基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL_lpr小鼠炎症反应的调节作用.pdf

730现约+SCN浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期基于NF-kB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用张芹1张丹君?曹莹陈慕芝杨科朋21.浙江中医药大学附属第三医院杭州3100052.浙江中医药大学附属第二医院摘要：目的 研究狼疮定对系统性红斑狼疮（systemiclupus erythematosus,SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响，并分析其对核因子-kB（n u c l e a r f a c t o r-k B，NF-k B）信号通路的调节作用。方法】将12 只MRL/lpr小鼠随机分为模型组（6 只）、千预组（6 只），另选取C57BL/6小鼠6 只为对照组。干预组灌胃给予0.1mL/10g狼疮定浓缩液，对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液，所有动物均干预8 周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、-干扰素（interferon-,IFN-）、肿瘤坏死因子-（t u mo r n e c r o s i s f a c t o r-，T NF-）及NF-kB信号通路相关蛋白NF-kB抑制蛋白（NF-k Bi n h i b i t o r a,Ik B）NF-k B抑制蛋白p50(NF-kBinhibitorap50,IkBp50）、NF-k B抑制蛋白p65(NF-kBinhibitorp65,IkBp65）表达水平，采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应（amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction，A RM S-qPCR）检测NF-kB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况，采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。结果 与对照组比较，模型组血清炎性因子IL-6、IFN-、T NF-、NF-k B信号通路相关蛋白（IkB、Ik Bp50、IkBp65）水平、NF-kB信号通路相关mRNA(IkB、Ik Bp50、Ik Bp65）水平均显著升高（P0.05），肾组织中IL-6、IFN-、T NF-表达水平升高（P0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化，结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后，MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P0.05)，肾组织炎性损伤较模型组减轻。结论 狼疮定可抑制MRL/Ipr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-kB信号通路有关。关键词：系统性红斑狼疮；MRL/pr小鼠；NF-kB信号通路；狼疮定；炎症反应；肾损伤中图分类号：R331文献标志码：A文章编号：10 0 5-550 9(2 0 2 3）0 7-0 7 30-0 7D0I:10.16466/j.issn1005-5509.2023.07.004Exploring the Regulatory Effect of Lupusidine on the Inflammatory Response of Lupus Erythematosus MRL/lpr Mice Based onNF-kB Signaling Pathway ZHANG Qin,ZHANG Danjun,CAO Ying,et al I.The Third School of Clinical Medicine,Zhe-jiang Chinese Medical University,Hangzhou(310005),China;2.The Second School of Clinical Medicine,Zhejiang ChineseMedicalUniversityAbstract:Objective To study the effect of lupusidine on the inflammatory response of MRL/lpr mice with systemic lupus erythematosus(SLE),and to analyze its regulatory effect on nuclear factor-kB(NF-kB)signaling pathway.Methods Twelve MRL/lpr mice were randomlydivided into model group(6 mice)and intervention group(6 mice),and C57BL/6 mice(6 mice)were selected as control