最好，这与其诱导DC成熟有关。2)2)、增强肿瘤免疫原性、增强肿瘤免疫原性 通过表达肿瘤所缺乏的某些分子，以增强其免疫原性。如将B7基因导入具有肿瘤抗原的肿瘤细胞，不仅能恢复肿瘤特异性免疫反应，也可增强IL-2的抗瘤活性。一些肿瘤相关抗原（TAA）基因的转导研究，显示也可以增强其免疫原性，如CEA、AFP、gp100、MART-1。3)3)、基因产物直接杀伤瘤细胞、基因产物直接杀伤瘤细胞 如TNF基因导入肿瘤细胞可使局部持续分泌TNF、从而直接杀伤肿瘤细胞。3、肽疫苗8-108-10个氨基酸的多肽是个氨基酸的多肽是T T细胞识别的基础细胞识别的基础肽疫苗主要包括以下二种：1）、癌基因、抑癌基因突变肽疫苗 目前已合成的p21-K-Ras-125突变肽、EGFRvIII突变肽和Her2/neu肽等。2）、病毒相关疫苗 如EB病毒与鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤，HBV与肝癌，人类T细胞白血病病毒与成人T细胞白血病。OncophageOncophage(VitespenVitespen)通过加工、纯化自体肿瘤细胞的gp96等热休克蛋白HSP，获得大量肿瘤抗原。一项III 期临床研究中728 肾癌术后随机分为观察组和治疗组结果：复发率 观察组 治疗组 P值 全部 27.3%25.0%0.384 I+II期 27.0%15.2%0.056 III+IV 27.5%32.0%0.686 中危患者*30.9%16.3%0.004 中危患者*:I/II期低分化/III期高分化 俄罗斯2008-4-9批准Oncophage 用于中危肾癌的辅助治疗。Lancet.2008(9633):1454 4、核酸疫苗 核酸疫苗是由能引起保护性免疫反应的抗原基因片段及其载体构建而成。包括DNA疫苗和RNA疫苗。4、核酸疫苗5、抗独特型抗体疫苗 肿瘤抗原可诱导抗体(Ab1)产生，该抗体可变区的独特型决定簇具有免疫源性，可诱导抗体Ab2产生，称为抗独特性抗体。也是一种抗抗体。在这些Ab2中，有的可模拟原来的抗原结构诱导抗原的特异性免疫反应，可作为肿瘤疫苗应用。这这种种疫疫苗苗的的特特点点是是，它它既既不不是是天天然然抗抗原原的的本本身身，也也不不是是人人工工合合成成的的抗抗原原自自身身，而而是是抗抗原原本本身身的的“摸摸拟拟物物”，当当用用这这种种疫疫苗苗接接种种时时，机机体体虽虽然然没没有有直直接接接接触触抗抗原原，却却能能产产生生对对相相应应抗抗原的免疫应答原的免疫应答具有抗原放大效应具有抗原放大效应已进入已进入、期临床期临床的的抗独特型抗体抗独特型抗体：卵巢癌相关抗原CA125的独特型疫苗：AcA125黑色素瘤的独特性疫苗：BEC2、TriGem等淋巴瘤的独特性疫苗：Id-KLH乳腺癌的独特性疫苗：1E10结直肠癌的独特性疫苗：105AD76 6、树突状细胞（、树突状细胞（DCDC）疫苗）疫苗 肿瘤抗原属于内源性抗原，机体主要依靠CTL免疫应答杀伤肿瘤细胞。但肿瘤细胞表面的MHC-抗原肽段复合物表达水平低，需要经体内抗原提呈细胞加工、处理，提供诱导T细胞活化的第二信号，才能激发肿瘤特异性CTL的产生。由于DC在诱导体液免疫应答和细胞免疫应答中的重要功能，目前认为，DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥重要作用。