LncRNA_MIR443...β1对NSCLC细胞的影响_陈宇.pdf

33(1):68Feb.,2023生物技术Biotechnology第 33 卷第 1 期2023 年 2 月 收稿日期:2022-09-16 作者简介:陈宇(1981-),男,湖北省丹江口人,硕士,主治医师,研究方向:肿瘤微创及分子靶向治疗,发表论文 20 余篇,其中 SCI 1 篇,出版专著 1 部,申请专利 3 件,E-mail:myth 。通讯作者:袁丽(1979-),女,湖北省黄陂人,学士,实验师,研究方向:妇科肿瘤,发表论文 10 篇,其中 SCI 1 篇,申请专利 3 件,E-mail:。LncRNA MIR4435-2HG 靶向 TGF-1 对 NSCLC 细胞的影响陈宇1,袁丽2(1.十堰市太和医院/湖北医药学院附属医院肿瘤科,湖北 十堰 442000;2.湖北医药学院第一临床学院,湖北 十堰 442000)摘要:目的 探讨长链非编码 RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)靶向上调转化生长因子-1(TGF-1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、增殖的作用及其初步机制。方法 检测 NSCLC 癌组织及其癌旁组织、NSCLC 细胞株及正常人支气管上皮细胞(HBE)中 MIR4435-2HG 和 TGF-1 表达。将 pcDNA-MIR4435-2HG 和 pcDNA 质粒转染至 A549 细胞,CCK-8 法、Transwell 法检测细胞增殖、迁移能力。Western Blot 法检测细胞 TGF-1 表达。免疫共沉淀验证 MIR4435-2HG 与 TGF-1 靶向作用。结果NSCLC 组织 MIR4435-2HG(1.89 0.52 vs 0.76 0.48)和TGF-1 相对表达量(1.43 0.22 vs 0.37 0.18)均高于癌旁组织(P 0.05);与 HBE 细胞比较,NSCLC 细胞株MIR4435-2HG 相对表达量升高(P 0.05),且其中 A549 细胞高于 H226 细胞(P 0.05);与阴性对照组比较,MIR4435-2HG 过表达组细胞 MIR4435-2HG(4.72 0.43 vs 3.38 0.46)及 TGF-1(0.82 0.13 vs 1.07 0.24)相对表达量、细胞 48 h OD 值(0.43 0.03 vs 0.52 0.04)及迁移数量(89.63 18.28)个 vs(169.89 20.34)个均增加(P 0.05)。结论 NSCLC 组织中 MIR4435-2HG 呈高表达,LncRNA MIR4435-2HG 可能通过靶向上调 TGF-1 促进 NSCLC 细胞迁移和增殖。关键词:非小细胞肺癌;LncRNA MIR4435-2HG;转化生长因子-1;迁移;增殖;生物学行为;靶向调节中图分类号:R734.2 文献标识码:A DOI:10.16519/ki.1004-311x.2023.01.0011Effects of LncRNA MIR4435-2HG targeting TGF-1 on thebiological behavior of non-small cell lung cancer cellsCHEN Yu1,YUAN Li2(1.Department of Oncology,Taihe Hospital/Affiliated Hospital of Hubei Univesity of Medicine,Shiyan 442000,China;2.The First Clinical College,Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)Abstract:Objective To investigate the effect and its mechanism of long-chain non-coding RNA MIR4435-2HG(Ln-cRNA MIR4435-2HG)-mediated upregulation of transforming growth factor-1(TGF-1)on the migration and prolifera-tion of non-small cell lung cancer(NSCLC)cells.MethodMIR4435-2HG and TGF-1 expression were detected inNSCLC cancer tissues and their tissues,NSCLC cell lines and normal human bronchial epithelial cells(HBE).PcDNA-MIR4435-2HG and pcDNA plasmids were transfected into A549 cells,and cell proliferation and migration were measured byCCK-8 assay and transwell assay.TGF-1 expression in