急性经口毒性实验-PPT.ppt

急性经口毒性实验急性经口毒性实验（Acute Oral Toxicity Test）1大家好一、实验目的：一、实验目的：o（一）通过本次实验（一）通过本次实验掌握经口灌胃技术掌握经口灌胃技术，半，半数致死剂量的意义。数致死剂量的意义。o（二）通过本次实验（二）通过本次实验学习半数致死剂量的计学习半数致死剂量的计算及毒性判定算及毒性判定。2大家好二、测定方法：二、测定方法：o本实验以灌胃方式测定敌敌畏本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量的半数致死量（LD50）。）。3大家好（一）实验动物与分组：（一）实验动物与分组：o首选健康成年小鼠首选健康成年小鼠(18g25g)和大鼠和大鼠(180g220g)。o实验前动物要在实验环境中适应实验前动物要在实验环境中适应35 d 时时间，以了解其正常活动情况和健康状况，并间，以了解其正常活动情况和健康状况，并淘汰不健康或体重不符合要求的动物淘汰不健康或体重不符合要求的动物。o本次实验取体重本次实验取体重18-25 g 的小鼠，实验时，的小鼠，实验时，将小鼠将小鼠称体重、编号、按随机分组原则，将称体重、编号、按随机分组原则，将实验动物分成实验动物分成5组，每组组，每组8只只。4大家好（二）剂量选择：（二）剂量选择：o首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的化学物的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预期，以此值作为受试化学物的预期毒性中值，即毒性中值，即中间剂量组中间剂量组，再上下各推，再上下各推1-2 个个剂量组，进行预实验。剂量组，进行预实验。o各剂量组的间距可根据各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等计算方法要求按等比级数或等差级数安排。比级数或等差级数安排。o本实验用本实验用机率单位法机率单位法计算计算LD50，要求按等，要求按等比级比级数数排列，常用排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg，其次剂量组为，其次剂量组为125 mg/kg*0.8=100 mg/kg，依次类推为，依次类推为80、64 和和51.2 mg/kg五个剂量组。五个剂量组。5大家好（三）受试化学物配制与稀释（三）受试化学物配制与稀释o1.溶剂：溶剂：n水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液。液。n脂溶性受试化学物以吐温脂溶性受试化学物以吐温-80、二甲基亚砜、二甲基亚砜、植物油等配制。植物油等配制。6大家好（三）受试化学物配制与稀释（三）受试化学物配制与稀释o2.受试物的稀释受试物的稀释o等容量稀释法，等容量稀释法，各个剂量组的动物均给予各个剂量组的动物均给予相同单位相同单位体重体积体重体积的受试化学物，按照的受试化学物，按照事先设计的剂量事先设计的剂量分别分别稀释稀释配制为几种不同的浓度配制为几种不同的浓度的受试物溶液。的受试物溶液。o例如本次实验五个剂量组例如本次实验五个剂量组:n各剂量组动物给予各剂量组动物给予相同单位体重体积相同单位体重体积受试物均为受试物均为10ml/kg。7大家好等容量稀释法等容量稀释法oD：设计的染毒剂量，：设计的染毒剂量，mg/kg oV：动物给药量（相同单位体重体积）均为：动物给药量（相同单位体重体积）均为10ml/kgoX：各组需配制的受试物溶液的浓度（：各组需配制的受试物溶液的浓度（mg/ml）o如：第一组染毒剂量如：第一组染毒剂量D=51.2mg/kg，动物按，动物按V=10ml/kg体重给药，配制的受试物浓度为体重给药，配制的受试物浓度为X=51.2mg/10ml，8大家好o依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为n第一组：第一组：51.2mg/10mln第二组：第二组：64mg/10mln第三组：第三组：80mg/10mln第四组：第四组：100mg/10mln第五组：第五组：125mg/10mlo各剂量组小鼠灌胃容量计算各剂量组小鼠灌胃容量计算:小鼠灌胃容量小鼠灌胃容量V ml=体重（体重（g）10ml/1000g各剂量组小鼠染毒剂量各剂量组小鼠染毒剂量:小鼠染毒剂量小鼠染毒剂量=V ml 各组的受试物浓度（各组的受试物浓度（mg/10ml)9大家好（四）灌胃方法：（四）灌胃方法：o小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其部向上，尽量使其体位垂直体位垂直，注意使动物的上消化，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小一般进针深度小鼠鼠2.54cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg 10大家好（五）中毒体征和死亡情况观察（五）中毒体征和死亡情况观察o染毒后染毒后观察和记录中毒体征观察和记录中毒体征及出现的时间、及出现的时间、死死亡数量和时间亡数量和时间及死亡前的特征。及死亡前的特征。o高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。刻密切观察。o根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。11大家好观察的项目包括：观察的项目包括：o（1）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；或迟钝；o（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；o（3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、；深缓、呼吸过速、仰头呼吸、；o（4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；肿胀；o（5）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；o（6）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物；）眼：眼球突出、结膜充血、角膜浑浊、血性分泌物；o（7）消化系统：腹泻、厌食。）消化系统：腹泻、厌食。12大家好三、三、LD50 计算：计算：o可采用多种方法测定可采用多种方法测定LD50，有机率单位法、，有机率单位法、霍恩氏法、寇氏法等，机率单位法能计算出霍恩氏法、寇氏法等，机率单位法能计算出任何反应率水平的剂量，且实验任何反应率水平的剂量，且实验2-5组均可。组均可。o机率单位法遵守的要求：机率单位法遵守的要求：n1.剂量按等比级数排列，相邻两剂量组间剂量按等比级数排列，相邻两剂量组间的比值常用的比值常用1：0.8n2.各实验组动物数相等各实验组动物数相等13大家好o机率单位法计算机率单位法计算LD50公式（用五个剂量组时）公式（用五个剂量组时）oX3-为第三个组的剂量对数为第三个组的剂量对数(X3=log 80，80mg/kg)oi-为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数为相邻两组剂量比值（以高剂量组为分子）的对数(i=log(125/100)oy-为死亡率相应的机率单位（查附表）为死亡率相应的机率单位（查附表）o -为五个剂量组的死亡率相应的机率单位的均数。为五个剂量组的死亡率相应的机率单位的均数。o1、2、3、4、5为小剂量组到大剂量组的顺序。为小剂量组到大剂量组的顺序。o5.0-为死亡率是为死亡率是50%时所相当的反应率的机率单位时所相当的反应率的机率单位14大家好LD50的95%可信限=log-1(X+1.96 SX)15大家好四、结果评价：四、结果评价：o根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的出的LD50及受试物的种类，按相应的国家及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本（课本 215页页-农药的急性毒性分级）对农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。小。16大家好五、注意事项五、注意事项：o1.灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管o2.正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤伤o3.灌入量计算和操作要准确，否则影响结果灌入量计算和操作要准确，否则影响结果o4.防止操作者中毒。注意通风，不要把药品防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。程中要小心。17大家好六、实验报告应包括以下内容：六、实验报告应包括以下内容：o1实验动物的种属。实验动物的种属。o2实验动物体重和随机分组情况。实验动物体重和随机分组情况。o3受试物的名称、性状等情况。受试物的名称、性状等情况。o4受试物的配制和溶剂。受试物的配制和溶剂。o5描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。o6LD50的计算方法和结果。的计算方法和结果。o7受试物的急性毒性分级、分级依据和结果评受试物的急性毒性分级、分级依据和结果评价。价。18大家好19大家好谢谢20大家好