Dendritic cells connect innate immunity and adaptive immunity人DC至少有三条来自于不同前体细胞的发育途径：1）CD34+细胞分化为DC2）外周血单核细胞分化为DC3）淋巴样DC前体细胞分化途径临床应用临床应用治疗恶性淋巴瘤治疗恶性淋巴瘤 肿瘤抗原可以基因、多肽、蛋白、甚至完整细胞的形式负荷给DC，因此DC疫苗的制备明显比基因修饰的肿瘤细胞疫苗容易，因而促进了DC疫苗进入临床试验。1996美国斯坦福大学的Hsu等首先采用抗独特型抗体负荷的DC疫苗治疗了4例B细胞型淋巴瘤，3例获部分缓解。抗原冲击抗原冲击DCDC治疗乳腺癌（治疗乳腺癌（I/III/II期临床）期临床）病人：病人：高表达高表达HER2的转移性乳腺癌病人的转移性乳腺癌病人16例例方法：方法：HER500冲击的自体冲击的自体APC 2108 to 5109，二周一次，共三次。二周一次，共三次。副作用：主要为寒战和发热，没有副作用：主要为寒战和发热，没有3-4级的毒副反应级的毒副反应结果：结果：12个可评价的病人，个可评价的病人，1例例PR 结论：结论：HER500冲击的自体冲击的自体DC使用安全，有一定使用安全，有一定 疗效，但效率仍不够高。疗效，但效率仍不够高。J.W.Kylstra,et al.ASCO 2003治疗转移性肾癌（治疗转移性肾癌（I/III/II期临床）期临床）病人：病人：转移性肾癌转移性肾癌 15例例方方法法：肿肿瘤瘤细细胞胞溶溶解解物物冲冲击击的的DC 3.95106 淋淋巴巴结内注射结内注射副作用：副作用：无明显的毒副作用无明显的毒副作用结结 果果：7例例 进进 展展，7例例 稳稳 定定，1例例 部部 分分 退退 缩缩 (14.4106细胞细胞)结结论论：肿肿瘤瘤细细胞胞溶溶解解物物冲冲击击的的DC，即即使使在在有有大大负负荷荷肿肿瘤瘤时时也也有有效效，在在大大剂剂量量使使用用时时更更有有效效，无无毒毒副副作作用用。Marten A,et al.Cancer Marten A,et al.Cancer ImmunolImmunol ImmunotherImmunother.2002.2002 PROVENGE(sipuleucel-T)ProvengeProvenge是是PA2024 PA2024(GM-CSF(GM-CSF和和PAPPAP的的融融合合蛋蛋白白)与与自自身身树树突突状状细细胞胞孵孵育后获得的自体育后获得的自体DCDC细胞疫苗细胞疫苗。III期期研研究究设设计计:127例例无无症症状状激激素素治治疗疗无无效效的的转转移移性性前前列列腺腺癌癌患患者者，以以2:1比比例例接接受受sipuleucel-T(2周周1次次，连连续续3次次)或或安安慰慰剂剂治治疗疗，3 3月月后后曲曲线线分分离。离。J Clin Oncol.2006:3089DC Vax-Brain患者DC细胞经自体肿瘤细胞刺激后获得。胶质瘤手术联合放化疗的MS为14.6个月，TTP为6.9个月。N Engl J Med,2005:987I期和I/II期研究中发现胶质瘤经DCVax-Brain治疗后（皮下注射）后，3年存活率为53%，95%的患者MS超过14.6个月，TTP超过6.9个月。http:/ 未被识别，因此肿瘤细胞溶解物负荷的DC疫苗可使更多的患者接受此种方法治疗。直接携带肿瘤抗原的DC作用更为直接，可以活化静息的T细胞，诱导强烈的抗肿瘤免疫反应。（三）肿瘤的被动免疫治疗（三）肿瘤的被动免疫治疗1 1、单克隆单克隆抗体靶向治疗抗体靶向治疗 又称之为生物导弹技术，通过补体系统和自然杀伤细胞起抗肿瘤作用。嵌合型单抗达到95以上人源化,减少了异种免疫原性。