基于CSE_H_2S体系探讨葱白提取物对H_2S催化酶及趋化因子CX3CL1的作用机制.pdf

基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2 0 2 1 D 0 1 F 2 2);武汉市卫生与健康委员会科研项目(WZ 1 8 A 0 3)作者简介:雷 杰(1 9 9 1-),男,住院医师,在读博士,研究方向:中西医结合治疗心血管疾病。通信作者:段刚峰,男,副主任医师,博士,研究方向:中西医结合治疗心血管疾病,E-m a i l:5 1 5 4 5 2 8 6 3q q.c o m。本文引用:雷 杰,郑琼莉,段刚峰.基于C S E/H2S体系探讨葱白提取物对H2S催化酶及趋化因子C X 3 C L 1的作用机制J.新疆医科大学学报,2 0 2 3,4 6(1 1):1 4 4 4-1 4 4 9.d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 1.0 0 6基于C S E/H2S体系探讨葱白提取物对H2S催化酶及趋化因子C X 3 C L 1的作用机制雷 杰1,郑琼莉1,段刚峰2(1湖北中医药大学中医临床学院,武汉 4 3 0 0 0 0;2博乐市人民医院,新疆 博乐 8 3 3 4 0 0)摘要:目的 研究葱白提取物对动脉粥样硬化(A S)大鼠C X 3 C 趋化因子配体1(C X 3 C L 1)、C X 3 C趋化因子受体 1(C X 3 C R 1)、胱硫醚合成酶(C B S)、3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3 M S T)表达的影响及相互作用机制。方法 纯种健康雄性S D大鼠,S P F级,体重(2 0 02 0)g,共4 0只,随机选择1 0只作为正常组,另外3 0只制备大鼠A S模型,再随机分为模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组,每组各1 0只。正常组以基础饲料喂养,模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组均以高脂维生素D 3饲料喂养。从第5周开始,葱白提取物组大鼠给予配置好的葱白提取物溶液1 0 m L/k g体质量灌胃,辛伐他汀组大鼠给予辛伐他汀混悬液1 0 m L/k g体质量灌胃;正常组和模型组均给予等容积生理盐水1 0 m L/k g体质量灌胃,共连续8周。在第1 2周时,留取大鼠血液,分离主动脉。采用生化检测、HE染色、W e s t e r n b l o t、R T-P C R检测脂质代谢、H2S催化酶、趋化因子及基质金属蛋白酶表达。结果 与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B浓度均降低(P0.0 5),高密度脂蛋白胆固醇浓度升高(P0.0 5)。与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组斑块内部的胆固醇结晶较少,管腔狭窄程度较轻。与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀组C X 3 C L 1 mR NA、C X 3 C R 1 mR NA、MMP 7 mR NA、MMP 9 mR-NA表达均下调。与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀组大鼠主动脉组织中3 M S T、C B S蛋白相对表达量升高(P0.0 5),而C X 3 C L 1、C X 3 C R 1蛋白相对表达量降低(P0.0 5)。结论 葱白提取物可通过调控内源性H2S生成体系,抑制C X 3 C L 1、C X 3 C R 1表达、降低MMP 7、MMP 9活性,发挥抗动脉粥样硬化作用。关键词:葱白提取物;动脉粥样硬化;胸痹;C X 3 C L 1/C X 3 C R 1;H2S中图分类号:R 2 5 6.2 2 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-5 5 5 1(2 0 2 3)1 1-1 4 4 4-0 6d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 9-5 5 5 1.2 0 2 3.1 1.0 0 6S t u d y o n m e c h a n i s m o f a c t i o n o f e x t r a c t s o f s c a l l i o n s t a l k o n H2S c a t a l y s i s e n z y m e a n d c h e m o k i n e C X 3 C L 1 b a s e d o n C S E/H2S s y s t e mL E I J i e1,Z H E N G Q i o n g l i1,D U A N G a n g f e n g2(1C l i n i c a l C o l l e g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,H u b e i U n i v e r s i t y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,W u h a n 4 3 0 0 0 0,C h i n a;2B o l e P e o p l e s H