肿瘤个体化检测试剂盒.doc

(完整word)肿瘤个体化检测试剂盒
项目立项建议报告
提出部门
销售部、研发部　
建议人
　崔德宝、俞宏
项目名称
EGFR基因突变检测试剂盒（荧光PCR法）
建议日期

一、 项目背景介绍（目前科研、医院主要的检测平台及检测技术)
非小细胞肺癌(Non—small-cell carcinoma,NSCLC）是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，约占肺癌总数的80~85％，是最为常见的肺癌.传统的治疗是根据其分期采取手术或手术结合放化疗的方法.但很多病人确诊时已为晚期,错过最佳手术时期，有些患者无法耐受放疗或化疗，以及化疗后耐药等至肺癌患者确诊之后其5年生存率仍很低.因此，分子靶向治疗逐渐受到人们的关注并广泛应用于临床。目前，以表皮生长因子受体EGFR为靶点的分子靶向药物在治疗NSCLC方面取得重大进展，已成为肺癌治疗的重要手段,而EGFR基因突变的检测也成为确定治疗方案的关键.
研究表明，EGFR在43％～89％的NSCLC中表达上调,其介导的信号传导在肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润转移及血管生成等方面发挥着重要的作用.近年来已陆续开发出吉非替尼（gefitinib）、厄洛替尼(erlotinib)和埃克替尼（ icotinib)等EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR—TKI)，它们可通过对肿瘤细胞EGFR的特异性结合阻断细胞信号通路，抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡。然而,并非所有的NSCLC患者均表现出较好的疗效,现有资料表明EGFR基因突变与EGFR-TKI敏感性相关，EGFR基因突变患者对吉非替尼的有效率达60%以上，而EGFR基因野生型（即未突变型）患者的有效率仅为10%~15%。因此，明确NSCLC组织的EGFR突变状况对靶向药物的临床使用和疗效预测有重要的指导意义。
大量研究显示，NSCLC中EGFR的突变主要集中于第18、19、20和21号外显子，其中以19号外显子和21号外显子突变为主。其中l9外显子上747—750为氨基酸的大约有20多种不同缺失，约占突变的45％；2l外显子的突变占40～45％；18外显子约占5%,20外显子上的插入突变约占1%。本项目开发试剂盒主要检测针对EGFR基因第18、19、20和21号外显子进行检测。（如下图1)
EGFR突变目前市场上常用的检测方法：
1、 DNA测序法：DNA直接测序为突变检测的金标准
2、 Taqman实时荧光定量PCR法
3、 焦磷酸测序法
4、 ARMS法
检测方法比较:
检测方法/检测灵敏度
100％
50%
5%
1％
耗时
费用
直接测序法
+++
++
—
-
〉6h
低
ARMS-PCR法
+++
+++
+++
+++
1.5h
中等
焦磷酸测序法
+++
++
+
-
>6h
中等
Taqman实时荧光定量PCR技术
+++
+++
+/—
-
〈2h
中等

（图一）
检测平台：
ABI测序仪、焦磷酸测序仪、多通道荧光定量PCR仪器
二、 目前市场状况和竞争产品（产品性能、检测方法、检测设备，市场价格、市场容量、市场占有率）
1、竞争产品：
序号
公司
产品名称
检测方法
1
北京金菩嘉医疗科技有限公司
EGFR基因突变检测试剂盒
荧光PCR法
EGFR基因扩增检测试剂盒
荧光原位杂交法
2
苏州工业园区为真生物医药科技有限公司
人EGFR基因突变检测试剂盒
Taqman-ARMS法
3
北京雅康博生物科技有限公司
人EGFR基因突变检测试剂盒
荧光PCR法
4
上海源奇生物医药科技有限公司
人EGFR基因突变检测试剂盒（商品名：吉菲源)
PCR荧光探针法
5
益善生物技术股份有限公司
人类EGFR基因突变检测试剂盒
流式荧光杂交法
6
武汉友芝友医疗科技有限公司
类EGFR基因突变检测试剂盒
PCR—荧光探针法
7
无锡锐奇基因生物科技有限公司
人类EGFR基因突变检测试剂盒
荧光PCR法
8
厦门艾德生物医药科技有限公司
人类EGFR基因21种突变检测试剂盒
（商品名：人类EGFR基因21种突变荧光PCR检测试剂盒）
荧光PCR法
9
凯杰企业管理(上海)有限公司
人类EGFR基因突变检测试剂盒
therascreen(R) EGFR RGQ PCR Kit
蝎形探针ARMS荧光PCR法

