肿瘤个体化检测试剂盒.doc

(完整word)肿瘤个体化检测试剂盒项目立项建议报告提出部门销售部、研发部建议人崔德宝、俞宏项目名称EGFR基因突变检测试剂盒（荧光PCR法）建议日期一、 项目背景介绍（目前科研、医院主要的检测平台及检测技术)非小细胞肺癌(Nonsmall-cell carcinoma,NSCLC）是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，约占肺癌总数的8085，是最为常见的肺癌.传统的治疗是根据其分期采取手术或手术结合放化疗的方法.但很多病人确诊时已为晚期,错过最佳手术时期，有些患者无法耐受放疗或化疗，以及化疗后耐药等至肺癌患者确诊之后其5年生存率仍很低.因此，分子靶向治疗逐渐受到人们的关注并广泛应用于临床。目前，以表皮生长因子受体EGFR为靶点的分子靶向药物在治疗NSCLC方面取得重大进展，已成为肺癌治疗的重要手段,而EGFR基因突变的检测也成为确定治疗方案的关键.研究表明，EGFR在4389的NSCLC中表达上调,其介导的信号传导在肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润转移及血管生成等方面发挥着重要的作用.近年来已陆续开发出吉非替尼（gefitinib）、厄洛替尼(erlotinib)和埃克替尼（ icotinib)等EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFRTKI)，它们可通过对肿瘤细胞EGFR的特异性结合阻断细胞信号通路，抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡。然而,并非所有的NSCLC患者均表现出较好的疗效,现有资料表明EGFR基因突变与EGFR-TKI敏感性相关，EGFR基因突变患者对吉非替尼的有效率达60%以上，而EGFR基因野生型（即未突变型）患者的有效率仅为10%15%。因此，明确NSCLC组织的EGFR突变状况对靶向药物的临床使用和疗效预测有重要的指导意义。大量研究显示，NSCLC中EGFR的突变主要集中于第18、19、20和21号外显子，其中以19号外显子和21号外显子突变为主。其中l9外显子上747750为氨基酸的大约有20多种不同缺失，约占突变的45；2l外显子的突变占4045；18外显子约占5%,20外显子上的插入突变约占1%。本项目开发试剂盒主要检测针对EGFR基因第18、19、20和21号外显子进行检测。（如下图1)EGFR突变目前市场上常用的检测方法：1、 DNA测序法：DNA直接测序为突变检测的金标准 2、 Taqman实时荧光定量PCR法3、 焦磷酸测序法4、 ARMS法检测方法比较:检测方法/检测灵敏度10050%5%1耗时费用直接测序法+-6h低ARMS-PCR法+1.5h中等焦磷酸测序法+-6h中等Taqman实时荧光定量PCR技术+/-2h中等（图一）检测平台：ABI测序仪、焦磷酸测序仪、多通道荧光定量PCR仪器二、 目前市场状况和竞争产品（产品性能、检测方法、检测设备，市场价格、市场容量、市场占有率）1、竞争产品：序号公司产品名称检测方法1北京金菩嘉医疗科技有限公司EGFR基因突变检测试剂盒荧光PCR法EGFR基因扩增检测试剂盒荧光原位杂交法2苏州工业园区为真生物医药科技有限公司人EGFR基因突变检测试剂盒Taqman-ARMS法3北京雅康博生物科技有限公司人EGFR基因突变检测试剂盒荧光PCR法4上海源奇生物医药科技有限公司人EGFR基因突变检测试剂盒（商品名：吉菲源)PCR荧光探针法5益善生物技术股份有限公司人类EGFR基因突变检测试剂盒流式荧光杂交法6武汉友芝友医疗科技有限公司类EGFR基因突变检测试剂盒PCR荧光探针法7无锡锐奇基因生物科技有限公司人类EGFR基因突变检测试剂盒荧光PCR法8厦门艾德生物医药科技有限公司人类EGFR基因21种突变检测试剂盒（商品名：人类EGFR基因21种突变荧光PCR检测试剂盒） 荧光PCR法9 凯杰企业管理(上海)有限公司 人类EGFR基因突变检测试剂盒therascreen(R) EGFR RGQ PCR Kit蝎形探针ARMS荧光PCR法公司分型判定方法最低检测突变率适用机型反应时间厦门艾德7管/29型Ct结合Ct1%，5ng/ul双通道荧光PCR仪100min以上上海源奇7管/31型Ct结合Ct1%，5ng/ul单通道荧光PCR仪100min以上凯杰（QIANGEN）7管/29型Ct0.020.4，5ng/ul双通道荧光PCR仪100min以上苏州为真7管/29型Ct0.10。