1）抗肿瘤单克隆抗体直接体内应用 很多进入临床治疗试验，包括抗白细胞 分化抗原CD19、CD20、CD22、CD33，表皮生长因子受体（EGFR），MU C1，前列腺特异性抗原（PSA），前列腺特异性膜抗原（PSMA），癌基因cerbB2产物，神经节苷酯GD3、GM2等抗原的单抗。2）抗肿瘤单克隆抗体与抗肿瘤药物、生物毒素、细胞因子或放射性核素偶联：生物毒素，如假单胞菌毒素或蓖麻毒素；放射线同位素，如131I、186Re、177Lu、90Y、212Bi、67Cu、等 单抗作为导向物可增加毒素、放射性同位素等在肿瘤局部 的浓度，增加对肿瘤的杀伤力或诱导肿瘤局部的免疫反应。3）基因工程抗体-毒素（或酶）融合蛋白直接杀瘤 4）抗肿瘤单克隆抗体和抗效应细胞表面分子的抗体组成双特异性抗体，可引导杀瘤效应细胞向肿瘤灶集中 5)胞内抗体在肿瘤细胞内表达，特异性作用于致瘤的癌基因产物或端粒酶 2 2、肿瘤过继性免疫治疗、肿瘤过继性免疫治疗 向肿瘤患者体内输注具有抗瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细胞或激发机体抗肿瘤免疫效应。回输的效应细胞包括：在体外用肿瘤抗原或淋巴因子激活的淋巴细胞（CIK、TIL等）、导入外援细胞因子基因并表达相应产物的淋巴细胞等。1 11)1)LAKLAK细胞细胞 LAK细胞是在1980年由美国国立癌症研究所Rosenberg发现，并在1982年由Grimm等命名的。这是一类由IL-2激活的能够杀伤NK抵抗的新型免疫细胞，是一种强烈的，广谱的，具有杀瘤活性的细胞。随后临床上广泛应用于肿瘤等疾病治疗。但由于LAK细胞活性的维持需要IL-2，而IL-2副作用大，而且在以后的临床总结中发现LAK细胞疗效较低，现已基本不用。2 2)CD3AKCD3AK细胞细胞 是在LAK细胞基础上，用抗CD3单抗和IL-2联合诱导的杀瘤细胞。由于使用了抗CD3单抗刺激，减少了IL-2的用量，降低LAK治疗的毒副作用，且CD3AK的抗肿瘤活性大大高于LAK细胞。对晚期恶性肿瘤患者输注自体 CD3AK 细胞 1个疗程后,实体瘤组治疗有效率为 25.45%,临床获益率为 74.54%;淋巴瘤组有效率为 83.33%,临床获益率为 91.67%。在利用外周血淋巴细胞制备免疫效应细胞的研究中，为增加效应细胞的数量和杀瘤活性，常添加一些激活剂如抗CD3单抗，植物血凝素PHA等，以提高免疫治疗疗效。实验显示PHA预刺激虽能促进IL-2激活的杀伤细胞的增殖，但对杀伤活性并无明显改善，而培养15天以上，经PHA预刺激的P-LAK和P-CD3AK细胞杀伤活性显著提高，且PHA与抗CD3单抗有协同效应。3 3)TILTIL细胞细胞（肿瘤浸润的淋巴细胞）肿瘤浸润的淋巴细胞）肿瘤浸润的淋巴细胞，是从新鲜的肿瘤组织中分离出来，体外经IL-2，抗CD3单抗，TNF等刺激，经20-45天培养，获得的具有一定特异性的抗肿瘤细胞。其局限在于分离困难，体外培养时间过长。我们于1997-1998年选择21例癌性胸腹水患者，其中肺癌4例，乳腺癌5例，肠癌4例，骨癌7例，胰腺癌1例。所有病例均经病理学和细胞学诊断。共抽取33次胸腹水做TIL细胞培养，抽取胸水2502200ml，腹水量12004400ml。21例患者中14例经16次的TIL胸腹腔回输治疗。回输期间隔天皮下注射IL-2 50万单位。14例患者回输治疗结果显示总有效率为78.57%，其中3例胸腹水消失，并观察1个月无复发，1个月后检查胸腹水无瘤细胞；8例胸腹水有明显减少，并控制1个月以上；3例仅控制12周。4 4)TAKTAK细胞细胞 TAK是由可溶性肿瘤抗原，抗CD3单抗和IL-2共同诱导的杀瘤细胞。