group.Theintervention group was given O.1 mL/10 g lupusidine concentrate by gavage,and the control group and model group were given an equalvolume of 0.9%sodium chloride solution.All animals were intervened for 8 weeks.The expression levels of serum inflammatory factorsinterleukin-6(IL-6),interferon-(IFN-),tumor necrosis factor-(TNF-)and NF-kB signaling pathway-related proteins NF-kBinhibitor a(IkB),NF-kB inhibitor a p50(IkBp50),NF-kB inhibitor p65(IkBap65)levels were measured before and afteradministration.The expression of NF-kB signaling pathway-related mRNA was detected by amplification refractory mutation system Realtime fluorescence-quantitative polymerase chain reaction(ARMS-qPCR).Hematoxylin-eosin(HE)staining was used to detect renal tissuedamage,and Western blot was used to detect the expression levels of inflammatory factors in renal tissue.Results Compared with controlgroup,the serum inflammatory factors IL-6,IFN-,TNF-,NF-k B signaling pathway related protein(IkB,IkBap50,IkBap65)level,and NF-k B signaling pathway related mRNA(IkB,IkBap50,IkBap65)levels in model group were significantly increased(P0.05).The expression levels of IL-6,IFN-and TNF-in kidney tissue were increased(P0.05).In model group,the kidney tissue wasdamaged significantly,mainly manifested as the expansion of renal tubules,glomerulosclerosis and severe structural damage,and obviousinflammatory reaction appeared around the glomerulus and tubules.After intervention,the serum levels of all indicators in MRL/pr micewere significantly reduced(P0.05).Inflammatory injury of kidney tissue was less than that of model group.Conclusion Lupusidine caninhibit the inflammatory response in MRL/lpr mice,thereby reducing inflammatory kidney injury,and its mechanism may be related to thedown-regulation of NF-kB signaling pathway.Key words:systemic lupus erythematosus;MRL/lpr mice;NF-kB signaling pathway;lupusidine;inflammatory response;kidney injury基金项目：浙江省中医药科研基金项目（2 0 2 1ZB151)；第七批全国老中医药专家学术经验继承工作项目（国中医药人教函【2 0 2 2 7 6 号】Fund projects:Traditional Chinese Medicine Scientific Research Fund Project of Zhejiang Province(2021ZB151);The SeventhBatch of National Old Chinese Medicine Experts Academic Experience Inheritance Work Project(G.TCM.R.J.H.202276)通信作者：杨科朋，E-mail：y k p z j t c m 12 6.c o m7314浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE)是一种自身免疫性疾病,其特征是免疫调节功能紊乱，出现各种自身抗体，并破坏多个器官系统。