基于代谢组学探讨犊牛失明原因.pdf

2023年36 卷10 期Vol.36No.10引用格式：王建东，唐玉林，郭亚男，高海慧，侯鹏霞，于洋，郭延生：基于代谢组学探讨犊牛失明原因J西南农业学报，2 0 2 3，36（10）：2 2 8 1-2 2 91.Wang J D,Tang Y L,Guo Y N,Gao H H,Hou P X,Yu Y,Guo Y S.Discussion on cause of calf blindness based on metabonomics JJ.Southwest ChinaJournal of Agricultural Sciences,2023,36(10):2281-2291.D0I:10.16213/ki.scjas.2023.10.025.西南农业学报Southwest China Journal of Agricultural Sciences基于代谢组学探讨牛失明原因2281王建东,唐玉林,郭亚男，高海慧,侯鹏霞，于洋,郭延生?（1.宁夏农林科学院动物科学研究所，银川7 50 0 0 2;2.宁夏大学农学院，银川7 50 0 2 1）摘要：【目的】进一步研究牛失明的原因，为降低快牛先天失明的发生率，减少养殖行业经济损失提供理论支持。【方法】选择宁夏地区某牛场出生日期接近的失明特牛及其母亲、正常牛，采集血液收集血浆样本，通过代谢组学分析，对失明犊牛及其母亲、正常快牛之间差异代谢产物及通路变化进行研究。【结果】将OPLS-DA的VIP值 1和单变量统计分析P0.05作为显著性差异代谢物的标准，失明犊牛与正常犊牛（VaS.vs.VaL)比较组共筛选出2 56 种差异代谢物，其中正离子模式下144种，负离子模式下112 种。失明牛与其母亲（VaS.vs.CS)比较组共筛选出17 7 种差异代谢物，其中正离子模式下10 8 种，负离子模式下6 9 种。失明快牛与其母亲相比，视紫红质含量显著降低，log2FC达-2.8 7。失明快牛与其母亲相比,P0.05差异代谢通路共有30 个，矫正后P0.05的差异代谢通路共有10 个，其中胆汁分泌代谢通路分布差异代谢物最多，失明快牛相较于其母亲有4个代谢物显著上调,9 个代谢产物显著下调。失明犊牛与正常特牛相比,P0.05差异代谢通路共有12 个，矫正后P1 and the univariate statistical analysis P 0.05 were used as the criteria for significant-ly different metabolites.A total of 256 dfferent metabolites were screened from the comparison group of blind calves and normal calves(Vas.vs.VaL),including 144 in the positive ion mode and 112 in the negative ion mode.A total of 177 different metabolites werescreened from the comparison group between the blind calf and its mother(Vas.vs.CS),including 108 in the positive ion mode and 69 inthe negative ion mode.The content of rhodopsin in the blind calf was significantly lower than that of its mother,with log2FC reaching-2.87.Compared with its mother,there were 30 differential metabolic pathways with P0.05 in total in blind calves,and 10 differentialmetabolic pathways with corrected P 0.05 in total.Among them,bile secretion metabolic pathway had the largest distribution of differential收稿日期：2 0 2 3-0 1-0 3基金项目：农业高质量发展和生态保护科技创新示范课题（NGSB-2021-12-03）；宁夏规模化奶牛场病毒性腹泻病毒监测及疫病防控技术应用示范项目（2 0 2 3CJE09028）第一作者：王建东（198 0），男，硕士，副研究员，主要从事动物疾病防治研究。E-mail:通讯作者：郭延生（197 8），男，博士，副教授，主要从事中兽药临床应用研究。E-mail:；郭亚男（1991），男，博士，副研究员，主要从事兽医临床诊断技术研究。