cells was detected by Western Blot.Co-immunoprecipitation wasperformed to verify MIR4435-2HG targeting with TGF-1.Result The relative expression levels of MIR4435-2HG(1.890.52 vs 0.76 0.48)and TGF-1(1.43 0.22 vs 0.37 0.18)in NSCLC tissues were higher than those in paracancer-ous tissues(P 0.05).Compared with HBE cells,the relative expression levels of MIR4435-2HG in NSCLC cell lines wereincreased(P 0.05),and A549 cells were higher than H226 cells(P 0.05).Compared with the negative control group,therelative expression levels of MIR4435-2HG(4.72 0.43 vs 3.38 0.46)and TGF-1(0.82 0.13 vs 1.07 0.24),ODvalue at 48 hours(0.43 0.03 vs 0.52 0.04)and migration number(89.63 18.28)vs(169.89 20.34)in theMIR4435-2HG overexpression group were increased(P 0.05).ConclusionMIR4435-2HG showed highexpression in NSCLC tissues,and lncRNA MIR4435-2HG may promote NSCLC cell migration and proliferation by targeted up-regulation of TGF-1.Keywords:non-small cell lung cancer;LncRNA MIR4435-2HG;transforming growth factor-1;migration;proliferation;1 期陈宇,等:LncRNA MIR4435-2HG 靶向 TGF-1 对 NSCLC 细胞的影响biological behavior;targeted regulation长链非编码 RNA(Long non coding RNA,Ln-cRNA)是一类长度大于 200nt 的非编码 RNA 分子1。近年研究表明,某些异常表达的 LncRNA 在非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer,NSCLC)发生发展中发挥重要作用,不仅可提高诊断 NSCLC 敏感度和特异度,还可通过以质粒为基础的靶向治疗等针对 LncRNA 治疗改善患者预后2-3。LncRNAMIR4435-2HG 被多项研究证实参与了肺癌、胃癌等恶性肿瘤细胞的生物学行为调节过程。转化生长因子-1(Transforming growth factor-1,TGF-1)是细胞多种生命活动的重要调节因子。研究表明,TGF-1 在包括肺癌在内的多种肿瘤组织中表达上调,并可通过促进肿瘤细胞迁移和增殖,参与癌症发生和发展4。既往研究发现,在多种恶性肿瘤疾病中,TGF-1 可被 LncRNA 调控5。另有研究发现,LncRNA MIR4435-2HG 可通过调控 -连环蛋白通路促进肺癌发生和发展6,而 TGF-1 为-连环蛋白通路下游重要调控因子之一,但 Ln-cRNA MIR4435-2HG 是否通过靶向上调 TGF-1影响 NSCLC 细胞生物学行为尚不明确7。本研究就此进行分析并报道如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验材料选择 2019 年 9 月-2020 年 9 月接受手术治疗的113 例 NSCLC 患者,收集 NSCLC 癌组织及其癌旁组织(距癌组织至少 5 cm)。所有患者术前均未接受放化疗等抗肿瘤治疗,其中男性 60 例、女性 53例,年龄 31 80 岁,平均年龄为(58.93 10.15)岁;病理组织类型,鳞癌 54 例、腺癌 39 例、腺鳞癌 20例。研究经医院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。正常人支气管上皮细胞(HBE)、人肺鳞癌细胞(H226)、人肺腺癌细胞(A549)均购自宁波明舟生物科技有限公司。1.1.2 试剂A549/Tax 细胞专用培养基、PBS 缓冲液、胰蛋白酶,宁波明舟生物科技有限公司;Lipofectamine2000 试剂,深圳子科生物科技有限公司;总 RNA 提取试剂盒、反转录试剂盒、CCK-8 试剂盒、RIPA 裂解液、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、膜封闭液、ECL 试剂盒,北京百奥莱博生物科技有限公司;SYBRPremix Ex Taq 试剂盒,大连宝生物工程有限公司;TGF-1 多克隆抗体、GAPDH 多克隆抗体,上海雅吉生物技术有限公司;兔抗人 IgG 抗体,北京百奥莱博科技有限公司。