甾体激素类药物的分析.ppt

第十五章第十五章 甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析（Analysis of Steroid Hormon Drugs）学习要求学习要求v1.1.掌握甾体激素类药物分类、结构特征、掌握甾体激素类药物分类、结构特征、理化性质及分析方法，以及他们之间的关理化性质及分析方法，以及他们之间的关系。掌握鉴别和含量测定方法。系。掌握鉴别和含量测定方法。v2.2.熟悉甾体激素类药物的有关物质与检查熟悉甾体激素类药物的有关物质与检查方法。方法。v3.3.了解甾体激素类药物的体内药物分析及了解甾体激素类药物的体内药物分析及应用。应用。内容分布内容分布v基本结构与分类基本结构与分类v鉴别试验鉴别试验v特殊杂质检查特殊杂质检查v含量测定含量测定v复习题复习题第一节第一节 基本结构与分类基本结构与分类123456789101112131415161718192021ABCD一、肾上腺皮质激素一、肾上腺皮质激素adrenal cortical hormone 氢化可的松氢化可的松hydrocortisone醋酸地塞米松醋酸地塞米松Dexamethasone acetate曲安西龙曲安西龙triamcinolone地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠Dexamethasone sodium phophate共性共性v母核母核2121个个C C原子原子v4 4-3-3-酮基酮基vC C1717-醇酮基醇酮基二、雄性激素及蛋白同化激素二、雄性激素及蛋白同化激素甲睾酮甲睾酮methyltesterone丙酸睾酮丙酸睾酮Testosterone propionate苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙Nandrolone phenylpropionate共性共性v雄性激素母核雄性激素母核1919个个C C原子原子v蛋白同化激素母核蛋白同化激素母核1818个个C Cv4 4-3-3-酮基酮基vC C1717-羟基羟基三、孕激素三、孕激素progestogen 黄体酮黄体酮progesrerone醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮Megestrol acetate炔诺酮炔诺酮norethisterone炔诺孕酮炔诺孕酮norgestrel共性共性v母核母核2121个个C C原子原子 18C18Cv4 4-3-3-酮基酮基vC C1717-甲酮基甲酮基 乙炔基乙炔基四、雌性激素四、雌性激素estrogen 雌二醇雌二醇estradiol炔雌醇炔雌醇ethinylestradiol共性共性v母核母核1818个个C C原子原子v苯环，苯环，3-3-酚羟基酚羟基vC C1717-羟基羟基肾上腺肾上腺皮质激皮质激素素雄性激雄性激素和蛋素和蛋白同化白同化激素激素孕激素孕激素雌性激雌性激素素母核母核C C原原子数子数21211919、181821211818A A环环4 4-3-3-酮基酮基4 4-3-3-酮基酮基4 4-3-3-酮基酮基苯环苯环3-3-酚羟基酚羟基C-17C-17位位C C1717-醇酮基醇酮基C C1717-羟基羟基C C1717-甲甲酮基酮基C C1717-羟基羟基习题习题1 1：甾体激素中的分子结构中：甾体激素中的分子结构中A A环环为苯环的是（为苯环的是（）。）。A A 雄性激素雄性激素 B B 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素 C C 雌激素雌激素 D D 孕激素孕激素 E E 蛋白同化激素蛋白同化激素 习题习题2:2:属于肾上腺皮质激素类药物属于肾上腺皮质激素类药物特征的是（特征的是（）。）。