E-mail:文献标识码：A文章编号：10 0 1=48 2 9(2 0 2 3)10-2 2 8 1-11YU Yang,GUO Yan-sheng?2282metabolites:.Compared with its mother,4 metabolites in blind calves were significantly up-regulated,and 9 metabolites were significantlydown-regulated.Compared with normal calves,there were 12 differential metabolic pathways with P0.05 in total in blind calves,and 16differential metabolic pathways with corrected P 0.05 in total.Among them,bile secretion metabolic pathway distributed the most differen-tial metabolites.Compared with normal calves,there were 5 metabolites significantly up-regulated and 4 metabolites significantly down-regu-lated in blind calves:ConclusionThe bile secretion metabolic pathway of blind calves is significantly diferent from that of their mothersand normal calves.The research suggests that the blindness of calves may be a disease of the body living in the liver,affecting the normal se-cretion of bile,leading to that the normal intake of fat-soluble vitamin A can not be absorbed and utilized,and thus affecting the vision ofcalves.In addition,compared with their mothers,the content of rhodopsin,which affects the cascade reaction of light transduction,is signif-icantly down-regulated under the condition that there is no significant dfference in vitamin A levels in the body of blind calves.The studysuggests that the mutation of rhodopsin gene(RHO)encoding rhodopsin protein and the lack of rhodopsin protein might be another reason fortheir blindness.Key words:Calf;Blindness;Metabolomics;Rhodopsin;Vitamin A deficiency【研究意义】宁夏六盘山一带的肉牛养殖属于传统产业，但同时存在一家一户的粗放养殖模式，饲料单一，不添加微量元素和维生素等添加剂，犊牛失明发病率在5%左右，一般不会引起死亡，如果产及时发现,通过即时注射维生素A会减轻发病率。尚青山 对化隆县新生犊牛发生维生素缺乏症的病例研究发现，近年来特牛先天失明发病率不断攀升，且完全治愈率较低，给当地养殖户造成了经济损失。目前研究认为特牛失明的主要原因为机体维生素A缺乏2-4,维生素A参与视色素的代谢演变过程，促进视紫质的再生成，还参与骨骼形成，缺乏会导致夜盲症乃至目盲症的发生，以及因颈椎骨的变形,颅腔拥塞或脑疝，导致神经受损性失明5-6 1。【前人研究进展】引起犊牛维生素A缺乏症的原因主要有2 种：一是母体妊娠期间进食劣质饲料，且未进行有效的维生素补充；二是妊娠奶牛机体胃肠、肝脏功能不全，无法对脂溶性维生素进行有效吸收,母体缺乏维生素A进而导致胎儿先天缺乏7 。研究发现,给常年饲喂干玉米秸秆，很少吃新鲜植物饲料，日粮几乎没有维生素添加剂的妊娠奶牛，连续饲喂5个多月不添加维生素的低劣青贮,新生犊牛出现了维生素A缺乏症8 。也有人认为特牛失明还与基因突变有关。Fujimura等9 对2 6 例先天性失明特牛观察研究发现，失明特牛出生一段时间后，视神经可能会萎缩,其认为这是由一种隐性基因引起的遗传性疾病。另外,李启飞等10 采用氢核磁共振代谢组学方法，对1岁以下维生素A缺乏患儿与健康儿童的尿液进行代谢产物分析，发现差异代谢产物与肠道微生态平衡、消化系统疾病、呼吸系统疾病、免疫相关疾病及能量代谢、生长发育密切相关，说明代谢组学分析在维生素A缺乏早期筛查中具有潜在应用价值。