o s p i t a l,B o l e X i n j i a n g 8 3 3 4 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f s c a l l i o n s t a l k o n t h e e x p r e s s i o n s o f C X 3 C L 1,C X 3 C R 1,C B S a n d 3 M S T i n r a t s w i t h a t h e r o s c l e r o s i s(A S)a n d i t s i n t e r a c t i o n m e c h a n i s m.M e t h o d s A t o t a l o f 4 0 第4 6卷 第1 1期新 疆 医 科 大 学 学 报V o l.4 6 N o.1 1 2 0 2 3年1 1月J o u r n a l o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t yN o v.2 0 2 3 p u r e b r e d h e a l t h y m a l e S D r a t s,S P F g r a d e,w e i g h i n g(2 0 02 0)g w e r e f e d i n t h i s r e s e a r c h.1 0 r a t s w e r e r a n d o m l y s e l e c t e d a s n o r m a l g r o u p,a n d t h e o t h e r 3 0 r a t s w e r e p r e p a r e d A S m o d e l.T h e r a t s w e r e r a n d o m-l y d i v i d e d i n t o m o d e l g r o u p,s c a l l i o n e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a t i n g r o u p,1 0 r a t s i n e a c h g r o u p.N o r m a l g r o u p w a s f e d w i t h b a s i c d i e t,m o d e l g r o u p,s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a t i n g r o u p w e r e a l l f e d w i t h h i g h f a t v i t a m i n D 3 d i e t.S t a r t i n g f r o m t h e 5 t h w e e k,t h e s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p w a s g i v e n 1 0 m L/k g b o d y m a s s g a v a g e,a n d t h e s i m v a s t a t i n g r o u p w a s g i v e n s i m v a s t a t i n s u s p e n s i o n 1 0 m L/k g b o d y m a s s g a v a g e.N o r m a l g r o u p a n d m o d e l g r o u p w e r e g i v e n e q u a l v o l u m e n o r m a l s a l i n e 1 0 m L/k g b o d y m a s s-g a v a g e f o r 8 w e e k s.A t w e e k 1 2,b l o o d w a s t a k e n f r o m t h e r a t s a n d t h e a o r t a w a s i s o l a t e d.L i p i d m e t a b o-l i s m,H2S c a t a l y t i c e n z y m e,c h e m o k i n e s a n d m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e s w e r e d e t e c t e d b y b i o c h e m i c a l a s-s a y,HE s t a i n i n g,W e s t e r n b l o t a n d R T-P C R.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e c o n c e n t r a-t i o n s o f t o t a l c h o l e s t e r o l,t r i g l y c e r i d e s,l o w-d e n s i t y l i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l,a n d a p o l i p o p r o t e i n B i n s e r u m o f s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a t i n g r o u p w e r e d e c r