A 4-3-A 4-3-酮基酮基 B C17B C17位有位有-醇酮基醇酮基 C C 母核有母核有2121个碳原子个碳原子D C17D C17位有甲酮基位有甲酮基 E E 有还原性有还原性第二节第二节 理化性质与鉴别试验理化性质与鉴别试验一、性状特征一、性状特征1 1、性状与溶解度、性状与溶解度2 2、熔点、熔点3 3、比旋度、比旋度4 4、吸收系数、吸收系数了解了解（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应二、化学鉴别法二、化学鉴别法硫酸硫酸1 1、C C1717-醇酮基的呈色反应醇酮基的呈色反应（二）官能团的反应（二）官能团的反应皮质激素类药物：还原性皮质激素类药物：还原性氧化试剂：碱性酒石酸铜、氨制氧化试剂：碱性酒石酸铜、氨制硝酸银、硝酸银、四氮唑盐四氮唑盐醋酸泼尼松：取本品醋酸泼尼松：取本品1mg1mg，加乙醇，加乙醇2ml2ml使溶解，加使溶解，加10%10%氢氧化氢氧化钠试液钠试液2 2滴与氯化三苯四氮唑试液滴与氯化三苯四氮唑试液1ml1ml，即显红色。，即显红色。2 2、酮基的呈色反应、酮基的呈色反应C C3 3-酮基、酮基、C C2020-酮基酮基羰基试剂：肼羰基试剂：肼现象：黄色（腙）现象：黄色（腙）氢化可的松：取样品约氢化可的松：取样品约0.1mg0.1mg，加乙醇，加乙醇1ml1ml溶溶解后，加新配的硫酸苯肼试液解后，加新配的硫酸苯肼试液8ml8ml，7070加加热热15min15min，即显，即显黄色黄色。3 3、甲酮基的呈色反应、甲酮基的呈色反应孕激素孕激素试剂：试剂：亚硝基铁氰化钠、亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类间二硝基酚、芳香醛类黄体酮黄体酮+亚硝基铁氰化钠亚硝基铁氰化钠 蓝紫色蓝紫色 4 4、酚羟基的呈色反应、酚羟基的呈色反应雌激素雌激素C C3 3-OH-OH试剂：重氮苯磺酸试剂：重氮苯磺酸现象：红色现象：红色5 5、炔基的沉淀反应、炔基的沉淀反应炔雌醇、炔诺酮、炔诺孕酮等炔雌醇、炔诺酮、炔诺孕酮等炔基炔基 +硝酸银硝酸银白色炔银沉淀白色炔银沉淀6 6、卤素的反应、卤素的反应F F、ClCl取代的药物取代的药物氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法-无机卤素原子无机卤素原子地塞米松磷酸钠：地塞米松磷酸钠：本品显有机氟化物的鉴别反应。本品显有机氟化物的鉴别反应。7 7、酯的反应、酯的反应C C1717、C C2121位羟基成酯位羟基成酯方法：先水解，产生相应的羧酸，再根方法：先水解，产生相应的羧酸，再根据羧酸性质鉴别。据羧酸性质鉴别。醋酸地塞米松：取本品醋酸地塞米松：取本品50mg50mg，加乙醇制氢氧化钾试，加乙醇制氢氧化钾试液液2ml2ml，水浴加热，水浴加热5min5min，放冷，加硫酸溶液，放冷，加硫酸溶液2ml2ml，缓，缓缓煮沸缓煮沸1min1min，即产生醋酸乙酯的香气。，即产生醋酸乙酯的香气。三、紫外分光光度法三、紫外分光光度法A240240280280200200波长，（波长，（nm）四四、红外分光光度法、红外分光光度法五五、薄层色谱法、薄层色谱法六、高效液相色谱法六、高效液相色谱法习题习题3 3：黄体酮的专属性反应为（黄体酮的专属性反应为（）A A 与异烟肼的反应与异烟肼的反应B B 与亚硝基铁氰化钠的反应与亚硝基铁氰化钠的反应C C 与硝酸银的反应与硝酸银的反应D D 与四氮唑盐的反应与四氮唑盐的反应第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查1 1、炔孕酮中有关物质的检查、炔孕酮中有关物质的检查（一）薄层色谱法（一）薄层色谱法一、有关物质的检查一、有关物质的检查2 2、醋酸去氧皮质酮中有关物质的检查、醋酸去氧皮质酮中有关物质的检查（二）高效液相色谱法（二）高效液相色谱法三、残留溶剂的检查三、残留溶剂的检查二、硒的检查二、硒的检查四、游离磷酸盐的检查四、游离磷酸盐的检查第四节第四节 含量测定含量测定根据甾体激素药物的根据甾体激素药物的 官能团官能团 整个分子特征整个分子特征1 1、比色法、比色法2 