目前研究认为，SLE的发病与遗传、环境、激素、药物等因素密切关联2 。尽管医疗水平不断进步,SLE常规治疗（免疫疗法、激素等）仍无法满足日益增长的临床需要3-4,寻找合适的治疗靶点，提高治疗效果仍是临床研究热点。近年来，越来越多研究发现中医药治疗SLE具有良好的效果。何美莹等5 回顾性调查了SLE各证候的方药规律，发现中药治疗可有效改善SLE的临床症状及体征，临床上应根据证候（热毒炽盛证、风湿热痹证、肝肾阴虚证等)合理选用方剂。中医认为SLE属“温毒发斑”“阴阳毒”“红蝴蝶疮”“日晒疮”“痹证”等范畴，治疗原则主要为活血化瘀、清热解毒、滋阴益肾6 。狼疮定是首届全国名中医范永升教授治疗SLE的经验方，又名解毒祛瘀滋阴方，是辅助西药治疗SLE的基础方，共由十味药物配伍而成（具体药物如下：干地黄、炙鳖甲、青蒿、白花蛇舌草、积雪草、赤芍、炒薏苡仁、佛手片、升麻、甘草），前期在临床上取得了较好的疗效，但其作用机制尚未完全阐明17。核因子-kB（n u c le a r f a c t o r-k B,NF-k B）是重要的核转录因子，广泛存在于真核细胞内，其介导的信号通路参与调控自身免疫性疾病的发生发展，包括调控炎性因子、黏附分子、趋化因子的分泌。研究发现，SLE患者的NF-kB信号通路处于异常活化状态8。因此，本研究通过建立SLE小鼠模型，探讨狼疮定对于SLE炎症反应的调节作用，以及对NF-kB信号通路的影响，从而为临床应用提供进一步理论依据1材料和方法1.1实验动物12只纯种10 周龄MRL/lpr雌性小鼠以及6 只10 周龄无特定病原体（specificpathogenfree,SPF)级C57BL/6雌性小鼠，体质量（2 4.2 2.6）g，均购于上海斯莱克实验动物有限责任公司实验动物生产许可证号：SCXK（沪）2 0 17-0 0 0 5)，饲养于杭州医学院实验动物中心实验动物使用许可证号：SYXK（浙）2 0 2 1-0 0 51)，饲养环境湿度（555）%，温度（2 31），12 h 光/暗循环，自由饮食。本研究已通过浙江省实验动物中心实验动物福利伦理委员会审核批准编码：ZJCLA-IACUC-20010094，动物处置方法符合动物伦理学标准。1.2药物与试剂Trizo试剂购于河南麦斯研生物科技有限公司（批号：NR0002）；细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购于南京建成科技有限公司（批号：20210620);RNA提取试剂盒和定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR）试剂盒购于大连TaKaRa公司（批号：ALE0867A）；酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒购于上海酶联生物科技有限公司（批号：EK206/3-96、EK 2 8 2/3-96);聚偏二氟乙烯（polyvinylidenefluo-ride，PVD F）膜购于美国Invitrogen公司（批号：ISEQ00010）；辣根过氧化物酶（streptavidin，H RP）标记山羊抗小鼠和抗兔白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6）、-干扰素（interferon-,IFN-）、肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-)抗体均购于北京博奥森生物技术有限公司（批号：2 18 6 5-1-AP、CSB-E0495m、a b 17 93)。1.3主要仪器器LightCycler480I型荧光定量PCR仪购于瑞士Roche公司；XSP-18C倒置生物显微镜为日本Olympus公司产品；MultiskanSkyHigh酶标仪购于美国ThermoFisher公司。1.4方法1.4.1动物实验12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组（6 只）和干预组（6 只），另选取C57BL/6小鼠（6 只）为对照组。干预组灌胃给予0.1mL/10g狼疮定浓缩液，对照组、模型组灌胃给予等体积0.9%氯化钠溶液1次/d,所有动物均给药8 周。狼疮定方：干地黄15g，炙鳖甲12 g，青蒿12 g，白花蛇舌草15g，积雪草15g，赤芍12 g，炒薏苡仁15g，佛手片9g，升麻9g，甘草6g，水煎浓缩成生药含量1.56 gmLl,4保存。给药前及给药8 周后采取血样，4放置，30 0 0 r/min离心10 min，分离血清，-2 0 保存。1.4.2血清蛋白检测采用ELISA法检测给药前后血清炎性因子IL-6、I FN-、T NF-以及NF-kB信号通路相关蛋白NF-kB抑制蛋白（NF-k Bi n h i b i t o r,IkB）、NF-k B抑制蛋白p50(NF-kB inhibitorp50,IkBp50)、NF-k B抑制蛋白p65(NF-kB in-hibitorp65,IkBp65)表达水平。根据试剂盒说明书操作，酶标仪检测最大吸收波长450 nm处的吸光度值，同时绘制浓度-吸光度值标准曲线，根据标准曲线回归方程，计算出血清蛋白浓度1.4.3扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplifi-732F4浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期cationrefractorymutationsystemRealtimefluorescence-quantitative polymerase chain reaction,ARMS-qPCR）检测NF-kB信号通路相关mRNA表达采用Trizol法裂解全血并抽提总RNA，反转录为cDNA。