用可溶性肿瘤抗原诱导细胞识别肿瘤，以提高杀瘤亲和性；用抗CD3单抗诱导所有T细胞活化，培养出以CD8+T细胞为主的杀瘤细胞。TAK细胞不仅增加了杀瘤的特异性，且体外增殖快，IL-2用量低。用胃癌可溶性抗原（TSA），联合抗CD3单抗和IL-2共同刺激正常人的外周血单核细胞，培养10天后，经流式细胞仪表型分析，表明其免疫效应细胞以CD8+T细胞为主，其细胞增殖速度，增殖水平与CD3AK和LAK相比明显升高，且对抗原来源的胃癌细胞具有极 强 的 杀 伤 活 性（98.5%），高 于 CD3AK（82.1%）和LAK（62.05%）。我们于1996-1998年，采用静脉或口服化疗和免疫效应细胞输注为主体的化学免疫疗法，治疗晚期原发性肝癌18例。收治的38例晚期原发性肝癌病人中，18例采用化学免疫疗法（甲组），同期收治的晚期肝癌患者，除对症处理外，单用静脉化疗或肝动脉插管化疗20例，列为对照组（乙组）。总缓解率（总缓解率（CR+PRCR+PR）：）：甲组22.22%（4/18）乙组0%无1例缓解 5 5)CIKCIK细胞细胞 是将人外周血单个核细胞经体外用各种细胞因子共同刺激培养所获得的免疫细胞。由于同时表达CD3和CD56分子，故又称为NK样T细胞，CIK细胞兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点，其抗肿瘤活性远大于LAK和TIL。因此被认为是新一代肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。刺激因子除了抗CD3单抗、IL-2外，还需用IFN-和IL-1等细胞因子。CIKCIK细胞杀伤机制细胞杀伤机制、识识别别 由于CIK的细胞杀伤作用是非MHC限制性的，故CD4、CD8在其识别肿瘤细胞或病毒感染的细胞过程中并非必不可少。细胞表面粘附分子LFA-1 ICAM-1在CIK细胞识别过程中起关键作用。对正常细胞无毒性作用。、杀杀伤伤 细胞对肿瘤细胞或感染细胞的直接杀伤：CIK细胞在受到外源性抗原或敏感靶细胞刺激时会释放具有细胞毒性的胞浆颗粒物到膜外空间，其中细胞可产生最大的颗粒释放量。这些胞浆颗粒物对靶细胞具有直接杀伤作用。炎性细胞因子的杀伤活性：培养的细胞可以分泌多种细胞因子，如、（肿瘤坏死因子）、等，不仅对靶细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫 系 统 反 应 性 间 接 杀 伤 靶 细 胞。诱导肿瘤细胞凋亡：细胞在培养过程中表达（型跨膜糖蛋白），一方面增强了其对肿瘤细胞引发的凋亡的抵抗性，还可通过对（型跨膜糖蛋白）肿瘤细胞诱导凋亡行使其对肿瘤细胞的慢性杀伤作用，保证抗瘤活性的长期持久。CIKCIK细胞的杀瘤特点细胞的杀瘤特点 1、增殖速度快 CIK细胞中的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见，仅1%5%，在体外经多因子培养2830天，CD3+CD56+细胞迅速增多，较培养前升幅可达1000倍以上。且所占百分比也大幅上升，细胞毒活性亦达峰值。2、杀伤活性高、杀瘤谱广 CIK细胞的总杀伤单位（TLU）为LAK 细胞的73倍甚至更高，CIK细胞的瘤细胞抑制Log指数为2.53.5，较LAK细胞的瘤细胞抑制指数高2 个Log。其抗病毒活性大大增强。因没有T 淋巴细胞杀伤时的MHC 限制性，故对于多种肿瘤细胞 系 和 新 鲜 肿 瘤 组 织 均 表 现 出 强 大 的 杀 伤 活 性。