e a s e d(P0.0 5),w h i l e t h e c o n c e n t r a-t i o n s o f h i g h-d e n s i t y l i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l w e r e i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e c h o l e s t e r o l c r y s t a l s i n t h e p l a q u e o f s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a t i n g r o u p w e r e l e s s,a n d t h e d e g r e e o f l u m e n s t e n o s i s w a s l e s s.C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e e x p r e s s i o n o f C X 3 C L 1 mR-NA,C X 3 C R 1 mR NA,MMP 7 mR NA a n d MMP 9 mR NA i n t h e s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a-t i n g r o u p w e r e d o w n-r e g u l a t e d.C o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p,t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f 3 M S T a n d C B S p r o t e i n s i n t h e a o r t i c t i s s u e s o f t h e s c a l l i o n w h i t e e x t r a c t g r o u p a n d s i m v a s t a t i n g r o u p w e r e i n-c r e a s e d(P0.0 5),w h i l e t h e r e l a t i v e e x p r e s s i o n l e v e l s o f C X 3 C L 1 a n d C X 3 C R 1 p r o t e i n w e r e d e c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e e x t r a c t c a n i n h i b i t t h e e x p r e s s i o n o f C X 3 C L 1 a n d C X 3 C R 1,r e d u c e t h e a c t i v i t y o f MM P 7 a n d MM P 9,a n d p l a y a n a n t i-a t h e r o s c l e r o s i s r o l e b y r e g u l a t i n g e n d o g e n o u s H2S p r o d u c t i o n s y s t e m.K e y w o r d s:s c a l l i o n s t a l k;a t h e r o s c l e r o s i s;t h o r a c i c o b s t r u c t i o n;C X 3 C L 1/C X 3 C R 1;H2S 据 中国心血管健康与疾病报告2 0 1 9 提供的数据显示1,心血管疾病依然占城乡居民总死亡原因的首位,包括肿瘤和其他疾病在内。其中冠心病的患病率及死亡率自2 0 1 2年以来一直呈逐年上升趋势,1 5岁及以上人口冠心病患病率为1 0.2,造成了沉重的社会负担。动脉粥样硬化(A t h e r o s c l e-r o s i s,A S)是导致冠心病的重要病理学基础,其特征是大、中型血管管壁脂质沉积、内膜增厚、斑块形成。动脉粥样硬化的形成与发展过程十分复杂,目前尚未完全阐明,主要涉及脂质代谢、炎症、氧化应激、免疫等多个方面。近年来,硫化氢(H2S)气体信号分子以其抗氧化应激2、抗炎症3-4等效应,在调控动脉粥样硬化发生发展方面起着重要作用。H2S主要由胱硫 醚合成酶(C y s t a t h i o n i n e s y n t h a s e,C B S)、胱 硫 醚裂 解 酶(C y s t a t h i o n i n e l y a s e,C S E)、3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3-m e r c a p t o p y r u-v a t e s u l f u r t r a n s f e r a s e,M S T)催化生成。在心血管系统中,H2S在调节血脂含量、抑制泡沫细胞形成、降低基质金属蛋白酶(MMP)活性、促进内皮细胞增殖和迁移、抑制趋化因子受体C X 3 C R 1和趋化因子配体C X 3 C L 1的表达、抗凝血等方面发挥了重要的作用5。而C X 3 C R 1和C X 3 C L 1在A S发展过程中可趋化单核细胞黏附到活化的内皮细胞,激活血小板6。