1.1.3 仪器荧光定量 PCR 仪(QuantStudio 5)、酶标仪(Mul-tiskan FC),美国赛默飞世尔公司。1.2 方法1.2.1 细胞培养与转染将细胞置于专用培养基中,37、5%CO2培养箱内培养;待细胞密度达 80%90%时,弃去培养上清,PBS 缓冲液冲洗细胞 1 2 次,每次 5 min;0.25%胰蛋白酶消化细胞,至细胞大部分变圆并脱落,加少量培养基终止消化;加培养基至培养瓶内,轻轻吹打后,1 000 r/min 离心 4 min,弃上清;加 1 2 mL培养基重悬,放入培养箱继续培养至对数期,消化下细胞并调整浓度为 1 105个/mL,随后接种于24 孔板中;以 pcDNA3.1 质粒为载体构建 MIR4435-2HG 过表达质粒(MIR4435-2HG 过表达组),以无意义序列插入 pcDNA3.1 构建空白质粒(阴性对照组);利用 Lipofectamine 2000 试剂,将 pcDNA-MIR4435-2HG 和 pcDNA-NC 转染至 A549 细胞,37、5%CO2培养箱内培养,48 h 后采用实时荧光定量 PCR 技术验证转染效率。1.2.2 RT-PCR 反应取组织和对数生长期细胞,组织加 1 mL 裂解液,匀浆器匀浆处理,细胞直接在培养板中加入细胞裂解液后进行吹打;室温静置 5 min 后加入 0.2 mL氯仿并振荡 15 s,随后静置 3 5 min;4 下 12 000r/min 离心 10 min;吸取上层无色水相,并转移至新EP 管;吸附柱中加入 500 L 洗柱液,室温放置2 min;4 下 12 000 r/min 离心 2 min,弃废液;加入200 L 无水乙醇混匀后以12 000 r/min 离心2 min,取沉淀;加入 600 L 漂洗液;4 下12 000 r/min 离心2 min,弃废液;4 下12 000 r/min 离心2 min,弃收集管;室温静置 5 min,滴加 RNase free ddH2O 100L 处理 5 min 后,12 000 r/min 离心 2 min;分别提取组织和细胞总 RNA 后,逆转录合成 cDNA;由苏州泓迅生物科技股份有限公司设计并合成引物,96生 物 技 术2023 年MIR4435-2HG 上 游 引 物 5-CGGAGCATG-GAACTCGACA-3,下游引物 5-CAAGTCTCACA-CATCCGGG-3;TGF-1 上游引物 5-CTGTGGC-TACTGGTGCTGAC-3,下游引物 5-AAGGCGAAAGCCCTCAAT-3,GAPDH 为内参,GAPDH 上游引物 5-AAGGTGAAGGTCGGAGTCA-3,下游引物5-AATGAAGGGGTCATTGATG-3;按 照 SYBRPremix Ex Taq 试剂盒说明书操作,荧光定量 PCR仪上进行 RT-PCR 反应,测定循环阈值(Cyclethreshold,Ct);采用 2-Ct法分析目的基因相对表达量,Ct=Ct目的基因-Ct内参基因。1.2.3 细胞增殖采用 CCK-8 法。取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化,加入无血清培养基制备 2 104个/mL 的细胞悬液,接种于 96 孔板内,37、5%CO2培养;分别于0 h、24 h 和48 h 加入 CCK-8 试剂,室温孵育30 min;酶标仪测定波长450 nm 处光密度(Op-tical density,OD)值,以时间为横坐标,OD 值为纵坐标,绘制标准曲线,OD 值越大表明细胞存活率越高,增殖能力越强。1.2.4 细胞迁移采用 Transwell 迁移实验。取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化,加入无血清培养基制备浓度为 4 105个/mL 的细胞悬液;取 Transwell 小室,置于24 孔板;取100 L 细胞悬液置于上室,500 L 含10%胎牛血清培养基于下室,每组设置 3 个复孔;24h 后,弃去上室培养基,置于含多聚甲醛的 24 孔板内;结晶紫染色 10 min,弃去溶液,倒置风干,无菌棉签拭去未穿过膜的细胞;倒置显微镜下(100 )随机选取 5 个视野,计数细胞迁移数量,迁移数量越多表明细胞迁移能力越强。1.2.5 蛋白免疫印迹实验取对数生长期细胞,根据标准品和样品量,按501 将 BCA 试剂和 Cu 试剂配制成 BCA 工作液,充分混匀后室温稳定24 h;取 BSA 标准品100 L,PBS溶液稀释至 1 mL,使终浓度为 0.5 mg/mL;取 5 mL离心管,加入配置好的试剂,37 静置 15 30 min;分光光度计测定 562 nm 处吸光度(Absorbance,A)值,根据标准曲线计算出蛋白浓度;取 40 g 样品行琼脂糖凝胶电泳,转膜、封闭,室温反应 1 h;滴加TGF-1 抗体(1 500),GAPDH 为内参,GAPDH 抗体(1500),室温孵育 4 h;PBS 缓冲液冲洗 3 次,每次 5 min;滴加二抗,室温孵育 2 h;PBS 缓冲液冲洗3 次,每次 5 min;ECL 法显色,Image ProPlus 软件量化目的蛋白相对表达量。