按照mRNA检测试剂盒提示建立反应体系，反应参数：9510 min预变性,9510 s变性，6030 s 退火，7 0 30 s延伸，共40 个循环。PCR产物电泳、染色后检测扩增结果，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参，采用2-C法计算mRNA相对表达量。主要引物序列由上海生工生物工程股份有限公司合成。见表1。表1引物序列Tab.1Primersequences(5 to 3)目的基因上游引物下游引物IkBCGTTCCTGCACTTGGCCATCGTCCGGCCATTACAGGGCTCIkBp50TTGGTCATGTGTGTGCTAAGGGCCAGCTGTCCTGTCCATTCTIkBp65AGGCTTCTGGGCCTTATGTGTGCTTCTCTCGCCAGGAATACGAPDHAGGTCGGTGTGAACGGATTTGTGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA1.4.4肾组织病理形态学观察最后1次给药完成后第2 天,所有小鼠以盐酸替来他明盐酸唑拉西泮腹腔注射处死，手术切取肾组织标本，一部分标本立即采用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，H E）染色，光镜下观察肾组织病理形态学变化。1.4.5免疫印迹法检测肾组织炎性因子表达将肾组织研磨处理，裂解后测定蛋白浓度，电泳分离、转膜,封闭后依次加人抗TNF-、I L-6、I FN-一抗和HRP标记的二抗，孵育后洗涤3次，以增强型化学发光试剂（enhancedchemiluminescence，ECL）曝光显影。以GAPDH为内参，分析各条带灰度值，计算各蛋白相对表达量。1.5统计学分析运用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以土s表示，组间两两比较应用最小显著性差异法（least signifi-cantdifference,LSD）-t 检验，多组间比较采用F检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组小鼠血清炎性因子表达比较与对照组比较,模型组和干预组血清IL-6、I FN-、T NF-水平均显著升高（P0.05），提示MRL/lpr小鼠组织中炎性因子表达水平显著高于普通小鼠。灌胃8 周后，干预组血清IL-6、I FN-、T NF-水平均显著降低,且明显低于模型组（P0.05），提示狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应。见表2。表2 各组小鼠血清炎性因子表达比较Tab.2Comparison of serum inflammatory cytokine expression in each group(xs,pgmL-1)IL-6IFN-TNF-组别给药前给药后给药前给药后给药前给药后模型组626.365.35*69.2710.71*435.276.37*102.4212.54*4166.6818.36*229.4222.51*4干预组624.534.56*17.454.12*#37.666.53*25.744.86*#163.5616.53*87.4212.55*#对照组67.672.288.362.4516.843.4218.724.4244.146.1845.397.46F值34.987141.15224.617193.627135.478232.537P值0.0010.0010.0010.0010.0010.001注：与对照组比较，P0.05；与模型组比较，P0.05;与给药前比较，P0.05。Note:Compared with control group,P0.05;compared with model group,P0.05;compared with before administration,p0.05.733浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期2.2各组小鼠血清NF-kB信号通路相关蛋白表达比较上与对照组比较，模型组和干预组NF-kB信号通路相关蛋白IkB、Ik Bp50、Ik Bp65表达明显升高（P 0.0 5），提示狼疮小鼠的NF-kB信号通路处于活化状态。灌胃8 周后，干预组NF-kB信号通路相关蛋白IkB、Ik Bp50、Ik Bp65表达显著下降，且明显低于模型组（P0.05），提示狼疮定可有效抑制NF-kB信号通路状态。见表3。