DB37∕T 4003—2020 中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准(山东省).pdf

TCS 11.220 B 41 DB37 山东省山巳ET且，万标准DB37/T 4003-2020 中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准2020-06-08发布2020-07-08实施山东省市场监督管理局发布目IJ昌本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。本标准起草单位:青岛海关技术中心。本标准主要起草人:郑小龙、王群、姜帆、徐彪、朱来华。DB37/T 4003-2020 I DB37/T 4003-2020 中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准1 范围本标准规定了中和试验和ELISA试验比对实验室评价工作应遵循的基本技术要求。本标准适用于动物检疫、兽医实验室以ELISA试验替代中和试验进行抗体滴度的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的号|用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的号|用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。(OIE陆生动物诊断试验与疫苗于册3 试齐IJ3.1 培养液:根据不同细胞选择适合的培养液。3.2 胎牛血洁。3.3 标准毒株、阳性血洁、阴性血洁。3.4 敏感细胞系:根据不同病毒选择适合的细胞。3.5 青霉素。3.6 链霉素。3.7 ELISA试剂盒。4 器材和设备4.1 96孔细胞培养板。4.2 二氧化碳培养箱。4.3 普通冰箱和超低温冰箱。4.4 可调移液器。4.5 细胞培养瓶。4.6 酶标仪。4.7 洗板机。5 评价总贝IJ5.1 应在最佳条件下进行比对试验，即在同一实验室，由同一批检测人员严格按照标准方法和试剂盒操作要求进行评价。5.2 对己知阳性血清同时用中和试验和ELISA试验进行检测，对检测结果进行比对，确定不同抗体滴度对应的ELISA数值范围。DB37/T 4003-2020 6 实验室评价6.1 取己知阳性血清样品进行中和试验，测定其抗体滴度。具体操作按照、(OIE陆生动物诊断试验与疫苗子册进行。6.2 对己知阳性血清进行稀释，以获得抗体滴度分别为1:2，1:4,1:8,1:16,1:32,1:64的血j青样品。6.3 将每个滴度的己知阳性血清样品按照、ELISA试剂盒说明书进行检测，测定其OD值，并根据说明书计算最终数值。6.4 将己知阳性血洁的抗体滴度与ELISA结果进行比对，确定各滴度的己知阳性血清对应的ELISA数值的范围，并标定阳性对照血洁的抗体滴度。6.5 根据ELISA阳性对照血洁的数值及每个滴度问ELISA数值的波动范围，调整每次试验抗体滴度所对应的ELISA数值范围，以确定未知样品抗体滴度。2