5%，5ng/ul双通道荧光PCR仪100min以上罗氏诊断ROCHE不分型所有突变溶解曲线Tm值-cobas系统120min以上3、市场定价： EGFR基因突变检测收费（浙江省)产品 医院收费 经销价格EGFR（E19、21) 1200元/人份 700元/人份EGFR（E20、T790） 600元/人份 KRAS 600元/人份5、 市场容量：个性化治疗数据显示2010年,我国体外诊断市场规模为20。7亿美元，虽然目前国内分子诊断的比重并不大，仅占据5的市场份额,但其年均增长速度却达到20以上。目前国内市场大约12亿美金，目前伴随诊断SFDA注册产品主要是EGFR、KRAS、BRAF、EML4-ALK、PIK3CA突变检测试剂盒，其中EGFR占大多数份额50。5、市场占有率肿瘤个体化治疗EGFR基因突变检测产品，市场上主要的竞争对手厦门艾德、苏州为真、广州益善、北京雅康博、上海源奇、等市场占有率.二、 项目开发实施可行性分析：1、项目采用技术优势（关键技术、指标、性能、特点）关键技术1 ：基于ARMS原理的引物探针设计关键技术2：荧光PCR体系优化关键技术3：阳性质控2、研发方案和技术路线：研发方案：本试剂盒以从肿瘤组织样本，包括新鲜（冰冻）组织和石蜡包埋组织（肺癌）中提取基因组DNA作为模板，采用扩增阻滞突变体系结合Taqman荧光定量PCR技术对样本中EGFR 基因进行突变检测。每个样本的突变检测分多管进行。试剂盒内多管PCR mix中分别包含参照引物和多个外显子的29种突变特异性引物。本试剂盒通过参照孔与突变特异性孔的Ct差值（Ct值）判断有无突变。技术路线：EGFR基因突变方式突变方式所在外显子突变位点碱基缺失19 del2235-2249del152235-2252AAT（complex)22362253del182237-2251del152237-2254del182237-2255T（complex）2236-2250del152238-2255del182238-2248GC （complex)22382252GCA (complex）2239-2247del922392253del1522392256del182239-2248TTAAGAGAAGC(complex)2239-2258CA（complex)22402251del1222402257del182240-2254del152239-2251C（complex)单碱基突变21 L858R2573TG21 L861Q2582TA20 S768I2303GT20 T790M2369CT18 G719A2156GC18 G719C2155GA18 G719S2155GT碱基插入20 ins9GCCAGCGTG20 insCACCAC20 insGGTGGT4、研发费用与成本分析；设备费用: 人工费用： 10-15万 试剂耗材费用：15万 临床试验费用： 60万 注册相关费用：10万 总计：100万四、 方案的先进性、创新性和风险性分析:1、先进性和创新性分析根据本项目要求设计的产品,目前在市场上已有注册证的同类产品。本项目属于仿制市场QIANGEN、厦门艾德、EGFR突变检测试剂盒产品，相对不具有全面创新性，但是在引物和探针设计方面有自己的核心技术，在产品灵敏度方面有很大进步属于微创新。风险性分析本项目属仿制产品项目，虽然目前在市场上同类产品只有Qiagen、艾德、罗氏(CE、FDA)、源奇、苏州为真产品获得SFDA认证，市场相对竞争激烈。另外在项目报批时存在一定风险，可引进国外相似产品的质量标准，使国内权威机构SFDA和医院、专家、临床医生都对本产品提高信任度.并且加快研发和报批的速度,以降低竞争的风险.关于二代高通量测序技术开展,life、华大基因、贝瑞和康等正在开展肿瘤基因检测试剂盒，如果测序价格持续下降，可能对肿瘤个体化PCR产品带来颠覆或者替代风险。五、 项目成果推广应用、市场前景及经济、社会效益分析项目研发成功后，产量达到10万人份/年，经济效益能够达到3000万/年六. 其他七、参考文献1、