之后分别以 0、5、10、20 ng/mL的 TGF-1 处理 A549 细胞,同步骤进行蛋白免疫印迹试验,分析 TGF-1 对 MIR4435-2HG 表达的影响。1.2.6 免疫共沉淀实验取对数生长期细胞,滴加 RIPA 溶液,冰上裂解30 min;滴加 TGF-1 抗体,4 摇床过夜;MIR4435-2HG 蛋白样品以 10 1 与 50%琼脂糖蛋白 A 混匀,冰浴摇床10 min 后滴加 TGF-1 抗体反应4 h;随后以 3 000 r/min 离心 3 min,取沉淀;RIPA 溶液冲洗,加入 2 SDS 上样缓冲液,沸水浴煮沸 5 min;同样方式选用 MIR4435-2HG 抗体,最终进行 West-ern Blot 实验。1.2.7 统计学处理SPSS20.0 软件包分析数据。符合正态分布计量资料如 MIR4435-2HG、TGF-1 表达量等以(x s)表示,多组间比较用单因素方差分析,组间两两比较用 snk-q 检验,两组间比较用独立样本 t 检验。P 0.05 为差异具有统计学意义。2 结果与分析2.1NSCLC 组织及癌旁组织 MIR4435-2HG 和TGF-1 表达 NSCLC 组织 MIR4435-2HG 和 TGF-1 相对表达量分别为(1.89 0.52)、(1.43 0.22),癌旁组织 MIR4435-2HG 和 TGF-1 相对表达量分别为(0.76 0.48)、(0.37 0.18)。NSCLC 组织MIR4435-2HG 和 TGF-1 相对表达量均显著高于癌旁组织(t=9.843,P 0.01;t=22.988,P 0.05)。表 1 NSCLC 组织及癌旁组织 MIR4435-2HG 和TGF-1 表达(x s)Tab.1 Expression of MIR4435-2HG and TGF-1 inNSCLC and adjacent etissue(x s)组别MIR4435-2HGTGF-1NSCLC 组织1.89 0.521.43 0.22癌旁组织0.76 0.480.37 0.18t9.84322.988P0.0010.00107 1 期陈宇,等:LncRNA MIR4435-2HG 靶向 TGF-1 对 NSCLC 细胞的影响2.2NSCLC 细胞株及 HBE 细胞 MIR4435-2HG表达 A549 细胞、H226 细胞和 HBE 细胞 MIR4435-2HG 相对表达量分别为(3.43 0.51)、(2.21 0.48)、(1.01 0.36)。与 HBE 细胞比较,NSCLC细胞株 MIR4435-2HG 相对表达量显著升高(F=12.493,P 0.05),且 A549 细胞显著高于 H226 细胞(t=7.216,P 0.01)。因此,选用 A549 细胞进行后续实验。表 2 NSCLC 细胞株及 HBE 细胞 MIR4435-2HG 和TGF-1 表达(x s)Tab.2 Expression of MIR4435-2HG and TGF-1in NSCLC cell lines and HBE cells(x s)NSCLC 细胞株MIR4435-2HGA5493.43 0.51H2262.21 0.48HBE1.01 0.36F6.167P0.0012.3 细胞转染结果转染 48 h 后,MIR4435-2HG 过表达组和阴性对照组细胞 MIR4435-2HG 相对表达量分别为(4.72 0.43)、(3.38 0.46)。与阴性对照组比较,MIR4435-2HG 过表达组细胞 MIR4435-2HG 相对表达量显著升高(P 0.05),见图 1。图 1 细胞转染结果注:与阴性对照组比较,P 0.05。Fig.1 Results of cell transfectionNote:Compared with the negative control group,P 0.05.2.4过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞增殖的影响 与阴性对照组比较,MIR4435-2HG 过表达组细胞增殖能力显著增加(P 0.05),且呈时间依赖性,见表 3。表 3 过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞增殖的影响(x s)Tab.3 Effect of overexpression of MIR4435-2HGon the proliferation of A549 cells(x s)组别OD 值0 h24 h48 h阴性对照组0.25 0.010.26 0.020.43 0.03MIR4435-2HG 过表达组0.26 0.010.27 0.020.52 0.04t0.8930.1556.481P0.2580.0140.001图 2 过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞迁移的影响(400 )注:A、B:MIR4435-2HG 过表达组、阴性对照组细胞迁移情况;C:MIR4435-2HG 过表达组和阴性对照组细胞迁移统计图。