公司
分型
判定方法
最低检测突变率
适用机型
反应时间
厦门艾德
7管/29型
Ct结合△Ct
1%，5ng/ul
双通道荧光PCR仪
100min以上
上海源奇
7管/31型
Ct结合△Ct
1%，5ng/ul
单通道荧光PCR仪
100min以上
凯杰（QIANGEN）
7管/29型
△Ct
0.02~0.4％，5ng/ul
双通道荧光PCR仪
100min以上
苏州为真
7管/29型
△Ct
0.1~0。5%，5ng/ul
双通道荧光PCR仪
100min以上
罗氏诊断
ROCHE
不分型所有突变
溶解曲线Tm值
--
cobas系统
120min以上

3、市场定价：
EGFR基因突变检测收费（浙江省)
产品 医院收费 经销价格
EGFR（E19、21) 1200元/人份 700元/人份
EGFR（E20、T790） 600元/人份
K—RAS 600元/人份
5、 市场容量：
个性化治疗数据显示2010年,我国体外诊断市场规模为20。7亿美元，虽然目前国内分子诊断的比重并不大，仅占据5％的市场份额,但其年均增长速度却达到20％以上。目前国内市场大约1—2亿美金，目前伴随诊断SFDA注册产品主要是EGFR、KRAS、BRAF、EML4-ALK、PIK3CA突变检测试剂盒，其中EGFR占大多数份额50％。
5、市场占有率
肿瘤个体化治疗EGFR基因突变检测产品，市场上主要的竞争对手厦门艾德、苏州为真、广州益善、北京雅康博、上海源奇、等市场占有率.

二、 项目开发实施可行性分析：
1、项目采用技术优势（关键技术、指标、性能、特点）
关键技术1 ：基于ARMS原理的引物探针设计
关键技术2：荧光PCR体系优化
关键技术3：阳性质控
2、研发方案和技术路线：
研发方案：
本试剂盒以从肿瘤组织样本，包括新鲜（冰冻）组织和石蜡包埋组织（肺癌）中提取基因组DNA作为模板，采用扩增阻滞突变体系结合Taqman荧光定量PCR技术对样本中EGFR 基因进行突变检测。每个样本的突变检测分多管进行。试剂盒内多管PCR mix中分别包含参照引物和多个外显子的29种突变特异性引物。本试剂盒通过参照孔与突变特异性孔的Ct差值（△Ct值）判断有无突变。

技术路线：

EGFR基因突变方式

突变方式
所在外显子
突变位点
碱基缺失
19 del
2235-2249del15
2235-2252〉AAT（complex)
2236—2253del18
2237-2251del15
2237-2254del18
2237-2255〉T（complex）
2236-2250del15
2238-2255del18
2238-2248>GC （complex)
2238—2252〉GCA (complex）
2239-2247del9
2239—2253del15
2239—2256del18
2239-2248TTAAGAGAAG>C(complex)
2239-2258〉CA（complex)
2240—2251del12
2240—2257del18
2240-2254del15
2239-2251>C（complex)
单碱基突变

21 L858R
2573T>G
21 L861Q
2582T〉A
20 S768I
2303G〉T
20 T790M
2369C〉T
18 G719A
2156G>C
18 G719C
2155G〉A
18 G719S
2155G>T
碱基插入
20 ins9
GCCAGCGTG
20 insCAC
CAC
20 insGGT
GGT

4、研发费用与成本分析；

设备费用:
人工费用： 10-15万
试剂耗材费用：15万
临床试验费用： 60万
注册相关费用：10万
总计：100万

四、 方案的先进性、创新性和风险性分析:
1、先进性和创新性分析
根据本项目要求设计的产品,目前在市场上已有注册证的同类产品。本项目属于仿制市场QIANGEN、厦门艾德、EGFR突变检测试剂盒产品，相对不具有全面创新性，但是在引物和探针设计方面有自己的核心技术，在产品灵敏度方面有很大进步属于微创新。

风险性分析
本项目属仿制产品项目，虽然目前在市场上同类产品只有Qiagen、艾德、罗氏(CE、FDA)、源奇、苏州为真产品获得SFDA认证，市场相对竞争激烈。
另外在项目报批时存在一定风险，可引进国外相似产品的质量标准，使国内权威机构SFDA和医院、专家、临床医生都对本产品提高信任度.并且加快研发和报批的速度,以降低竞争的风险.
关于二代高通量测序技术开展,life、华大基因、贝瑞和康等正在开展肿瘤基因检测试剂盒，如果测序价格持续下降，可能对肿瘤个体化PCR产品带来颠覆或者替代风险。

五、 项目成果推广应用、市场前景及经济、社会效益分析

项目研发成功后，产量达到10万人份/年，经济效益能够达到3000万/年

六. 其他

七、参考文献
1、