表3各组小鼠血清NF-kB信号通路相关蛋白表达比较Tab.3Comparison of expressions of serum NF-kB signaling pathway-related proteins in each group(xs,pgmL-1)IkBIkBp50IkBp65组别给药前给药后给药前给药后给药前给药后模型组6124.3423.54*223.7435.25*4154.3224.84*301.2648.42*4258.2533.72*425.4644.12*4干预组6132.3420.35*63.8312.64*#148.8326.53*71.2412.47*#4253.3437.76*125.8924.59*#对照组624.845.5326.746.2453.368.7355.249.3866.3413.7968.7214.92F值64.637136.870724941.524131.79178.26238.233P值0.0010.0010.0010.0010.0010.001注：与对照组比较，P0.05；与模型组比较，P0.05；与给药前比较，-P0.05。Note:Compared with control group,P0.05;compared with model group,#p0.05;compared with before administration,p0.05.2.3各组小鼠血清NF-kB信号通路相关mRNA表达比较交与对照组比较，模型组和干预组IkB、IkBp50、Ik Bp65mRNA表达均升高（P0.05），提示狼疮小鼠的NF-kB信号通路处于活化状态。灌胃8周后，干预组IkB、Ik Bp50、Ik Bp65mRNA表达显著下降，且明显低于模型组（P0.05），提示狼疮定可有效抑制NF-kB信号通路状态，抑制狼疮小鼠的炎症反应。见表4。表4各组小鼠血清NF-kB信号通路相关mRNA表达情况比较Tab.4Comparison of expressions of serum NF-kB signaling pathway-related mRNAs in each group(xs)IkBIkBp50IkBp65组别给药前给药后给药前给药后给药前给药后模型组61.150.261.740.34*41.720.26*2.850.46*41.900.26*3.150.52*4干预组61.170.27*0.660.18*#41.670.27*0.860.18*#1.880.27*1.160.20*#对照组60.360.080.370.090.660.120.680.140.780.150.800.18F值26.15260.104341.56699.03045.36484.121一P值一0.0010.0010.0010.0010.0010.001注：与对照组比较，P0.05；与模型组比较，#P0.05；与给药前比较，P0.05。Note:Compared with control group,P0.05;compared with model group,P0.05;compared with before administration,-P0.05.2.4各组小鼠肾组织病理学观察HE染色显示，对照组小鼠肾组织未见明显的组织病理学损伤，形态结构均正常。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化以及结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应，干预组肾组织炎性损伤较模型组轻。见图1。2.5各组小鼠肾组织中炎性因子表达比较与对照组比较，模型组和干预组肾组织中IL-6、I FN-、TNF-表达水平明显升高（P0.05），提示狼疮小鼠肾组织中炎性因子表达水平显著高于普通小鼠。灌胃8 周后，与模型组比较，干预组肾组织中IL-6、IFN-、T NF-表达水平均显著下降（P0.05），提示狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠肾组织的炎症反应。见表5、图2。734浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期张芹，等：基于NF-kB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/pr小鼠炎症反应的调节作用ABC注：A.对照组；B.干预组；C.模型组。Note:A.Control group;B.Intervention group;C.Model group.图1各组小鼠肾组织病理学变化（HE染色，2 0 0）Fig.1Kidney histopathological changes of mouse liver in each group(HE staining,200 x)表5各组小鼠肾组织中炎性因子表达比较Tab.5Comparison of the expression of inflammatory factors in kidney tissue in each group(xs)组别nIL-6IFN-TNF-模型组61.370.21*1.590.26*1.840.34*干预组60.680.12*#0.860.16*#0.920.18*#对照组60.460.090.560.110.730.17F值60.92847.97235.861P值0.0010.0010.001注：与对照组比较，P0.05；与模型组比较，P0.05。Note:Compared with control group,P0.05;compared with model group,#p0.05.3讨论目前研究认为，免疫调节失衡与异常炎症状态是导致SLE发生发展的重要机制。