本团队前期研究证实,与空白模型组对比,葱白提取物可以显 著升高急性 心 肌 缺 血 大 鼠 血 浆H2S、一氧化氮(NO)水平(P0.0 1)7,还可通过P P A R信号通路降低血清总胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)和低密度脂蛋白胆固醇(L D L-C)的浓度及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的浓度,减少血管壁脂质沉积8。本研究拟进一步探讨葱白提取物能否通过调控内源性H2S水平,抑制C X 3 C R 1、C X 3 C L 1表达,降低MMP活性,从而改善动脉粥样硬化病变,为动脉粥样硬化的防治提供新思路。1 材料与方法1.1 实验动物 纯种健康雄性S D大鼠,S P F级,体重(2 0 02 0)g,共4 0只,由湖北省实验动物研究中心提供(动物合格证编号:4 2 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 6 9)。饲养于武汉市中西医结合医院中心实验室,每笼5只,动物房昼夜1 2 h光暗变替,室内温度2 5,湿度6 0%,饲料与饮水均经辐射消毒并可自行随意摄取。本研究通过武汉市第一医院医学伦理委员会审批(审批号:2 0 1 88号)。1.2 实验试剂 葱白提取物由武汉市中西医结合医院制剂中心提供(批号:2 0 1 7 0 3 2 6),配置成最终浓5441 第1 1期 雷 杰,等:基于C S E/H2S体系探讨葱白提取物对H2S催化酶及趋化因子C X 3 C L 1的作用机制度为0.1 0 m g/m L的溶液。该提取物是将双子叶百合科植物分葱的新鲜鳞茎先经微波干燥,再行超临界萃取而得,总得率为1.8 5%左右,其主要成分包括硫化合物、甾体、皂苷、不饱和脂肪酸等。辛伐他汀(舒降之)片由杭州默沙东制药有限公司提供(批号:0 2 0 0 1 6 9 7),配置成最终浓度为1 0 m g/m L的溶液。胆固醇、胆酸钠、维生素D 3粉剂和丙基硫氧嘧啶均购自武汉宇阳锋锐生物科技有限公司(批号分别为:C 1 0 4 0 2 8,B 1 3 1 0 1 0 0 1,C 1 0 5 3 5 4),其余试剂均为市售分析纯。1.3 仪器 低温高速离心机(S o r v a l l S t r a t o s,赛默飞,美国),超低温冰箱(MD F-3 9 0 AT,S ANYO,日本),组织包埋机(L e i c a 公司,德国),组织切片机(L e i c a 公司,德国),荧光显微镜(C X 2 2,O L YMP U S公司,日本),全自动生化分析仪(AU 2 7 0 0,贝克曼公司,美国),多功能酶标仪(S p e c t r a M a x i D 5,美谷分子仪器有限公司,美国),垂直电泳仪(J Y-S C Z,北京六一 仪 器 厂),凝 胶 图 像 分 析 仪(E B O X C X 5,V i b e r L o u r m a t 公司,法国)。1.4 方法1.4.1 模型制备及分组 4 0只大鼠适应性喂养1周,随机选择1 0只作为正常组,另外3 0只参考文献9 的方法制备大鼠A S模型,再随机分为模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组,每组各1 0只。其中正常组以基础饲料喂养,模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组均以高脂维生素D 3饲料(2%胆固醇、0.5%胆酸钠、3%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.0 1 2 5%维生素D 3粉剂和8 5.2 7 5%的基础饲料)喂养。各组饮水为经辐射消毒的普通自来水。在实验开始时,即用维生素D 3针剂(31 05 u/k g体质量)在大鼠右下肢行肌肉注射1次,每周1次,连续4周。1.4.2 给药方法 从第5周开始,葱白提取物组大鼠给予配置好的葱白提取物溶液1 0 m L/k g体质量灌胃,辛伐他汀组大鼠给予辛伐他汀混悬液1 0 m L/k g体质量灌胃;正常组和模型组均给予等容积生理盐水1 0 m L/k g体质量灌胃,共连续8周。1.4.3 标本取材与制备 在第1 2周时,将各组大鼠禁食过夜,每组大鼠均予以3%戊巴比妥腹腔注射麻醉并固定,先从腹主动脉抽血,分离血浆、血清,于-8 0 保存,然后插管入升主动脉,用生理盐水冲洗,分离主动脉。每组取部分主动脉组织于-8 0 保存备用(用以R T-P C R和W B检测),部分大鼠主动脉组织以1%多聚甲醛及1.2 5%戊二醛的0.1 m o l/L磷酸缓冲液灌洗,取下整段主动脉备用,用以H E染色。1.4.4 血脂水平检测 用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇(T C)、甘油三酯(T G)、高密度脂蛋白胆固醇(HD L-C)、低密度脂蛋白胆固醇(L D L-C)、载脂蛋白B(A p o B)的含量。1.4.5 血管病变程度检测 将固定好的主动脉标本脱蜡至水,依次予以苏木素、伊红染液染色,然后脱水封片,观察血管病理损伤程度。1.4.6 H2S催化酶含量的检测 采用W e s t e r n b l o t法检测大鼠主动脉胱硫醚合成酶(C B S)和3-巯基丙酮酸硫基转移酶(3 M S T)的含量。1.4.7 主动脉组织趋化因子及MMP基因及蛋白表达的检测 采用R T-P C R和W e s t e r n b l o t方法检测C X 3 C L 1、C X 3 C R 1、MMP 7、MMP 9的基因及蛋白表达。