与阴性对照组比较,P 0.05。Fig.2 Effect of overexpression of MIR4435-2HGon the migration of A549 cells(400 )Note:A,B:cell migration in MIR4435-2HG overexpression groupand negative control group;C:Statistical diagram of cell migration inMIR4435-2HG overexpression group and negative control group.Compared with the negative control group,P 0.05.17生 物 技 术2023 年2.5过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞迁移的影响 转染 48 h 后,MIR4435-2HG 过表达组和阴性对照组迁移细胞相对数量分别为(169.89 20.34)、(89.63 18.28)。与阴性对照组比较,MIR4435-2HG 过表达组细胞迁移能力显著增加(P 0.05),见图 2。2.6 过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞 TGF-1蛋白表达的影响 与阴性对照组比较,MIR4435-2HG 过表达组细胞 TGF-1 蛋白表达显著上调(P 0.05),见图 3B。图 3 过表达 MIR4435-2HG 对 A549 细胞 TGF-1 表达的影响注:A:MIR4435-2HG 过表达组和阴性对照组 TGF-1 蛋白表达条带图;B:MIR4435-2HG 过表达组和阴性对照组 TGF-1蛋白表达情况;C:不同 TGF-1 浓度处理细胞的 MIR4435-2HG 表达情况。与阴性对照组比较,P 0.05。Fig.3 Effect of overexpression of MIR4435-2HGon the expression of TGF-1 in A549 cellsNote:A:MIR4435-2HG overexpression group and negative controlgroup TGF-1 protein expression;B:Different TGF-1 MIR4435-2HG expression in cells treated with 1 concentration.Comparedwith the negative control group,P 0.05.2.7 MIR4435-2HG 与 TGF-1 靶向作用免疫共沉淀实验结果(图 4)显示,MIR4435-2HG 蛋白可与 TGF-1 抗体共沉淀,TGF-1 抗体亦可与 MIR4435-2HG 抗体共沉淀。图 4 MIR4435-2HG 与 TGF-1 靶向作用注:1:阳性对照组(沉淀前总蛋白);2:A549 组;3:阴性对照组(小鼠 IgG 沉淀)。A:以 MIR4435-2HG 抗体进行沉淀,TGF-1 蛋白进行蛋白免疫印迹;B:以 TGF-1 抗体进行沉淀,MIR4435-2HG 蛋白进行蛋白免疫印迹。Fig.4 Targeting role of MIR4435-2HG and TGF-1Note:1:positive control group(total protein before precipitation);2:A549 group;3:negative control group(mouse IgG precipitation).A:Precipitation with MIR4435-2HG antibody,Western Blotting withTGF-1 protein;B:Precipitation with TGF-1 antibody,WesternBlotting with MIR4435-2HG protein.3 讨论LncRNA 是一类参与转录激活、转录干扰等调控过程的非编码 RNA 分子。多数 LncRNA 在循环体液中表达相对稳定。在某些癌症中差异表达的LncRNA 常 作 为 癌 症 诊 断 的 生 物 标 志 物8。MIR4435-2HG 在多种癌症中被认为是致癌 Ln-cRNA。既往研究发现,骨关节炎中 MIR4435-2HG表达显著下调,过表达可促进软骨细胞增殖9;胃癌组织中 MIR4435-2HG 表达上调,且可增强 C57 小鼠致瘤性10。近年研究发现,MIR4435-2HG 在肺癌组织中高表达,并与组织学分级和淋巴结转移相关,基因敲除 MIR4435-2HG 后,显著抑制了肺癌细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化11。随着 Ln-cRNA 研究深入,其在癌症治疗中亦显示出优势。TGF-1 在肿瘤细胞增殖、分化、转移等过程中均发挥重要调控作用。既往研究表明,可诱导肺癌上皮27 1 期陈宇,等:LncRNA MIR4435-2HG 靶向 TGF-1 对 NSCLC 细胞的影响-间充质转化和肿瘤细胞增殖和迁移12。