DB15_T 1768—2019 马、驴冷冻精液制作技术规程(内蒙古自治区).pdf

TCS 07.080 B 40 DB15 内古军协古自主J口区巾bfTJ 方标准DB15/T 1768-2019 代替蒙DB476.2-88 马、驴冷冻精液制作技术规程Technical code for producing frozen stallion(donkey)semen 2019-12-05发布2020-01-05实施内蒙古自治区市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替蒙DB476.2-88 马、马户冷冻精液)0 本标准与DB476.2-88相比主要变化如下:增加了规范性引用文件(见第2章);一一增加了术语和定义，井有中、英文对照(见第3章);增加了器械清洗和消毒(见第5章);一一增加了冻精镜检和检验规则(见第11章);增加了冻精包装(见第12章);一一增加了冻精贮存(见第13章);增加了冻精运输(见第14章);一一修改了种公马(驴)新鲜精液要求(1988年版的第2丰:本版的第4丰);删除了使用方法中的输精(1988年版的第6幸的6.2)一一删除了评定受胎效果的方法(1988年版的附录的:增加了规范性附录细管冷冻精液标记方法(见附录A);增加了规范性附录马驴冷冻精液稀释液配方(见附录B);一一增加了资料性附录马马户冷冻精液生产记录(见附录C表c.1)。本标准的附录A、附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准白内蒙古自治区畜牧工作站提出。本标准白内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM!TC19)归口。DB15/T 1768-2019 本标准起草单位:内蒙古自治区畜牧工作站、鄂温克旗科兴马业发展有限公司O本标准主要起草人:阿娜尔、海龙、红海、格力格桑、苏雅、陈龙梅、白丹丹、葛根、安乐、金伟。I DB15/T 1768-2019 马、驴冷冻精液制作技术规程1 范围本标准规定了马、驴冷冻精液制作的器械清洗和消毒、稀释;夜配制、采精、精;夜处理、精液冷冻、精液解冻、j乐精包装、冻精贮存及冻精运输。本标准适用于马、驴冷冻精液制作。2 术语和定义下列术语和主义使用于本文件。2.1 假阴道artificial vagina 模拟母马、驴阴道环境条件的采精工具，由外壳、内胎、过滤网、集精管等组成。2.2 采精semen co I I ect i on 用人工模拟且有自然交配感的工具，以获得公马、驴精液的方法。3 要求3.1 种公马、驴应具有种用价值，外貌评价为特级或一级，体质健康，无遗传病，不允许有己发布的动物防疫法中所明确的二类疫病中的任何一种病。3.2 新鲜精j夜色泽乳白色或淡黄色。精子活力(马兰60%、驴二三65%)，精子密度二三6000万个/mL.精于畸形率:S;15%。4 器械清洗和消毒4.1 玻璃器皿清洗和消毒玻璃器皿使用后，用自来水浸泡。洗涤时，先在加有洗涤剂的温热溶液中进行刷拭，然后，用水冲洗干净，最后，用蒸馆水冲洗，直至器皿光亮、无水滴附着为止O将洗净的玻璃器皿用锡宿纸封口后送入消毒灭菌设备内，按操作说明进行干燥、消毒、灭菌后待用。DB15/T 1768-2019 4.2 采精器清洗采精器使用后，用水冲去表面污物后在加有洗涤剂的温热溶液中用长毛刷刷洗，并用水冲洗干净，再用蒸悟水逐个忡洗。