1.5 统计学处理 应用S P S S 1 7.0软件进行数据分析,计量资料以均数标准差(x-s)表示,多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验,以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 各组大鼠血脂水平比较 与正常组比较,模型组大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B浓度均升高(P0.0 5),高密度脂蛋白胆固醇浓度降低(P0.0 5),提示造模成功。与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B浓度均降低(P0.0 5),高密度脂蛋白胆固醇浓度升高(P0.0 5),说明葱白提取物同辛伐他汀一样,都能有效调节大鼠血清血脂水平,见表1。表1 葱白提取物对各组大鼠血脂水平的影响(x-s,n=1 0)分组T C/(mm o l/L)T G/(mm o l/L)L D L-C/(mm o l/L)HD L-C/(mm o l/L)A p o B/(g/m L)正常组2.2 40.1 21.6 20.0 82.0 60.0 51.6 70.0 32 2.7 93.2 8模型组3.7 10.4 1*2.8 20.3 1*3.8 20.3 2*0.7 50.0 3*6 8.0 75.3 2*葱白提取物组2.0 20.1 01.3 90.0 32.3 50.0 51.4 20.0 54 8.1 44.1 8辛伐他汀组1.9 30.0 81.4 60.0 52.2 10.0 31.5 60.0 53 6.8 56.1 1 注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。6441 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 2.2 病理组织学检测 正常组大鼠主动脉内膜光滑,结构完整,局部无断裂及缺损,内膜无增厚,管壁无可见斑块,管腔无狭窄。模型组内膜结构局部断裂不连续,部分内膜明显增厚,在内膜局部还可看到大量脂类物质进入内膜下形成的胆固醇结晶及较大斑块,斑块纤维帽较薄,管腔可见明显狭窄。葱白提取物组及辛伐他汀组内膜亦可观察到增厚及局部结构破坏,并可在内膜局部观察到脂类物质沉积形成的粥样斑块。与模型组比较,葱白提取物组及辛伐他汀组斑块内部的胆固醇结晶较少,管腔狭窄程度较轻,见图1。2.3 葱白提取物对各组A S大鼠主动脉C X 3 C L 1、C X 3 C R 1、MMP 7、MMP 9基因m R N A表达水平的影响 与 正 常 组 比 较,模 型 组C X 3 C L 1 mR NA、C X 3 C R 1 mR NA、MMP 7 mR NA、MMP 9 mR NA表达均上调。与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀 组C X 3 C L 1 mR NA、C X 3 C R 1 mR NA、MMP 7 mR NA、MMP 9 mR NA表达均下调,见表2。正常组模型组葱白提取物组辛伐他汀组图1 各组大鼠H E染色(1 0 0)表2 葱白提取物对A S大鼠主动脉组织C X 3 C L 1、C X 3 C R 1、MM P 7、MM P 9基因m R N A表达的影响(x-s,n=1 0)组别C X 3 C L 1C X 3 C R 1MMP 7MMP 9正常组 t7.8 8 11.0 0 09.2 4 31.0 0 09.7 3 81.0 0 06.4 9 41.0 0 0 t0.0 0 00.0 0 00.0 0 00.0 0 0 2-t1.0 0 01.0 0 01.0 0 01.0 0 0模型组 t5.8 8 52.8 8 96.8 1 53.8 6 78.3 6 82.2 1 14.2 4 33.6 5 2 t-1.9 9 7-2.4 2 7-1.3 7 0-2.2 5 1 2-t 3.9 9 0 5.3 7 8 2.5 8 4 4.7 6 0葱白提取物组 t6.6 5 41.8 6 27.6 3 62.4 4 78.7 9 01.6 0 65.0 9 82.1 9 9 t-1.2 2 7-1.6 0 7-0.9 4 8-1.3 9 6 2-t 2.3 4 1 3.0 4 5 1.9 2 9 2.6 3 2辛伐他汀组 t6.7 9 51.5 2 97.7 2 41.9 3 19.1 5 41.2 8 65.1 7 21.9 6 5 t-1.0 8 6-1.5 1 8-0.5 8 4-1.3 2 3 2-t 2.1 2 3 2.8 6 5 1.4 9 9 2.5 0 12.4 葱白提取物对大鼠主动脉C B S、3 M S T、C X 3 C L 1、C X 3 C R 1蛋白表达的影响 与正常组比较,模型组大鼠主动脉组织中3 M S T、C B S蛋白相对表达量降低(P0.0 5),而C X 3 C L 1、C X 3 C R 1蛋白相对表达量升高(P0.0 5)。与模型组比较,葱白提取物组和辛伐他汀组大鼠主动脉组织中3 M S T、C B S蛋白相 对 表 达 量 升 高(P 0.0 5),而C X 3 C L 1、C X 3 C R 1蛋白相对表达量降低(P0.0 5)。葱白提取物组与辛伐他汀组间比较,差异无统计学意义,见表3、图2。