【本研究切入点】目前,犊牛失明没有完全确定的病因,且研究主要集中在病理学观察 、原因分析、营养预防和药物治疗上12 ,对其进一步的代谢产物和代谢通路的变化研究较少。西南农业学报【拟解决的关键问题】本文通过对同一饲喂条件下，失明牛及其母亲、正常犊牛进行代谢组学分析，研究失明特牛代谢产物和代谢通路与其母亲及正常牛之间的异同,为进一步探究犊牛失明原因,降低犊牛先天失明的发生率，减少养殖行业经济损失提供科学依据。1材料与方法1.1试验动物与试验设计在宁夏地区某牛场，随机选择同圈舍出生日期接近（7 2 日龄）、视力正常、初生重40 kg正常犊牛3头,初生重40 kg、无意识撞物、眼前晃手不会眼、眼球较为突出、瞳孔散大呈蓝色的失明特牛（7 2 日龄）及其母亲（2 胎以上)3对,试验分为3组：失明犊牛组（VaS）、失明犊牛母亲组（VsL）、正常特牛组（CS），采用围栏饲养方式犊牛跟随母亲母乳喂养，产后母牛采用表1的饲料配方进行饲喂，自由饮水。1.2样品采集在晨饲3h后用负压肝素钠管于犊牛颈静脉采血,失明犊牛母亲采用尾根静脉采血。血样于30 0 0r/min离心15min。分装血浆于离心管中,液氮速冻5min，-8 0 保存。1.3代谢组学测定1.3.1样品前处理将10 0 L样品与40 0 L冷甲醇乙腈（v/v,1:1）涡流彻底混合，混合物在冰浴中超声处理1h后,在-2 0 下孵育1h,最后在4下以140 0 0 r/min的速度离心2 0 min，收集上清液并在真空LC-MS分析下干燥。将干燥的提取物溶于50%乙腈中,用一次性0.2 2 m乙酸纤维素过滤每个样品,并转移到2 mL HPLC瓶中,在-8 0 储存。1.3.2色谱分离整个分析过程中样品置于4自动进样器中，样品采用SHIMADZU-LC3O超高效液相色谱系统（UHPLC）,使用ACQUITY UPLC36卷10期玉米秸秆黄贮Corn straw silage稻草Rice straw玉米Corn豆粮 Soybean meal食盐NaCl碳酸氢钙CaHCO3磷酸氢钙CaHPO4合计注：营养水平均为计算值。Note:Nutrient levels are all calculated values.HSS T3(2.1 mm 100.00 mm,1.8 m)(Waters,Milford，M A，U SA)色谱柱。其中进样量6 L,柱温40,流速0.3mL/min；色谱流动相A:0.1%甲酸水溶液,B:乙腈;色谱梯度洗脱程序如下:0 2 min，B为0%;2 6 min,B从0%线性变化至48%;6 10 min,B从48%线性变化至10 0%;10 12 min,B维持在10 0%;12.0 12.1min,B从10 0%线性变化至 0%;12.1 15.0 min,B维持在 0%。1.3.3质谱采集每例样品分别采用电喷雾电离(ESI)进行正离子（+）和负离子（）模式检测。样品经UPLC分离后用QEPlus质谱仪（Thermo Scien-tific）进行质谱分析，使用HESI源进行离子化,其离子化条件如下：喷雾电压：3.8 kv（+）和3.2 kv（-）；毛细管温度:32 0（）；鞘气：30（）arb；辅助气体：5（）arb；探头加热器温度：350（）；S-lens RF 水平:50%。质谱采集时间：15min。母离子扫描范围：7 0 1050m/z，一级质谱分辨率：7 0 0 0 0（质荷比=2 0 0），AGC target:3e6,一级 Maximum IT:100 ms。二级质谱分析按照下列方法采集：每次全扫描（full scan）后触发采集10 个最高强度母离子的二级质谱图谱（M S2 s c a n），二级质谱分辨率：17 50 0（质荷比=200),AGC target:1e5,二级 Maximum IT:50 ms,MS2 Activation Type:HCD,Isolation window:2 m/z,Normalized collision energy(Setpped):20,30,40。1.4数据预处理原始数据采用MSDIAL软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积。代谢物结构鉴定采用精确质量数匹配（质量偏差Masstolerance20g/kg）和二级谱图匹配（质量偏差Mass tolerance 50%的离子峰不参与后续统计分析；对正负离子数据分别进行总峰面积归一化，整合正负离子峰并应用R软件进行模式识别,数据经Unit variance scaling（U V）预处理后，进行后续数据分析。2维结果与分析2.1样本质控分析采用正离子模式（ESI+）和负离子模式（ESI-）ESI检测,每5个样品检测一个质量控制（QC)样品，以验证系统的可靠性。将质控样品的全离子色谱(TIC)光谱叠加比较,结果表明,质谱仪的响应强度和保留时间重叠（图1），表明该方法具有较好的稳定性和较低的由仪器误差引起的变化。峰间分离良好，说明色谱和质谱条件适合本研究样品的测定。