将洗净的采精器放在架子上，其上覆盖两层洁洁纱布(纱布应定期清洗、消毒)，晾干备用C主日发现内胎漏气、漏水豆豆皱折，应及时更换豆豆整理。4.3 器械消毒器械应进行消毒。金属摄子、药匙、胶塞和吸管滴头等用75%酒精棉球擦拭消毒，待酒精挥发尽后方能使用，细管冷冻架使用前用紫外线消毒30millo 5 稀释j夜自己击。稀释液配制见附录B。6 采精6.1 采精准备采精种公马、马户应保持体表干净，用35oC38 oC温水清洗其阴茎、龟头，并用消毒的纸巾和毛巾擦干。6.2 采精操作采精时把持采公马、马户牵到采精室内的台畜处，阻止其爬跨(2mi丑3mi川，使其阴茎充分勃起。采精员右于持采精器具，持公马、马户爬跨时，左手轻扳阴茎，)1因于导入采精器具，完成射精后，小心地取下集精杯，迅速转移至精液处理室。6.3 采精频率成年公马、驴可每周采精3次4次。7 精液处理7.1 准备凡是接触精液的器皿和离心液均应放在30oC35 oC恒温箱中，稀释液置于室温(25OC)备用。盛装稀释精液的稀释管，应做明显标记。7.2 预处理采集的原精液传递入精液处理室后，用4层消毒医用纱布过滤，然后用肉眼观察精液的颜色，正常精i夜色泽呈乳(灰)白色或淡黄色，记录原精液量(mL)。7.3 密度测定按精液密度测定仪的操作规程准确进行精液的密度测定。测出密度后通过计算或精液密度测定仪的程序获得应加稀释液量、可制作细管数等信息。及时记录马(驴)号、采精量、密度、所加稀释液量、制作细管数等有关数据。2 DB15/T 1768-2019 7.4 镜检取精液或稀释精液10IJ L于载玻片上，加盖盖玻片后在38C恒温装置的相差显微镜上评定活力，活力用百分率表示，例如80%或o.8镜检活力合格者进行稀释。7.5 离心按1:1的比例向原精液中加入离心;夜，放置10min,.夺吸管深入高心管底部，注入2mL的离心垫，按1000g,离心20min(不使用离心垫，则按600g800 g,离心10min)，去掉上清液，去除离心垫。7.6 稀释向各离，中管中加入等温稀释液，根据其活力、密度稀释，轻轻混匀，并将所有离心后的精液收集到一个大的离心管内O7.7 封装和平衡可使用细管分装一体机将精液分装到0.5mL细管中。细管上所印字迹应清晰易认，信息齐全。把分装后的细管精液放入避光容器中，缓慢降温至4oC，平衡1.5 h4 h 8 精液冷冻8.1 上架平衡后的精液放入冷冻槽内的冷冻架上，如同一架上有不同公马、驴的细管精液，应分开码放，两头公马、驴细管冻精之间要隔开一些距离。8.2 冷冻使用全白动冷冻仪，按冷冻仪操作要求冷冻精液。8.3 收集冷冻完成后，打开冷冻容器盖子，冷冻精液按马、驴号投入盛满液氮的不同提筒中，细管的超声波封口端在上，棉塞封口端在下，不得倒置(以避免细管棉塞端的爆脱)，并迅速浸泡在液氮中。9 冻精解;东预先把水浴箱水温加热至37C40 C，用摄于取一支冷冻后的细管精液迅速浸泡入37C40 C 水中并轻轻晃动，待溶解后立即取出，用吸水纸或纱布擦干水珠，再用细管剪剪去超声波封口端，滴10IJ L精液于载玻片上即可进行镜检。10 冻精镜检和检验规则10.1 竟牛金镜检见8.4。镜检合格者方可进行包装。3 DB15/T 1768-2019 10.2 检验规则冻精产品的质量应由相对独立的技术人员负责检测与监督，每季度每头公马、驴的冻精产品型式检验不少于一次。当生产冻梧的重要原材料、器件等有重大改变影响到产品质量时应做型式检验。出站检验合格，才可作为合格品交付。11 冻精包装用细管计数分装机进行包装，包装应在140C以下的环境中进行，包装后的细管其棉塞端在塑料管的底部，不得倒置。