3、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感 CIK细胞对化疗药物敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性，两者比较无差别。4、杀 瘤 活 性 不 受 CsA、FK506等 免 疫 抑 制 剂 的 影 响 免疫抑制剂CsA（环孢霉素A）和FK506（普乐可复）不影响靶细胞诱导的CIK细 胞 脱 颗 粒，并 且 CIK细 胞 对 靶 细 胞 的 杀 伤 活 性 不 会 因 此 降 低。5、对正常骨髓造血前体细胞毒性很小 CIK细胞对正常髓系克隆生成几乎没有影响，对GM-CFU（粒细胞巨噬细胞集落形成单位）仅有不足1级的抑制。6、能 抵 抗 肿 瘤 细 胞 引 发 的 效 应 细 胞 Fas-FasL凋 亡 CIK细胞内有抗凋亡基因表达，并检出多种保护基因，如Bcl-2等和survivin的转录水平上调。CIK细胞具备合成FasL的能力，CIK细胞可以对抗体内FasL阳性肿瘤所引发的效应细胞活性下降。CIKCIK制制备备采集：外周血单个核细胞。分离：PBMNC经淋巴细胞分离液分离、洗涤后悬浮于含10%AB血清的RPMI 1640中。培养：第一天培养加入-IFN 1000U/ml，24小时后加入IL-2 1000U/ml，在37，5%CO2孵箱中培养。以后每3天更换培养液补加IL-2 1000U/ml；培养710天。无菌检测：细菌霉菌培养阴性；热源检测阴性。收获：收集细胞，加入含1%白蛋白的生理盐水洗涤。回输：洗涤后的细胞悬浮于1%白蛋白生理盐水中，将CIK细胞通过输血器经静脉输给患者。疗程：培养的第8-10天开始，分八袋回输，每次间隔1-2天。自回输CIK细胞前一天起,可每日静脉输注IL-2，每日剂量为100万单位直到回输结束。临床应用临床应用 体内回输CIK细胞,可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并可调节和增强机体的免疫功能。特别适应于那些对手术、放疗、化疗已无适应证的晚期肿瘤患者,因而成为治疗肿瘤的重要辅助治疗方法,为预防肿瘤复发、改善生存质量提供了新途径。一般在放疗、化疗后间隔24周,机体免疫力有所恢复时,输入CIK细胞,可提高肿瘤患者的缓解率并在清除微小残留病灶方面发挥重要作用。6 6)DC-CIKDC-CIK 将外周血来源的CIK 细胞和同源DC 细胞共培养一段时间后发现,DC 和CIK 细胞的增殖能力明显增强,共培养14 d 后CIK细胞的增殖倍数比共培养7d 时高出2 倍左右。共培养24 h 后,DC 细胞白细胞介素12 的分泌量为单独培养时的6.93 倍,与DC 细胞共培养的CIK 细胞对肿瘤细胞的杀伤活性显著提高。DC-CIKDC-CIK制备流程制备流程7)NK7)NK细胞细胞自然杀伤细胞(naturalkiller cell,NK)细胞不经致敏可直接杀伤敏感的肿瘤细胞,是宿主抗肿瘤的第一道防线。自然杀伤细胞(黄色)在它们严重破坏机体之前识别并杀死癌细胞(粉红色)或病毒感染的细胞NK细胞受体和配体细胞受体和配体中国肿瘤临床 2013,40卷9090例例食食管管癌癌中中晚晚期期患患者者（TNM TNM III-IVIII-IV期期）接接受受枯枯息息性性手手术术后后，分分为为单单纯纯化化疗疗组组4040例例、化化疗疗联联合合NKNK细细胞胞治治疗疗MCIAMCIA阴阴性性组组（简简称称联联合合MICA-MICA-组组）2525例例及及化化疗疗联联合合NKNK细细胞胞治治疗疗MCIAMCIA阳性组（简称联合阳性组（简称联合MICA+MICA+组）组）2525例。例。