其主要发病机制为抗核抗体（antinuclear antibody，A NA）、抗双链DNA抗体（anti-double-stranded DNA antibody）等多种致病性自身抗体大量产生，形成免疫复合物，并在组织中沉积，导致补体及免疫细胞激活，产生大量炎性因IL-6IFN-TNF-.GAPDH对照组模型组干预组图2免疫印迹检测肾组织蛋白表达情况Fig.2Protein expression levels of renal tissue detected by Western blot子，进而导致免疫损伤9中医药在治疗SLE方面具有一定优势。中医认为SLE以肝肾精血亏虚为本,肝失疏泄或七情内伤为标,，兼受外邪侵袭而诱导发病。其中,瘀血阻络、热伤血脉导致关节肿痛、活动不利；营血内灼、热毒伤阴可导致口腔溃疡、皮疹红斑。研究认为，解毒祛瘀滋阴法可作为治疗SLE的基本法则，狼疮定以解毒祛7354浙江中医药大学学报2 0 2 3年7 月第47 卷第7 期瘀滋阴方为基础方，加减使用10 味解毒祛瘀滋阴药配伍而成-1。方中炙鳖甲补肾益阴、人络搜邪，青蒿清热?血、透邪外出，共为君药；赤芍、积雪草清热?血、活血化瘀，升麻、白花蛇舌草清热解毒消斑，干地黄滋阴清热、?血补血，共为臣药；佛手片、炒薏苡仁合用，有健脾理气化湿之效，为佐药；甘草调和诸药兼解毒，为使药。多味药材联合使用，共奏清热解毒、补肾养阴、活血化瘀的功效，最终发挥标本兼治的效果。尽管中药在SLE的治疗中具有良好的应用价值，但中药活性成分复杂，具体的作用机制尚未明确。B细胞的多克隆活化是诱导SLE发病的重要原因，促炎细胞因子的过度产生可引发全身性的炎症反应，继而导致免疫损伤4。NF-kB通路是重要的炎性相关信号通路，其过度活化在SLE的发病过程中起着重要作用。NF-kB信号通路可介导免疫细胞的活化，刺激IL-6、IFN-、T NF-等炎性因子的释放，从而加重机体炎性损伤，导致疾病的发生发展(15。本研究发现，给予MRL/lpr小鼠灌胃狼疮定浓缩液后,小鼠血清中的IL-6、IFN-、T NF-水平明显低于模型组，表明狼疮定具有抑制炎性因子释放的作用。进一步检测血清中NF-kB信号通路相关蛋白IkBp50、p 6 5蛋白和mRNA表达水平，结果显示给药前干预组、模型组的NF-kB信号通路相关蛋白和mRNA表达水平明显高于对照组，表明狼疮小鼠的NF-kB信号通路处于活化状态。经狼疮定浓缩液灌胃干预后，干预组以上蛋白的表达水平明显降低，进一步证实狼疮定可有效抑制NF-kB信号通路状态，从而降低NF-kB信号通路介导的炎性因子释放。此外，汪梅姣等16 研究发现，狼疮定可调控中性粒细胞迁移、趋化功能，狼疮定联合地塞米松可减少中性粒细胞外诱捕网生成。这进一步验证了本研究结果的可信度，表明了狼疮定能够有效抑制狼疮小鼠的炎症反应,抑制SLE病情进展。狼疮性肾炎是SLE的最常见且最严重的并发症之一，它是由于SLE诱导肾脏发生炎性损伤，肾小球、肾小管出现炎症反应，并伴有间质纤维化等病理性改变。该病预后较差，给临床治疗带来较大挑战 7。本研究发现，模型组、干预组小鼠的肾小球和肾小管周围出现明显的炎症反应，肾小球硬化，肾小管扩张，肾组织结构严重破坏。但狼疮定灌胃后，干预组肾组织中的IL-6、I FN-、T NF-表达水平明显降低，肾组织损伤程度较模型组明显减轻。这表明狼疮定可有效抑制炎性因子的释放，从而减轻小鼠肾组织炎症反应。研究表明，NF-kB信号通路的活化能够诱导炎症因子的大量产生，加重狼疮性肾炎患者肾小球的破坏程度18-19。胡义阳等2 0 研究发现，根皮素可通过下调NF-kB信号通路的活化，从而减轻MRL/lpr狼疮性肾炎小鼠肾组织的炎性损伤。结合本研究结果，笔者推测，狼疮定能够抑制NF-kB活性，降低炎性因子IL-6、IFN-、T NF-表达水平，从而减轻机体炎性损伤。另外，药理学角度分析表明，升麻有效提取物参与调节转录、细胞增殖、催化等生物学过程，可降低炎症因子水平；青蒿提取物以及积雪草所含的黄酮类可改善机体免疫力，发挥免疫调节作用；甘草提取物具有抗炎、抗氧化等功效；薏苡仁含有糖类、脂肪酸、笛醇类、生物碱类、三类等多种活性物质，在SLE治疗中具抗炎、镇痛、提高机体免疫等药理活性2 1。多种活性成分联合用药能够进一步抑制炎性因子的释放，改善炎症反应，从而降低肾脏的炎性损伤。综上所述，狼疮定可抑制MRL/pr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-kB信号通路有关。本研究结果为今后研究狼疮定治疗SLE的作用机制提供了新的参考价值。参考文献：Referrences:1 KIRIAKIDOU M,CHING C L.Systemic lupus erythe-matosusJ.Ann Intern Me,2020,172(11):ITC81-ITC96.2 WEIDENBUSCH M,KULKARNI O P,ANDERS H.The innate immune system in human systemic lupus ery-thematosusJ.Clin Sci(Lond),2017,131(8):625-634.3 SONALI N,NICOLA B,RICHARD F.Biologics in thetreatment of Sjogrens syndrome,systemic lupus erythe-matosus,and lupus nephritisJ.Curr Opin Rheumatol,2020,32(6):609-616.4 张丹君，鲁盈.鲁盈教授祛风除湿法治疗狼疮性肾炎的经验探析J.浙江中医药大学学报，2 0 2 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