2.2OPLS-DA 分析正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）运用偏最小二乘回归建立代谢物表达量与样品类别之间的关系模型,来实现对样品类别的预测13。由OPLS-DA得分图（图2）和模型验证得分（表2）可知，OPLS-DA模型参数RY0.9、Q 0.5,说明OPLS-DA模型没有发生过拟合，模型稳定可靠。2.3差异代谢物筛选2.3.1单变量统计分析本研究共注释到6 6 7 种代谢产物,其中正离子模式下399种，负离子模式下268种。将 OPLS-DA的VIP值 1 和单变量统计分析P0.05作为显著性差异代谢物的标准，VaL.vs.VaS比较组共筛选出2 56 种差异代谢物，其中正离子模式下144种，负离子模式下112 种（图3-A）。V a S.v s.C S比较组共筛选出17 7 种差异代谢2284RT:0.00-15.00100806040200.020.221.140100806040200100806040201008060402000RT:0.0015.01100806040200.171.020100806040200.150.6501001806040200.170.65010038060402000.150.5201表2 比对组的OPLS-DA模型评价参数Table 2 Evaluation parameters of the OPLS-DA model for the com-parison group比较组Comparison groupVaL.vs.VaS(POS)VaL.vs.VaS(NEG)VaS.vs.CS(POS)VaS.vs.CS(NEG)西南农业学报5.18正离子模式POS1.361.291.91.2.161.361.291.011.141.291.361.011.151.361.301.011.121负离子模式NEG1.301.241.781842.162.881.281.151.381.822.022.822.923.824.341.301.151.37,1.842.032.843.043.784271.291:151.771.862.812.963.514.0423图1正负离子模式下全离子色谱(TIC)光谱Fig.1 Total ion chromatography(TIC)spectrum in positive and negative ion modeR2Y1.0000.9991.0000.99936卷9.379.698.289.945.347.157.595.903.493.723.433.895.114.385.165.335.873.63.713.762.043.323.483.732.042.263.363.483.752.032.293.263.844.19232.933.79.3.8449.188.977.715.826.086.447.147.587.70MM4.014.545.105.155.315.893.894.425.095.155.315.875.095.396.076.41455.875.195.345.885.195.355.885.14.5.356.286.875.155.36.5.57M6.586.8856Q?0.9070.9520.8680.90010.4210.65111,12.02.12.4612.8g8.019.379.699.928.269.178.975.826.096.437.147.587.706.07.6.437.147.577.6967时间(min)Time6.288.267.598.037.328:.466.606.889.236.268.277.588.027.318.476.596.899.238.266.287.578.037.328:469.359.689.9210.596.596.889.24人8.267.578.017.328:.469.0778时间(min)Time物,其中正离子模式下10 8 种,负离子模式下6 9种(图 3-B)。2.3.2失明犊牛与其母亲之间差异代谢物筛选为进一步直观展示样本之间的关系和不同样本之间代谢物的表达差异，本研究对所有代谢物表达量呈显著差异的进行层次聚类（Hierarchical clustering），根据VIP值对top50差异代谢物表达量进行可视化分析。由图4可知,其中VaS.vs.VaL比较组上调的代谢物有14个，包括2-氮已环酮（2-Piperidone）、D-13.1713.3013.4113.5313.8910.6512.4813.1913.3713.437.758.469.979.698.279.939.1710.668.9611.3812.099.379.938.279.178.968.47899.379.699.9311.3511.62八人9.369.67.9.8210.609.369.689.9210.59910114911.5410.411160 122912.8 10.661144101111.3311.9412.2512.5711.34132513.6913.8413.4011.3411.9212.2512.5813.6413.82111213.5913.9413.0213.3912.7813.4313.6013.9513.0313.4213.6313.93121313.4111.9312.2612.5913.3113.5013.8413.4011.9312.2312.5812.7813.5113.8113.4013141415T1510期B200POS1000-100-200A:VaL.vs.VaS为正负离子模式OPLS-DA得分图;B:VaS.vs.CS为正负离子模式OPLS-DA得分图。