塑料包装管的内径应均匀一致，不得用上口大、底部小的塑料管。包装好的细管精液入贮存库。12菁、精贮存冻精应贮存于液氮罐的液氮中，设专人保管，每周定时加一次液氮，应经常检查液氮罐的状况，如发现液氮罐外壳结白霜，立即将精液转移入其他液氮罐内保存。包装好的冻精由一个液氮罐转换到另一个液氮罐时，在液氮罐外停留时间不得超过3s。取存冻精后要盖好液氮罐塞，在取放盖塞时，要垂直轻拿轻放，不得用力过猛。移动液氮罐时，不得在地上拖行，应提握液氮罐于柄抬起液氮罐入贮存库。13 涛、精运输冻精运输过程中应有专人负责，贮存容器不得横倒及碰撞和强烈振动。4 DB15/T 1768-2019 附录A(规范性附录)细营冷冻精液析、记方法A.1 概述细管冷冻精液标记由十六位数四部分组成，排列顺序如下:第一部分I 第一部分I 第一部分I 第一部分公马(驴)场代号品种代号二位数计、精生产口期六位数公马(驴)弓五位数A.2 方法第一部分马、驴场代号，不得超过4个字母;第二部分品种代号以蒙DB476.1为依据:第三部分冻精生产日期六位数按年月日次序排列，年月日各占二位数字，年度的后两位数组成年的二位数，月、日不够二位数的，月、日前分别加0补充为二位数。第四部分马、驴号取该马、驴芯片号码的后五位数。部分与部分之间空一个汉字(二个字节)，第一、第二部分用汉语拼音大写字母表示，标记的宇迹必须清晰易认。A.3 标记示例KXMV SH 170819。9002r自塞封口端超声波封口端注KXMY为鄂温克旗科兴马业发展有限公司代号，SH为二河马的品种代号，170819为2017年8月19R的生产H期代号，09002为该公马芯片号码TQJD09002的后l位数。5 DB15/T 1768-2019 附录B(资料性附录)马、驴冷冻精液稀释:夜配方B.1 所有器具应洁净井消毒灭菌。B.2 所用试剂均为分析纯，稀释用水为双蒸水或超纯水(18.2兆欧)。B.3 驴用稀释液配方如下:配方10 离，中液Tris3.36 g、拧朦酸1.88 g、葡萄糖1.53 g、甘油7mL、青链毒素各5万单位、水93mL;冷冻稀释液:离，心液73mL、卵黄20mL、甘油7mL 配方20 离，中液0.9%氯化制溶液。冷冻稀释液:葡萄糖5g、乳糖3g、拧棱酸铀o.3 g、EBTAO.1 g、甘油5mL、卵黄20mL、青链霉素各10万单位，水75mL 配方30 离，中液0.9%氧化纳溶液:冷冻稀释液:葡萄糖6g、果糖2g、EBTAO.1 g、甘油5mL、卵黄20mL、青链霉素各10万单位，水75mL。B.4 马用稀释液配方如下:一一配方10 离心液7%葡萄糖溶液:冷冻稀释液:乳糖11g、果糖4g，甘油5mL、卵黄20mL、青链霉素各10万单位，水75 mL。一一配方20 离心液:葡萄糖2.20g、乳糖3.70g、海藻糖0.80g、谷肮甘肤0.077g、拧朦酸铀O.60 g、脱脂奶40mL、卵黄液3.5 mL、青链霉素各10万1U、水100mL;冷冻稀释液:离，心液95.5 mL、甘油4.5mL B.5 也可使用商品化稀释液。6 DB15/T 1768-2019 附录c(资料性附录)马、驴冷冻精液生产记录表C.1 马、驴冷冻精液生产记录表每jt射精量情原原精稀桶平i要i平平7页;专、J才t亨 制作(!:如旦采清密度h飞r 程释目IJ且博ii鼻i、/专j主;1;开三袋;专时(司个体号精量颜活(每温果精人后度后时时后数音ZE 主;在(!:如色为在阜J数活(C)活|司间i舌:i:口号人为为tJ 7