2、紫外分光光度法、紫外分光光度法3 3、荧光法、荧光法4 4、气相色谱法、气相色谱法5 5、高效液相色谱、高效液相色谱一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法应用于原料和制剂的含量测定应用于原料和制剂的含量测定 反相反相 内标法内标法应用示例应用示例 黄体酮的含量测定黄体酮的含量测定二二 、紫外分光光度法、紫外分光光度法甾体激素药物分子中有甾体激素药物分子中有4 4-3-3-酮基酮基和和苯环苯环等共轭体系等共轭体系4 4-3-3-酮基：酮基：在在240nm240nm有最大吸收有最大吸收苯环：苯环：在在280nm280nm有最大吸收有最大吸收这些特征吸收可用于含量测定这些特征吸收可用于含量测定三、比色法三、比色法（一）四氮唑比色法（一）四氮唑比色法用于用于皮质激素药物皮质激素药物的含量测定的含量测定C C1717-醇酮基醇酮基有还原性，可还原四氮唑有还原性，可还原四氮唑盐成有色甲噆，用于比色法测定。盐成有色甲噆，用于比色法测定。1 1、四氮唑盐的种类、四氮唑盐的种类（1 1）氯化三苯四氮唑（）氯化三苯四氮唑（TTCTTC）其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲噆其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲噆maxmax在在480nm490nm480nm490nm，也称红四氮唑，也称红四氮唑（2 2）蓝四氮唑（）蓝四氮唑（BTBT）还原产物为暗蓝色的双甲噆（还原产物为暗蓝色的双甲噆（formazanformazan），maxmax在在525nm525nm左右。左右。2 2、反应原理、反应原理皮质激素皮质激素C C1717-醇酮基（醇酮基（-CO-CH-CO-CH2 2OHOH）具有还原性，在强碱性溶液中能将四具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量的还原为有色甲噆氮唑盐定量的还原为有色甲噆（formazan）四氮唑盐得到四氮唑盐得到2 2个电子，开环形成甲噆个电子，开环形成甲噆而呈色，以而呈色，以TTCTTC为例：为例：2eH+4 4、讨论、讨论（1 1）基团的影响）基团的影响C C1111-酮基的甾体反应速度快于酮基的甾体反应速度快于C C1111-羟基的羟基的甾体；甾体；C C2121-羟基酯化后较其他母体羟羟基酯化后较其他母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或者琥珀酸酯三甲基醋酸酯、磷酸酯或者琥珀酸酯时，反应速度更慢。时，反应速度更慢。（2 2）溶剂和水分的影响）溶剂和水分的影响含水量大时会使呈色速度减慢含水量大时会使呈色速度减慢95%95%乙醇乙醇无水乙醇无水乙醇醛具一定的还原性，会使吸收度增高，故醛具一定的还原性，会使吸收度增高，故一一般采用无醛乙醇做溶剂。般采用无醛乙醇做溶剂。（3 3）碱的种类及加入顺序的影响）碱的种类及加入顺序的影响氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵（4 4）空气中氧及光线的的影响）空气中氧及光线的的影响反应及产物对光敏感反应及产物对光敏感对氧敏感对氧敏感（5 5）温度和时间的关系）温度和时间的关系呈色反应速度随温度增高而加快呈色反应速度随温度增高而加快室温室温或或3030恒温恒温条件下条件下中国药典：中国药典：2525暗处暗处反应反应4045min4045min（二）异烟肼比色法（二）异烟肼比色法1 1、原理、原理甾体激素甾体激素C C3 3-酮基酮基及某些其他位置上的及某些其他位置上的酮基酮基能在能在酸性酸性条件下与条件下与羰基试剂异烟羰基试剂异烟肼肼缩合，生成缩合，生成黄色的异烟腙黄色的异烟腙，在一定，在一定波长处具有最大吸收。波长处具有最大吸收。