中国肿瘤生物治疗杂志 2013,20卷体细胞免疫治疗联合肿瘤常规治疗的基本方案体细胞免疫治疗联合肿瘤常规治疗的基本方案恶性肿瘤恶性肿瘤手术治疗手术治疗可手术可手术放化疗敏感（常规放化疗）放化疗敏感（常规放化疗）放化疗间隙联合细胞免疫治疗放化疗间隙联合细胞免疫治疗（卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等）放化疗不敏感放化疗不敏感（肾癌、前列腺癌、黑色素瘤（肾癌、前列腺癌、黑色素瘤和肝癌等）和肝癌等）放化疗敏感（常规放化疗）放化疗敏感（常规放化疗）放化疗间隙联合细胞免疫治疗放化疗间隙联合细胞免疫治疗（卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺（卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺癌和鼻咽癌等）癌和鼻咽癌等）细胞免疫治疗细胞免疫治疗疾病疾病稳定期稳定期细胞免疫治疗细胞免疫治疗联合内分泌或联合内分泌或靶向治疗，细靶向治疗，细胞因子治疗胞因子治疗专科治疗专科治疗（微创介入）（微创介入）不能手术（不能手术（期，期，期）期）复发者复发者细胞免疫治疗细胞免疫治疗疾病疾病稳定期稳定期 化疗不敏感化疗不敏感（原发性肝癌、肾癌、前列腺（原发性肝癌、肾癌、前列腺癌和黑色素瘤等）癌和黑色素瘤等）细胞免疫治疗细胞免疫治疗联合专科治疗联合专科治疗CIKCIK输注不良反应输注不良反应免疫活性细胞回输后患者可出现一过性类流感样症状，如发热（体温37.539.5），轻度头痛、乏力、关节酸痛，持续时间均不超过12 h，可自行缓解，所有患者均能很好耐受治疗。3 3、过继性免疫效应细胞治疗的优点、过继性免疫效应细胞治疗的优点 (1)(1)免免疫疫细细胞胞在在体体外外处处理理，可可绕绕过过体体内内肿肿瘤瘤免免疫疫障障碍碍的的种种种种机机制，从而选择性地操作抗肿瘤免疫反应制，从而选择性地操作抗肿瘤免疫反应:如如新新鲜鲜分分离离的的肿肿瘤瘤浸浸润润性性淋淋巴巴细细胞胞（tumor tumor infiltrating infiltrating lymphocytelymphocyte，TILTIL）往往往往缺缺乏乏抗抗肿肿瘤瘤效效应应，而而在在体体外外一一定定条条件件下下培培养养一一段段时时间间后后可可恢恢复复特特异异性性抗抗肿肿瘤瘤作作用用；在在体体外外培培养养条件下，肿瘤抗原特异性耐受的免疫细胞可被逆转。条件下，肿瘤抗原特异性耐受的免疫细胞可被逆转。(2)(2)免免疫疫细细胞胞的的活活化化及及效效应应过过程程往往往往由由一一些些细细胞胞因因子子介介导导，而而目目前前基基因因工工程程可可大大量量克克隆隆不不同同的的细细胞胞因因子子，也也可可大大量量克克隆隆肿肿瘤瘤抗抗原原或或多多肽肽，这这使使体体外外活活化化扩扩增增大大量的抗肿瘤免疫细胞更为可行方便。量的抗肿瘤免疫细胞更为可行方便。(3)(3)免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂免疫细胞的体外活化扩增可避免一些制剂 体内大量应用带来的严重毒副作体内大量应用带来的严重毒副作 用，如用，如:ILIL2 2、TNFTNF、ILIL4 4、ILIL7 7、ILIL1212等等具具有有抗抗肿肿瘤瘤作作用用，抗抗CD3CD3单单克克隆隆抗抗体体(MabCD3)(MabCD3)的的体体内内应应用用可可激激活活T T淋淋巴巴细细胞胞，但但这这些些制制剂剂由由于于其其复复杂杂的的多多种种作作用用，在在体体内内大大量量应应用用可可导导致致严严重重的的甚甚至至致致死死性性副副作作用用，这这也也是是这这些些因因子子难难以以被被批批准准临临床床使使用的重要原因，而在体外操作可避免这些副作用。