TGF-1 为 LncRNA 调控 DNA 转录过程重要下游因子之一。Miao F 等13发现,LncRNA-HAND2-AS1 可通过与 TGF-1 相互作用,调控 NSCLC 细胞迁移、侵袭和干细胞功能。但 LncRNA MIR4435-2HG 是否靶向调控 TGF-1 影响 NSCLC 细胞增殖和迁移,目前国内外报道尚少。TGF-信号转导是胚胎发育和外周免疫耐受重要调节因子,与恶性肿瘤细胞增殖、凋亡及多种生物学行为有关。有研究发现,TGF-1 在 NSCLC 组织中表达异常上调,可促进 NSCLC 细胞侵袭和转移,诱导细胞上皮-间充质转化,并与靶向和免疫调节治疗耐药性产生密切相关14。本研究中,NSCLC组织 TGF-1 表达显著上调,提示 TGF-1 上调可能为 NSCLC 重要发病机制。有研究发现,TGF-信号传导通路激活可被某些 LncRNAs 调节,从而参与癌症生物学19。而 MIR4435-2HG 相对表达量亦显著升高,表明 MIR4435-2HG 亦可能参与NSCLC 发生,此过程可能与调节 TGF-1 表达有关。而 NSCLC 细胞株 MIR4435-2HG 相对表达量高于 HBE 细胞,表明细胞水平上 MIR4435-2HG 依然呈过表达,推测 MIR4435-2HG 可能通过影响NSCLC 细胞生物学行为,参与 NSCLC 发生和发展;而 A549 细胞 MIR4435-2HG 相对表达量显著高于H226 细胞,可能与 A549 细胞浸润和分化程度更高有关。此外,上调 A549 细胞 MIR4435-2HG 表达后细胞增殖和迁移能力均显著上升,提示 MIR4435-2HG 可促进 NSCLC 细胞增殖和迁移。Zhu L 等18研究发现,过表达 MIR4435-2HG 可促进卵巢癌增殖 和 迁 移。Ma DM 等19研 究 发 现,LncRNAMIR4435-2HG 可 通 过 分 泌 miR-802 和 上 调FLOT2 促进黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭,以上研究均提示过表达 MIR4435-2HG 可促进恶性肿瘤进展。反之,下调 MIR4435-2HG 有可能会抑制恶性肿瘤细胞增殖和迁移,达到抗肿瘤作用。此外,过表达 MIR4435-2HG 后细胞中 TGF-1 表达显著上调,提示 LncRNA MIR4435-2HG 可能通过靶向上调TGF-1 促进 NSCLC 细胞迁移和增殖。有研究显示,MIR4435-2HG 可与 -连环蛋白信号通路相互作用,促进肺癌进展,同时 -连环蛋白可与 TGF-信号通路相互作用,这可能是 MIR4435-2HG 可靶向调节 TGF-1 表达的原因20。免疫共沉淀实验是研究蛋白与蛋白间相互作用的经典方式,本研究中 MIR4435-2HG 蛋白可与 TGF-1 抗体共沉淀,TGF-1 抗体亦可与 MIR4435-2HG 抗体共沉淀,表明 MIR4435-2HG 可靶向调控 TGF-1,推测MIR4435-2HG 可能是 TGF-1 信号通路的上游激活剂。而本文未对 MIR4435-2HG 和 TGF-1 可能的中间调控物质 -连环蛋白表达进行检测,存在一定局限性。4 结论MIR4435-2HG 和 TGF-1 均在 NSCLC 组织和 NSCLC 细胞株(A549 细胞和 H226 细胞)中高表达;而上调 NSCLC 细胞株中 MIR4435-2HG 表达后,细胞 48 h OD 值和迁移数量、TGF-1 相对表达量均显著增加;免疫共沉淀实验显示 MIR4435-2HG 蛋白可与 TGF-1 抗体共沉淀,TGF-1 抗体亦可与 MIR4435-2HG 抗体共沉淀,提示两者存在靶向调节关系;而 TGF-1 过表达细胞 MIR4435-2HG 相对表达量未见明显变化。综上,NSCLC 组织中 MIR4435-2HG 呈高表达,LncRNA MIR4435-2HG 可能通过靶向上调 TGF-1 促进 NSCLC 细胞迁移和增殖。参考文献1 辛雯艳,黄磊,闫贻忠.2005-2013 年中国肿瘤登记地区肺癌流行和疾病负担时间趋势分析J.中华肿瘤防治杂志,2019,26(15):1059-1065.2 潘越,王亚龙,王永岗,等.40 例外科干预的 M1b 期非小细胞肺癌患者的临床病理特征和预后J.中华肿瘤杂志,2019,41(1):63-67.3 Luo D B,Lv H B,Sun X H,et al.LncRNA TRERNA1 promotesmalignant progression of NSCLC through targeting FOXL1J.EurRev Med Pharmacol Sci,2020,24(3):1233-1242.4 Luis P A,Tae M K,David V,et al.Bintrafusp alfa,a bifunctionalfusion protein targeting TGF-and PD-L1,in second-linetreatment of 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