基于γ-干扰素释放试验的麻风分枝杆菌感染筛查诊断.pdf

论著基于 干扰素释放试验的麻风分枝杆菌感染筛查诊断李艳艳 王 川 孙乐乐 潘 晴王 娜 周桂芝 刘 红 张福仁 山东第一医科大学附属皮肤病医院山东济南 山东省皮肤病性病防治研究所山东济南通信作者:刘红:.摘要 目的:探讨 干扰素释放试验()在麻风分枝杆菌感染诊断中的应用价值 方法:在麻风患者、健康人群的 中进行 检测 麻风患者进一步按多菌型()和少菌型()展开研究使用 试剂盒(酶联免疫斑点法)检测释放 的效应 细胞频数 比较分析 和 患者 检测的阳性率结合 结果对 患者进行讨论分析 结果:以患者的病理诊断为确诊依据纳入 例麻风患者 名健康人群作为对照 用 刺激后 和 患者 的激活程度和 阳性率均无统计学差异.的 患者 阴性 阳性.的 患者 阴性 阳性 阳性或 阳性的 患者达 结论:阳性提示分枝杆菌感染的可能 联合 可作为早期筛查麻风的辅助检测方法关键词 干扰素释放试验 麻风分枝杆菌感染基金项目:山东省皮肤性病学临床医学研究中心山东省医药卫生科技发展计划项目(编号:):./:.:().:.()()().:.:.():./麻风是一种由麻风分枝杆菌感染易感人群导致的慢性肉芽肿性疾病主要侵犯皮肤和周围神经严重者可通过血液或淋巴系统播散 根据机体对麻风菌免疫反应的强弱麻风可大致分为五个类型型:特异性 型细胞免疫弱或缺失细菌指数高型:特异性 型细胞免疫强高 分泌低细菌指数、型为免疫不稳定型 根据皮损数目可将患者分为皮损少于 个的少菌型(包括 中国麻风皮肤病杂志 年 月第 卷第 期和 型)和多于 个的多菌型(包括、和 型)麻风仍是我国和 传染病防控的重点对麻风患者进行早期筛查已成为防治麻风、消除麻风危害的重要手段某些分枝杆菌在生长早中期分泌到胞外的一些蛋白具有高度免疫原性和特异性常作为分枝杆菌感染诊断和预防研究的重要靶抗原 早期分泌抗原()和早期滤液蛋白()是来源于结核分枝杆菌的分泌蛋白其能诱发特异性 应答与细菌的毒力密切相关可提供抗结核杆菌感染的保护性 基于/建立的两种商业化的检测技术.和 已在临床上广泛应用通过 干扰素释放试验()对结核感染者进行有效诊断且不受 预防接种的影响 研究发现结核分枝杆菌 和 与麻风分枝杆菌同源物之间有一定的同源性 将结核分枝杆菌/作为刺激性抗原在麻风患者外周血及其单个核细胞()中进行检测发现麻风杆菌来源的两种蛋白与结核分枝杆菌同源物之间存在完全免疫交叉反应 目前该研究缺乏多样本的数据支持其性能还有待评估 材料与方法.患者招募与病理组织样本的收集 对 年 月至 年 月期间在山东第一医科大学附属皮肤病医院(山东省皮肤病与性病防治研究所)诊断为麻风的病例进行筛选纳入共获得 份临床标本(包括血液和皮损组织)所有患者均根据病史、临床表现、皮肤涂片和组织学检查确定诊断并对每例患者进行严格的()分级(、和)()份健康献血者的血液样本作为本研究的对照 所有患者均按照 指南进行联合化疗方案()的治疗.酶联免疫斑点法检测抗原刺激后释放 的效应 细胞 采用 试剂盒进行检测 将 解冻、洗涤并在培养箱()中孵育过夜 将 孔微孔板上依次设置空白对照组、对照组和测定组培养液中分别加入 、和 抗原试剂设置 个复孔每孔加入 含./的 置于恒温培养箱()中孵育 洗板后加入标记抗体于 孵育 重复洗板操作加入 显色底物溶液暗室室温下反应 加入去离子水终止反应使用放大镜进行斑点计数.方法 引物由 网站设计并在 数据库(:/./)中进行验证在实时荧光定量 仪()上使用 探针方法完成 反应 总反应体系为 包括引物探针混合物、去离子水、正反向引物和 扩增条件:进行 个循环 完成 个循环扩增后对扩增结果进行分析:()值 为阴性()值 判定为阳性.统计学方法 采用 软件()进行统计学分析 组间比较采用检验和 确切概率法 所有检验均为双侧.)见表 联合 对 患者的诊断价值 例 患者进行了 检测阳性率为 例 患者进行了 检测阳性率为 联合 结果进行分析.(/)的 患者 阴性 阳性.(/)的 患者 阴性阳性 阳性或 阳性患者达(/)见表 两种筛查方法的结合可能有利于临床表现不典型的 患者的诊断表 例麻风患者的 检测结果分组例数 阳性率()值.