用的重要原因，而在体外操作可避免这些副作用。(4)(4)目前已能在体外大量扩增自体或异基因的抗肿目前已能在体外大量扩增自体或异基因的抗肿 瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效瘤免疫细胞，其数量大于肿瘤疫苗在体内激活的效 应细胞数，一些体外培养的免疫细胞已进入临床治应细胞数，一些体外培养的免疫细胞已进入临床治 疗试验。疗试验。实实验验显显示示肿肿瘤瘤疫疫苗苗在在体体内内应应用用可可增增加加体体内内的的肿肿瘤瘤特特异异性性CTLCTL数数量量，但但到到一一定定时时候候，体体内内的的CTLCTL到到达达平平台台期期而而不不再再增增加加，这这主主要要由由体体内内存存在在的的特特异异性性及及非非特特异异性性免免疫疫调调节节网网络络限限制制了了CTLCTL克克隆隆的的扩扩增增。而而在在体体外外培培养养可可突突破破此此调调节节网网络络，大大量量扩扩增增免免疫疫效效应应细细胞。胞。理想的过继性免疫细胞治疗应具有以下特点理想的过继性免疫细胞治疗应具有以下特点:(1)(1)可可大大量量获获得得，实实验验室室研研究究及及临临床床实实践践显显示示，临临床床治治疗疗量量的免疫细胞应在的免疫细胞应在1101101010以上以上 (2)(2)为肿瘤特异性为肿瘤特异性 (3)(3)抗肿瘤活性强抗肿瘤活性强 (4)(4)体内应用可耐受体内应用可耐受 (5)(5)可聚集在肿瘤灶可聚集在肿瘤灶 (6)(6)可在体内存活可在体内存活 、增殖、增殖 二、免疫治疗的作用 肿肿瘤瘤免免疫疫治治疗疗即即能能够够直直接接清清除除体体内内的的残残存存肿肿瘤瘤细细胞胞，又又能能够够提提高高机机体体的的整整体体免免疫疫功功能能，还还具具有有将将患患者者个个体体化化的的肿肿瘤瘤抗抗原原信信息息递递呈呈给给体体内内肿肿瘤瘤免免疫疫杀杀伤细胞的独特作用。伤细胞的独特作用。肿肿瘤瘤免免疫疫治治疗疗已已成成为为临临床床上上继继手手术术、化化疗疗、放放疗疗之之后后的的第第四四种种最最有有效效的的肿肿瘤瘤治治疗疗方方法法。在在肿肿瘤瘤综综合合治治疗疗方方案案中中，免免疫疫治治疗疗成成为为提提高高肿肿瘤瘤治治愈愈率率和和有有效率的一个关键措施效率的一个关键措施。三、免三、免疫治疗的临床地位疫治疗的临床地位免疫治疗是最有前途的抗肿瘤手段之一免疫治疗是最有前途的抗肿瘤手段之一目前尚未起主导作用目前尚未起主导作用定位于手术、放化疗后清除残留病灶定位于手术、放化疗后清除残留病灶目标是预防复发目标是预防复发关键是抗原在体内有效地被递呈并激关键是抗原在体内有效地被递呈并激 活活T T淋巴细胞淋巴细胞四、免四、免疫疫治疗的治疗的原则原则 虽虽然然目目前前免免疫疫治治疗疗的的方方法法还还不不是是很很有有效效的的，只只能能配配合合其其他他疗疗法法作作为为一一种种 辅辅助助手手段段。但但从从肿肿瘤瘤免免疫疫的的理理论论看看，它它涉涉及及的的是是肿肿瘤瘤发发生生发发展展的的内内部部因因素素和和内内部部矛矛盾盾性性。随随着着它它的的迅迅速速发发展展，为为肿肿瘤瘤的的免免疫疫治治疗疗提出了广泛的可能。提出了广泛的可能。从从宿宿主主与与肿肿瘤瘤相相互互斗斗争争这这一一矛矛盾盾出出发发，从从增增强强宿宿主主对对肿肿瘤瘤的的免免疫疫能能力力，以以及及消消除除肿肿瘤瘤对对免免疫疫功功能能的的抑抑制制两两个个方方面面入入手手，并并继继续续在在增增强强机机体体非非特特异异性性免免疫疫能能力力方方面面进进行行研研究究，肿肿瘤瘤的的免免疫疫治治疗疗是是大大有有希希望望的。