反应式如下反应式如下+H2O2 2、测定方法、测定方法以中国药典收载的以中国药典收载的倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠为例：为例：对照品溶液的制备对照品溶液的制备对照品对照品20mg 50ml20mg 50ml量瓶量瓶供试品溶液的制备供试品溶液的制备供试品供试品20mg 50ml20mg 50ml量瓶量瓶测定法测定法对照品对照品1ml1ml供试品供试品1ml1ml异烟肼异烟肼20ml20ml6060水浴水浴1 1小时小时冷却冷却甲醇甲醇25ml25ml本法主要用于本法主要用于甾体激素制剂甾体激素制剂的含量测定。的含量测定。如倍他米松软膏、倍他米松磷酸钠及其注如倍他米松软膏、倍他米松磷酸钠及其注射液的含量测定。射液的含量测定。3 3、讨论、讨论（1 1）溶剂的选择）溶剂的选择无水乙醇和无水甲醇无水乙醇和无水甲醇（2 2）酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度）酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度酸与异烟肼的摩尔比为酸与异烟肼的摩尔比为2 2：1 1时有最大吸收。时有最大吸收。（3 3）水分、温度、光线和氧的影响）水分、温度、光线和氧的影响v溶剂中含水量增高时，吸收度随之降溶剂中含水量增高时，吸收度随之降低。低。v温度升高，水解加速。温度升高，水解加速。v在具塞玻管中不致使溶剂挥发和吸收在具塞玻管中不致使溶剂挥发和吸收水分的情况下，光与氧不影响反应。水分的情况下，光与氧不影响反应。（4 4）关于反应的专属性）关于反应的专属性具有具有4 4-3-3-酮基酮基的甾体激素的甾体激素定量与定量与异烟肼异烟肼反应反应（三）（三）KoberKober反应比色法反应比色法指雌激素与硫酸指雌激素与硫酸-乙醇反应呈色，在乙醇反应呈色，在520nm520nm附近有最大吸收。附近有最大吸收。雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚-H2O重排重排-H+H+H2SO4-H+H+H2SO4（1 1）maxmax327nm327nm（2 2）maxmax465nm465nm（3 3）maxmax467nm467nm（4 4）maxmax515nm515nm作者认为，雌激素与酸作用的呈色反应中，作者认为，雌激素与酸作用的呈色反应中，在最初是通过去羟基、重排、及甲基由在最初是通过去羟基、重排、及甲基由C C1313移到移到C C1717而形成产物（而形成产物（1 1）；然后被硫酸）；然后被硫酸氧化形成具有较长共轭双键的发色团的氧化形成具有较长共轭双键的发色团的产物（产物（3 3）及进一步生成了具有吸收红外）及进一步生成了具有吸收红外光谱红移发色团的产物。光谱红移发色团的产物。四、非水溶液滴定法四、非水溶液滴定法米非司酮：有碱性米非司酮：有碱性 冰醋酸、冰醋酸、结晶紫、结晶紫、高氯酸高氯酸第五节第五节 体内甾体激素类药物分析体内甾体激素类药物分析药物代谢研究药物代谢研究生物利用度研究生物利用度研究违禁药物监测违禁药物监测专属性强专属性强灵敏度高灵敏度高LC-MSGC-MS1 1、四氮唑比色法适用于、四氮唑比色法适用于 药物含量测定的方法，常用的四氮唑盐药物含量测定的方法，常用的四氮唑盐有有 和和 。皮质激素类皮质激素类红四氮唑红四氮唑蓝四氮唑蓝四氮唑2 2、甾体激素用四氮唑显色测定时、甾体激素用四氮唑显色测定时须在碱性条件下进行，适用的碱（须在碱性条件下进行，适用的碱（）。）。A A 碳酸钠碳酸钠 B B 三乙胺三乙胺 C C 氢氧化钠氢氧化钠 D D 氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵 E E 氨溶液氨溶液 3 3、异烟肼比色法测定甾体激素类药物、异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是（时，药物的呈色基团是（）。）。A A 酮基酮基 B B 酚羟基酚羟基 C C 活泼次甲基活泼次甲基 D D 炔基炔基 E E 甾体母核甾体母核