(/).(/).:空白对照孔:植物血凝素孔:测试培养孔 检测患者 中 的激活程度图 :经抗原刺激后释放 的效应 细胞的一般情况:使用 进行统计分析表 与 在 例麻风患者中诊断效能的比较分析 例()分组例数 阳性 阳性 阳性 阴性 阴性 阳性 阳性或 阴性(.)()()(.)()(.)()(.)(.)()讨论麻风是由麻风分枝杆菌引起的一种慢性传染病主要影响皮肤和周围神经 虽然联合化疗药物治疗降低了全球麻风的患病率但麻风仍然是一个公共卫生问题 该病的诊断主要依靠临床表现和组织病理学检查 然而由于麻风的临床特征和组织病理学复杂且 患者以单纯神经瘤和少数皮肤病变为主涂片较难检出麻风分枝杆菌使得该类患者的诊断和鉴别诊断具有挑战性尤其在发病早期 因此有必要采用更灵敏、可靠、准确的方法来诊断 病例研究证实麻风分枝杆菌抗原刺激诱导的 分泌在 患者中获得了比 患者更高的阳性反应率 多项研究评估了麻风分枝杆菌不同抗原组合的检测价值如麻风分枝杆菌重组蛋白()包括 、等通过测定感染患者外周血上清液中 水平来探索以重组蛋白为刺激性抗原的免疫应答但这种方法识别 患者的潜力有限既往研究中基于结核分枝杆菌、蛋白和麻风分枝杆菌同源物之间的同源性关系以结核分枝杆菌 蛋白为刺激性抗原进行全血的 试验中(/)的 患者呈阳性 例 患者均为阴性 在麻风患者 中进行的研究同样证实了麻风杆菌的两种蛋白与结核杆菌同源物之间存在免疫交叉反应 以 为刺激抗原在 例麻风患者中特异性 细胞斑点数为()、()、()以 为刺激抗原在 例麻风患者中斑点数为()、()、()、()为进一步评价 的诊断价值补充麻风的筛查手段我们开展了该研究 本研究发现使用结核分枝杆菌 刺激麻风患者的 后 患者的检出率为.(/)患者的检出率为.(/)结果大致符合该蛋白在结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌间的同源性关系 患者的 激活程度及阳性率略高于 患者但差异无统计学意义 患者常存在免疫功能低下细胞免疫反应弱表现为 分泌水平低皮肤涂片中麻风杆菌数量多即 敏感性低的原因 在结核患者中也发现免疫功能正常的患者相比免疫功能低下者对 检测的敏感性更高 由于实验操作方法及人为因素的异质性 患者的 水平在各项研究中不全一致与其他研究相比本研究中的数据(阳性率.)偏高不排除受实验操作因素及样本量的影响分子检测如 已被证明是诊断 麻风的强大诊断工具该技术灵敏度高对于镜检阴性患者的早期诊断或组织病理学不确定病变的鉴别诊断非常重要 在皮肤活检中以上的 患者和 患者的皮肤组织样本能检出麻风杆菌 在一系列可能的基因靶点中麻风杆菌特异元件、和 被确定为最适合用于诊断结合这些基因开发麻风杆菌试验可以加强早期麻风病例的诊断 本研究以 为靶基因进行皮损组织的 检测 患者中的阳性率为(/)患者中为(/)患者中皮损组织 的阳性率明显高于血液 的阳性率 患者的 阳性率则低于血液 将 与 联合分析发现.(/)中国麻风皮肤病杂志 年 月第 卷第 期的 患者 阴性 阳性.(/)的 患者 阴性 阳性 阳性或 阳性的 患者达(/)两种检测手段在一定程度上能够相互补充可能是早期发现 患者的有效联合检测手段综合既往研究和本研究的结果可认为 在 患者中的敏感性尚可在 患者中异质性较大特异性不高使用该方法不能将麻风与结核分枝杆菌等基因组携带 区的分枝杆菌引起的疾病相鉴别 针对麻风分枝杆菌特异性抗原的 能提高该检测的特异性更好地将麻风与其他分枝杆菌疾病鉴别开来综上本研究发现 对麻风分枝杆菌感染的诊断价值值得商榷但为该感染的诊断提供了思路阳性结果提示麻风杆菌感染的可能性具体应结合患者临床表现、接触史或其他实验室检查进行综合诊断 联合 可能是早期发现和筛查麻风杆菌的辅助检测方法 基于 干扰素释放试验的应用 在预测早期麻风、结节性红斑反应和监测治疗反应中的价值有待进一步研究 此外本研究的样本量较小可能会造成一定的误差未来需要加大样本量进一步研究参考文献 .:.:.:.:.:.():.():.:?.:.:.:.:.:.:.:./().:.(收稿日期:).