A:VaL.vs.VaS is positive and negative ion mode OPLS-DA score graph;B:VaS.vs.CS is positive and negative ion mode OPLS-DA score graph.A61POS(d)nof-42-10-5-log(Fold change)BPOS54(d)of-3210A:VaL.vs.VaS is positive and negative ion mode volcano map;B:Vas.vs.CS is positive and negative ion mode volcano map.肉碱（D-Carnitine）、环（脯氨酸-亮氨酸）二肽Cyclo（Le u-Pr o）、鼠李糖（Rhamnose）、脯氨酸羟脯氨酸（Proline-Hydroxyproline）、黄单酸（Xanthomonicacid)等。表达量下调的代谢物有36 个，包括4-羟基喹啉（4-hydroxyquinoline）、花酸（Ellagic acid）、氢化可的松（Hydrocortisone）、甘胆酸（Glycohyochol-王建东等：基于代谢组学探讨特牛失明原因APOS1000-100-10-log:(Fold change)A：Va L.v s.Va S为正负离子模式火山图;B：Va S.v s.CS为正负离子模式火山图。Fig.3 Positive and negative ion mode volcano map(Monoolein)等。2.3.3失明犊牛与正常犊牛之间差异代谢物筛选由图5可知,VaS.vs.CS 比较组上调的代谢物有32个，包括4-吡哆醇酸（4-Pyridoxic acid）、3-（4-羟2285VaLNEGVas150100500-50-100-150-500T score1(41.4%)-500T score1(37.0%)05010VaLVas50100-CSVas50图2OPLS-DA得分图Fig.2OPLS-DA score chartNEG54Insignificant changee-1log:(FC)0.log:(FC)-10log,(FC)110VIP0.4：0.8Insignificant change-1log:(FC)0log:(FC)-10log:(FC)1图3正负离子模式火山图ic acid）、视紫红质（Rhodopin）、甘氨胆酸（Glyco-cholic acid）、二十烷酸（Icosanoic acid）、油酸甘油酯-100200NEG1000-1002003210NEG543210-10-5-log:(Fold change)-50T score1(46.3%)-500T score1(36.2%)-50-log,(Fold change)0055105050log:(FC)-1.0log(FC)1VIP:8:4Insignificant change.-1log:(FC)0.log:(FC)-1.0log:(FC)1100.CSVasInsignificant change-1log:(FC)02286基苯基）乳酸3-（4-Hydroxyphenyl)lactate、鹅去氧胆酸（Chenodeoxycholicacid）、木质纤维素酸（Li g n o c e r i c a c i d）、脱氧胆酸（Deoxycholic acid）、LTC4、亮肽酶素（Leupeptin）、脯氨酸羟脯氨酸（Pr o l i n e-H y d r o x y p r o l i n e）、肾磷脂酸（Nephromopsicacid)等。表达量下调的代谢物有18 个,包括L-谷氨酸（L-Glutamic acid）、亚油酸（Linoleic acid）、N-（2-呋喃基）甘氨酸N-(2-Furoyl)Glycine、棕榈酰乙酰胺（Palmitoyl ethanolamide）、5-羟甲基尿苷（5-Hydroxymethyluridine）、鼠李糖（Rhamnose）、脂肪酸（FA 18：3+10）、黄嘌呤（Xanthosine）、多酚(APolyphyllin A)等。2.4差异代谢物功能分析2.4.1失明犊牛与其母亲之间差异代谢物功能分析依据代谢物的结构与功能,对比较组筛选得到4-羟基嗪哒全贝壳杉烯醛花酸3.