DB63_T 1436-2015 藏羊细管冷冻精液生产技术规程(青海省).pdf

TCS 65.020.30 B 43 备案号48513-2016DB63 主同海省山巳ET且，万标准DB 63/T 1436-2015 藏羊细管冷冻精液生产技术规程2015-12-21发布2016-03-20实施青海省质量技术监督局发布目IJ1=1 本规程的编写符合GB!T1.1-2009的规则。本规程由青海省农牧厅提出井归口。本规程起草单位:青海省家畜改良中心。DB63/T 1436-2015 本规程主要起草人:马元梅、张晋青、胡宁主、常永梅、真延新、赵静、袁海洲、张子安、谢秀梅、李强、张金梅、杨玉芹、届添琴、王芳、李景、油胜刚、谭建宁。DB63/T 1436-2015 藏羊细管冷冻精液生产技术规程1 范围本规程规定了欧拉型、高原型、山谷型藏羊细管冻桔生产的基本要求、稀释i夜配制、采精、精液处理、精液冷冻、冻精活力检验规则和方法、冻精质量评价、冻精包装、标记和贮存等。本规程适用于藏羊的细管冷冻精液的生产C2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 4143 牛冷冻精液GB/T.5458 液氮生物容器NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程3 术语与定义以下术语和定义适用于本规程。3.1 采精用人工模拟的器械获得公羊精液的方法。3.2 采精量公羊一次来精时排出的精液量。3.3 鲜半青未经处理的新鲜精液。3.4 精子密度每单位体积精液中的精子数目。单位为亿每毫升。3.5 DB63/T 1436-2015 细管冷冻精液细管注入精液经液氮冷冻所形成的产品。简称细管精液或冻精4 采精前的准备4.1;3于、精制作室的要求室内清洁卫生，做到无菌操作。4.2 仪器设备4.2.1 生产设备用于藏羊细管冷冻精液生产的仪器设备见表10表1藏羊细营冷冻精液生产设备序号设备名称参数1 精液细管喷码机2 ACCUCELL精液密度仪O.21毫升O.23毫升3 细管封装机5 250支XO.25毫升4 精液程控冷冻仪45 C-140 C 5 电子太平O.0 001克4.2.2 检验设备用于藏羊细管冷冻精液质量检验的设备见表20表2藏羊细管冷冻精液质量检验设备序号设备名称参数1 相差显微镜100倍400倍2 恒温恒温培养箱i:O.5C 3 净化工作台菌落数O.5个每皿每小时4 数显恒温水i谷锅i:O.5C 5 电热同压灭菌锅o MpaO.25 Mpa 4.3 器械清洗和消毒器械的清洗与消毒按照NY/T1234进行。4.4 稀释液的配制稀释液的配制按照附录A进行。5 采精2 DB63/T 1436-2015 5.1 采精环境要求采精场所应保持安静，地面平整，清洁卫生，采精前做彻底消毒。5.2 藏羊种公羊选用用于冻精生产的种公羊应符合本品种标准，体质健壮，无遗传缺陷及国家规定的传染病。5.3 采精频率12月龄初次调教采精。成年种公羊每周可采精3天，每天连续采精两次。5.4 采精方法5.4.1 台羊选择选择发情好的健康母羊作台羊，头部固定在采精架上。5.4.2 假阴道的准备将消毒过的假阴道内胎，用生理盐水棉球从里到外擦试，在假阴道一端扣上集精瓶，集精瓶夹层内要注入30oC35 oC的水。在假阴道外壳中部注水孔注入145毫升150毫升的50oC55 oC水，拧上气嘴活塞，套上双连球打气，使假阴道的采精口形成丫字形。最后把温度计插入假阴道内测温，温度在38OC40 oC为宜。在假阴道内胎的前1/3，涂抹适量凡士林作润滑剂。5.4.3 采精操作采精前，将公羊包皮周围及母台羊后躯擦干净。采精员蹲在台羊右侧后方，右手握假阴道，气卡塞向下，靠在台羊臀音1日，1自阴道和地面呈35。角。当公羊爬跨伸出阴茎时，左手轻托阴茎包皮，迅速地将阴茎导入假阴道内，当种公羊完成抬头、挺腰、前冲动作时，表示射精完毕。随着公羊从台羊身上滑下时，将假阴道取下，立即使集精瓶的一端向下坚立，打开气卡塞，放气取下集精瓶，送操作室检查。6芽、精制作6.1 准备生产冻桔所用精液应符合本规程7.1的要求。玻璃器皿均应放在32oC恒温箱中，稀释液放在34oC 恒温水浴箱中备用。盛装稀释精液的稀释管，应做明显标记。6.2 精液的稀释与平衡6.2.1 精液稀释量确定和活力评定根据鲜精液的密度、活力、采精量等确定应力口的稀释液量，确保每剂冻精所含直线前进运动桔子数的要求。精液稀释后和平衡后应评定活力。6.2.2 稀释方法与平衡按附录A配制稀释液，采用二步稀释法稀释精液。用34oC的第I液缓慢地加入精液中，摇匀，所加第I液的量为所加稀释液总量与精液量总平口的一半减去精液量，用;民杯盛适量的34oC水，把稀释管放置于送4oC5 oC低温柜内降温，与此同时把第II液也放入。稀释后的精液，采用逐渐降温法。在l小时，使稀释精液的温度降到4oC5 oC后，然后再在同温的恒温容器内平衡l小时2小时。