的。1 1、增强宿主对肿瘤的免疫能力：增强宿主对肿瘤的免疫能力：1 1）提纯改造抗原，提高抗原的免疫作用）提纯改造抗原，提高抗原的免疫作用2 2）发挥细胞免疫的作用进行过继免疫治疗）发挥细胞免疫的作用进行过继免疫治疗3 3）利用细胞因子激活抗肿瘤免疫）利用细胞因子激活抗肿瘤免疫4 4）抗体导向治疗）抗体导向治疗2 2、消除肿瘤对免疫的对抗消除肿瘤对免疫的对抗 如如何何清清除除免免疫疫抑抑制制因因子子的的作作用用，是是肿肿瘤瘤免免疫疫治治疗很有希望的一个方面。疗很有希望的一个方面。五、免五、免疫治疗的评价疫治疗的评价1 1、临床评价：、临床评价：病病 灶灶 变变 化化-临临 床床 查查 体体 和和 影影 像像 学学 检检 查查（CTCT、MRIMRI、B B超、等）超、等）内镜检查内镜检查 肿瘤标志物肿瘤标志物 肝功、肾功、血象等的改善肝功、肾功、血象等的改善 其他其他肿瘤标志物（tumor markers,TM)19781978年年NCINCI提出提出19791979年确认并开始使用年确认并开始使用TMTM是是表表示示肿肿瘤瘤存存在在并并反反映映其其一一定定的的生生物物特性的生化物质特性的生化物质TMTM主主要要是是指指那那些些在在血血液液、体体液液及及组组织织中中可可检检测测到到的的与与肿肿瘤瘤相相关关的的物物质质，这这些些物物质质达达到到一一定定的的水水平平时时能能揭揭示示某某些些肿肿瘤瘤的的存在。存在。TMTM的临床意义：的临床意义：（1 1）诊诊断断 （2 2）复复发发（3 3）判判断断疗疗效效（4 4）预后）预后常用肿瘤标志物甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFPAFP）癌胚抗原（癌胚抗原（CEACEA）糖糖类类抗抗原原（CA50CA50、CA125CA125、CA15-3CA15-3、CA199CA199、CA242CA242、CA72-4CA72-4）2-2-微球蛋白（微球蛋白（2-MG2-MG）铁蛋白（铁蛋白（FtFt）细胞角质素片段抗原细胞角质素片段抗原21-121-1（CYFRA21-1CYFRA21-1）神经元特异性烯醇化酶（神经元特异性烯醇化酶（NSENSE）鳞状上皮癌相关抗原（鳞状上皮癌相关抗原（SCC-AgSCC-Ag）前列腺特异抗原（前列腺特异抗原（PSAPSA）前列腺酸性磷酸酶（前列腺酸性磷酸酶（PAPPAP）核基质核基质2 2、免疫监测、免疫监测 -观观察察CTLCTL的的反反应应、认认定定CTLCTL反反应应的的细细胞胞类类型、等，从而评价机体对免疫治疗的反应型、等，从而评价机体对免疫治疗的反应1 1）迟发超敏试验（）迟发超敏试验（DTHDTH）-体内抗原特异性免疫监测技术体内抗原特异性免疫监测技术2 2）机体免疫功能检测）机体免疫功能检测 体体液液免免疫疫指指标标：定定量量分分析析抗抗原原特特异异性性抗抗体体的的数数量和功能量和功能检验科检验科 细细胞胞免免疫疫功功能能：FCMFCM技技术术检检测测淋淋巴巴细细胞胞表表面面标标志志 CD3CD3、CD4CD4、CD8CD8、CD19CD19、CD28CD28、CD16/CD56CD16/CD56、CD25CD25、HLA-DRHLA-DR、等等。、等等。实验实验室室 Th1Th1、Th2Th2类类因因子子检检测测：应应用用FCM-CBAFCM-CBA技技术术，采采用用磁磁珠珠微微阵阵列列技技术术，同同时时测测定定血血清清中中4 46 6种种免免疫疫相相关因子的水平关因子的水平实验实验室室3 3）T T细胞增殖反应细胞增殖反应