脱氧卡罗噬醇甘鹏粗笔花质定碱氨胆酸芥子醉包糖咖啡酰胆惑十二二脂25S-年膝漆参N,N-二甲塞仕单硬脂秀内依麟酸那5.甲氧基简油箕油雄画丽醋酸异氟溶尼松D肉碱环(L-脯氨酰-L-亮氨酰）鼠李糖脯氨酸-羟脯氢酸可步酮黄单酸苯甲酷新异乌头碱4-氧代烧二酸氣汀尖黄酸Vas2Vas3VaLIVaL2VaL3Class西南农业学报的差异代谢物进行分类统计（图6）。VaS组与VaL组相比,差异代谢物注释到KEGG数据库物质主要种类为类固醇（Steroids，18.8 4%）、生物碱（Alka-loids，14.49%）类化合物（Terpenoids，11.59%）、多肽类(Peptides,8.70%）和PK聚酮肽(PK Polykei-des,8.70%）。由图7 可知，VaS组与VaL组相比，P0.05差异代谢通路共有30 个,矫正后P0.05的差异代谢通路共有10 个，主要包括胆汁分泌（Bilesecretion）、初级胆汁酸生物合成（Primary bile acid bio-synthesis）戊糖磷酸途径(Pentose phosphate pathway）、维生素B6代谢（Vitamin B6 metabolism）、组氨酸代谢（H i s t i d i n e me t a b o l i s m）氨基酸的生物合成（Biosynthe-sis of amino acids）等（表3）,其中胆汁分泌代谢通路分布差异代谢物最多,与其母亲相比,失明犊牛有4个代谢物显著上调,9个代谢产物显著下调。GroupScaled intensity2-*0-12KEGG Class生物碱类脂类其他丙酯类聚酮类糖脂类类固醇类粘类未知HMDB Class生物碱及其衍生物苯类脂质和类脂分子有机酸及其衍生物有机含氮化合物有机含氧化合物有机含杂环化合物苯丙类和聚酮类其他log:(FC)1050-5-10-logi0(P)65432VIP36卷GroupVaLVasHMDBClass横坐标表示样本名称及分组，纵坐标表示差异代谢物。右侧的树状结构表示差异代谢物之间的相似度聚类关系，分枝越短关系越大,后面矩形依次为相对表达量、FC、P-v a lu e 和VIP,颜色从绿、蓝到红表示代谢物的表达丰度从低到高，差异倍数由低到高，*代表P-value0.005,*代表P-value0.001。下同。The horizontal coordinates indicate the sample names and groupings,and the vertical coordinates indicate the differential metabolites.The tree struc-ture on the right side indicates the similarity clustering relationship between the differential metabolites,the shorter the branches the greater the rela-tionship,followed by rectangles in order of relative expression,FC,P-value and VIP,the color from green,blue to red indicates the expression abun-dance of metabolites from low to high,the difference ploidy from low to high,*indicates P-value 0.005,and*indicates P-value0.001.Thesame as below.图4失明牛与其母亲之间差异代谢物聚类Fig.4Differential metabolite clustering between blind calves and their mothers10期王建东等：基于代谢组学探讨特牛失明原因GroupL-谷氨酸亚油酸N(2-呋响基）氢酸棕榈酰艺醚腐四氯蓝哺酬烧3-羟甲塞尿管依酉韦林海藻糖-6 磷酸鼠季糖特拉唑味脂肪酸全氟氨基发酸升麻酮醇-3.0-a-L-拉佰糖黄馋硫酸沙工胺鞋四丁酸泼尼松龙4.吡哆醇酸3-(4-羟基苯基）乳醛氨茴酰年盒碱鹅去氧膜酸泽泻醇A24醋酸醋酸漆龙松木质纤维素酸脱氧胆藏羽扇豆醇盐酸洛眼手胺氢酸苦鹤氏鹰松草碱半脱氨酸香兰烯胱抑素乙酰醇-3-0-a-L-阿拉佰糖苷突触素去鑫康卖震上一菱然之脯氨酸-脯氢酸赞茶丙胺2-羟基戊酸之肾磷脂酸2287GroupCSScaled intensityVas2一0-12KEGG Class生物碱类脂类多肽类糖脂类类固醇类未知HMDB Class生物碱及其衍生物恭类脂质和类脂分子核苷、核苷酸和类似物有机酸及其衍生物有机含氮化物有机含杂环化合物苯丙类和聚酮类未知log:(FC)20100-1020-logio(P)65432VIPCl图5失明犊牛与正常牛之间差异代谢物聚类Fig.5 Differential metabolite clustering between blind and normal calves生物碱(10,14.49%)氨基酸相关化合物（3,4.35%）碳水化合物（2 2.90%）脂肪酰基(2,2.90%)真菌毒素(1,1.15%）脂质(4,5.8 0%)有机酸(1,1.45%)其他(1,1.45%)多肽(6,8.7 0%)农药(2,2.90%)糖类(4,5.8 0%)聚酮类(6,8.7 0%)丙烯醇酯类(1,1.45%）留醇脂质(3,4.35%)类固醇类（13,18.8 4%）类(8,11.59%)维生素和辅助因子（2,2.90%）不同颜色表示KEGG一级分类，没有注释到分类信息的代谢物未被统计；图例标明分类名称、差异代谢物数量以及饼图中所占百分比。