冷冻前3 DB63/T 1436-2015 半小时加入第II液，所加第II液的量为所加稀释液总量减去所加第I液的量。加入第II液后平衡半小时，然后在低温柜中进行细管分装，分装后的细管即可进行冷冻。6.3 细营的封装与冷冻6.3.1 细管要求细管为无毒、耐低温的专用塑料管。0.25毫升剂型。保证清洁、无菌。6.3.2 封装采用细管(灌装、封口、印宁)一体机，在4C低温柜中进行分装操作O6.3.3 细管标识细管标识清楚，内容为冻精产地、品种及羊号、冻精生产日期06.3.4 细管精液的冷冻封装好的细管即可通过程控冷冻仪或自制冷冻槽冷冻O6.3.4.1 程控冷冻仪冷冻采用程控冷冻仪按预选的最佳冷冻曲线自动完成冷冻过程。冷冻曲线最佳阵温速率为4C-10 C(降温速率5C/min),-10 C-100 C(阵温速率55C/min),-100 C-140 C(降温速率20C/min)。冷冻时间7分钟O6.3.4.2 自制冷冻槽冷冻用自制冷冻槽冷冻细管时，冷冻温度控制100C-140 oC。冷冻时间8分钟。6.4 涛、精收集每冻完一批(只)精液，应立即放入液氮中浸泡，然后计数，取样检查和包装。6.5 月于、精解冻与活力检查冷冻后的精液可在任一时间进行解冻。解冻时，预先把水浴锅水温加热至38oC40 oC，用慑子取一支冷冻后的细管精液迅速浸泡入水中并晃动，待j容解后立即取出，用吸水纸或纱布擦干水珠，再用细管剪减去超声波封口端，滴5做升10微升精液于载玻片上进行活力检查。检查方法同6.4。检查合格的冻桔作为初检合格品妥善贮存。7 精液要求及试验方法7.1 鲜精质量要求及试验方法用于藏羊细管冷冻精液生产的鲜精质量应符合表3的要求。有一顶不符合的精液，不得用于冻精生产。4 序号项日1 外观2 精子活力(%)?3 精子密度(亿/毫升)主主7.2 涛、精质量要求及试验方法7.2.1 检验规则表3鲜精质量指标质量指标为乳白色或做黄，略有腥味。65 15 每只公羊每季度冻精型式检验不少于一次。DB63/T 1436-2015 试验方法自然光下日测。取精液51敖升101敖升丁载玻片上，)J日益盖玻片后在38C恒温装置的400倍思微镜上评定活力。周密度仪测定。出站检验的项目:外观、桔子活力O检验合格，可作为合格品交付使用。7.2.2 冻精质量评价藏羊细管冷冻精液质量应符合表4的要求。表4涛、精质量指标序号项目质量指标试验方法1 细管外观细管无裂痕、两端封口严实。目测。2 剂量(毫升)?O.18 按照GB4143中B.2测定。3 精于目力(%)?35 按照GB4143中B.3测定。4 前进运动精子数(万个)?2 000 J安且在GB4143中B.HWi二。5 精子畸形率(%)、?20 按照GB4143中B.5)Wi二。6 精子顶体完整率(%)?45 按照GB4143中B.5测定。7 细菌数(个)飞7、800 按照GB4143中B.6测定。7.2.3 冻精质量判定要求每剂冻精解冻后应同时具备上列质量指标要求，不具备任何一项者，为冻精质量不合格。8 包装、标记和贮存8.1 包装用无菌纱布袋包装，一指型管25剂细管，每袋包装量不超过200剂。包装操作应在液氮中进行。8.2 标记包装袋外面，均应有明显的标记。注明种公羊品种、公羊号、生产日期或批号、数量、桔子活力。8.3 贮存用液氮生物容器贮存藏羊冻精，液氮生物容器应符合GB/T5458要求。设专人保管，每周定时加一次液氮，保证冻精始终浸在液氮中。应经常检查液氮生物容器的状况，如发现容器异常，立即将哥、精转5 DB63/T 1436-2015 移到其他完好的容器内。取存冻精时，冻精离开液氮的时间不得超过5秒。取放冻精之后，应及时盖好容器塞，防止液氮蒸发或异物浸入。6 DB63/T 1436-2015 A.1 试剂要求附录A(规范性附录)稀释;夜的自己制配制冻精用的稀释保护剂，应用新鲜的双蒸馆水和卵黄，二级品以上的化学试剂。A.2 器具要求所用器具保证清洁、无菌。A.3 稀释:夜配方配方1:双亲情水100毫升，展糖3.7克，拧朦酸饷3.7克，果糖O.5克，三起甲基氨基甲:皖O.2克，甘油5毫升，卵黄15%。配方2:双茶馆水100毫升，黑糖3.7克，拧棱酸铀3.7克，果糖O.5克，三在甲基氨基甲皖O.2克，5 毫升维生素B12，乙二醇5毫升，卵黄15%。A.4 稀释:夜的配制分基础液的配制、第1夜的配制和第11液的配制:a)基础液的配制:先准确称取庶糖3.7克，拧棱酸铀3.7克，果糖O.5克，三捏甲基氨基甲炕0.2克，放入容器为100毫升的量筒内，力口蒸t留水50毫升左右，用消毒过的玻璃棒搅拌，待溶解后再加蒸馆水定容至100毫升，混匀后用滤纸过滤于三角烧杯中，扎好瓶口，置水浴锅中隔水煮沸消毒30分钟。b)第1夜的配制:取冷却后(室温)基础液的85毫升于三角烧瓶中，加入卵黄15毫升，用磁力搅拌器充分搅拌均匀为第1夜。c)第IU夜的配制:取第I液45毫升，加入阳水煮沸消毒好的甘油5毫升充分搅拌均匀O注1:以上各液每100毫升加青、链霉素得(510)万单位。注2:稀释保护剂要现国己现用。7