下同。Different colors indicate KEGG level1 classification,and metabolites without annotated classification information are not counted;Legend indicates theclassification name,number of differential metabolites,and percentage of the pie chart.The same as below.图6 失明犊牛与其母亲之间差异代谢物分类Fig.6 Classification of differential metabolites between blinded calves and their mothers2288西南农业学报36卷神经活性配体-受体相互作用，ABC转运蛋白氨酰生物合成十前列腺癌哮喘癌症途径癌症中心碳代谢库欣综合症初级胆汁酸生物合成戊糖磷酸途径牛磺酸和次牛磺酸代谢维生素B6代谢类固醇激素生物合成组氨酸代谢氨基酸的生物合成甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢2-氧代羧酸代谢缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成精氨酸生物合成苯丙烷代谢胆汁分泌醛固酮调节的钠重吸收胆固醇代谢FcRI信号通路皮质醇的合成和分泌蛋白质消化吸收逆行内源性大麻素信号卵巢类固醇生成2.5 5.07.510.0-logi(P)将pathway归属到level1分类，每类中的pathway从上至下-logio（P-v a l u e）依次降低，即P-value依次升高，显著性依次降低。圆圈大小表示count，即注释到该通路中的差异代谢物数量；圆圈颜色对应校正后的P-value,由红到蓝越显著。下同。The pathway is assigned to levelI classification,and the pathway in each category is decreased from top to bottom-logio(P-value),i e.P-value increases and significance decreases in order.The circle size indicates count,i.e.the number of differential metabolites annotated to the pathway;Thecircle color corresponds to the corrected P-value,from red to blue the more significant.The same as below.差异代谢物差异代谢通路Differential metaboliteDifferential metabolic pathway上调Up肉毒碱L-Carnitine胆汁分泌对乙酰氨基酚AcetaminophenBile secretion鹅去氧胆酸盐Chenodeoxycholate白三烯C4Leukotriene C4氨基乙磺酸初级胆汁酸生物合成TaurinePrimary bile acid biosynthesis鹅去氧胆酸盐Chenodeoxycholate葡萄糖酸戊糖磷酸途径D-Gluconic acidPentose phosphate pathway甘油酸盐Glycerate维生素B6 代谢维生素Vitamin B6 metabolismB6 Pyridoxinem工07.510.0O12.5Adjust pwith BH0.1250.1000.0750.0500.025图7 失明牛与其母亲之间差异代谢物显著通路Fig.7 Significant pathways of differential metabolites between blinded calves and their mothers表3失明犊牛与其母亲之间差异代谢物分析Table 3Differential metabolite analysis between blind calves and their mothersCountO2.55.0甘氨鹅脱氧