7441 第1 1期 雷 杰,等:基于C S E/H2S体系探讨葱白提取物对H2S催化酶及趋化因子C X 3 C L 1的作用机制表3 葱白提取物对大鼠主动脉C B S、3 M S T、C X 3 C L 1、C X 3 C R 1表达的比较(x-s)正常组模型组葱白提取物组辛伐他汀组C B S/GA D P H0.7 10.0 10.2 60.0 2*0.4 10.0 20.6 10.0 13 M S T/GA D P H0.5 60.0 1 0.2 60.0 1*0.4 10.0 10.4 50.0 2C X 3 C L 1/GA D P H0.3 40.0 2 0.8 40.0 3*0.6 50.0 30.4 90.0 1C X 3 C R 1/GA D P H0.2 20.0 1 0.6 70.0 2*0.5 30.0 20.4 20.0 2 注:与正常组比较,*P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。图2 各组大鼠C B S、3 M S T、C X 3 C L 1、C X 3 C R 1、G A D P H蛋白表达水平3 讨论动脉粥样硬化在中医学中并无与之相对应的病名,以其脂质沉着,痹阻血脉的特点,大致可归于“胸痹”病范畴。“胸痹”的病因病机在 金匮要略 中被概括为:“阳微阴弦”,意为阳气上虚,阴寒下盛,寒乘虚而往上攻,所以胸痹心痛。根据这一特点,在治疗上 金匮要略论著 提出“阳无取乎补,宣而通之”,可见“辛温通阳”是治疗胸痹病的重点所在。葱属百合科植物,葱白为其近根部的鳞茎,味辛性温,具有发汗解表、通达阳气的功效1 0。现代药理学研究亦发现1 1,葱白提取物有调节血脂代谢、抗氧化损伤、抗炎症反应、抗血小板聚集、促进血管损伤后内皮化等作用。趋化因子C X 3 C L 1最早由B a z a n等1 2发现,它是一种具有可溶型和膜结合型双重形式的异常趋化因子,可溶型主要起趋化因子的作用,膜结合型主要介导 黏 附 作 用。在 动 脉 粥 样 硬 化 过 程 中,表 达C X 3 C R 1的血液单核细胞与表达C X 3 C L 1的血管内皮细胞结合,促进单核细胞和内皮细胞之间的黏附。C X 3 C L 1或C X 3 C R 1基因缺失均可使小鼠产生抗动脉粥样硬化作用。MMP分为I型胶原酶、明胶酶、基质降解酶、膜型基质金属蛋白酶、其他基质金属蛋白酶五大类,能降解细胞外基质,引起炎症反应、调控炎 症相关因子,参与动脉粥 样硬化全过程1 3。其中,MMP 9主要对I V型胶原进行降解,进而损伤血管内皮细胞、促进血管平滑肌细胞迁移和增殖、加剧管壁局部炎症反应、引发斑块破裂和血栓形成。MMP 7定位于A S斑块易破裂处,但在正常血管中不易监测到。有研究报道称,MMP 7参与N-钙黏蛋白的分解,调节血管平滑肌细胞(V a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s,V S MC)的凋亡,使A S斑块纤维帽变薄,使得斑块不稳定,易于破裂1 4。本实验研究发现,与模型组相比,葱白提取物组C X 3 C L 1、C X 3 C R 1蛋白相对表达量显著下降(P0.0 5),C X 3 C L 1 mR NA、C X 3 C R 1 mR NA、MMP 7 mR NA、MMP 9 mR NA表达均下调。说明葱白提取物通过抑制C X 3 C L 1、C X 3 C R 1、MMP 7、MMP 9的表达,发挥抗动脉粥样硬化作用。自1 9 8 9年W a r e n y c i a等1 5在人脑中首次发现H2S以来,科学家们对这个新型气体分子展开了广泛研究。不仅证实内源性H2S具有抗动脉粥样硬化作用1 6,更有研究发现1 7,H2S抑制了活化巨噬细胞中C X 3 C R 1的表达,降低了a p o E-/-小鼠主动脉中C X 3 C R 1的表达,且H2S诱导C X 3 C R 1表达的降低是通过过氧化物酶体增殖激活物受体c途径介导的。支持这一观点的证据是,外源性H2S供体硫氢化钠(N a H S)剂量依赖性地增加了干扰素c(I F N-c)或炎症递质脂多糖(L P S)刺激的R A W2 6 4.7细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中P P A R-c的D NA结合活性。C S E过 表 达 也 增 强I F N-c或L P S刺 激R AW 2 6 4.7细胞中P P A R-c的激活。本研究亦证实,与模型组相比,葱白提取物组大鼠主动脉组织中生成H2S的催化酶C B S、3 M S T蛋白相对表达量明显升高(P0.0 5)。综上所述,葱白提取物可能通过调控内源性H2S生成体系,抑制C X 3 C L 1、C X 3 C R 1表达、降低MMP 7、MMP 9活性,从而起到抗A S的功效。然而8441 新 疆 医 科 大 学 学 报第4 6卷 本实验数据仍然不足以建立H2S抑制动脉粥样硬化作用与巨噬细胞C X 3 C R 1-C X 3 C L 1表达之间的明确因果关系,进一步的研究可能需要在C X 3 C R 1/C X 3 C L 1基因修饰的大鼠中进行,以探测确切的相关连锁反应。参考文献:1 中国心血管健康与疾病报告编写组.中国心血管健康与疾病报告2 0 1 9概要J.中国循环杂志,2 0 2 0,3 5(9):8 3 3-8 5 4.2 武俊池,于楠楠,赵程程,等.硫化氢在组织修复和再生中的研究进展J.中国临床药理学与治疗学,2 0 2 2,2 7(2):2 3 5-2 4 0.3 王莹,廖莎,潘子涵,等.硫化氢通过N C OA 4介导的铁自噬调控铁死亡而减轻C S E诱导的肺泡上皮细胞损伤J.中国病理生理杂志,2 0 2 2,3 8(1):3 3-3 9.4 徐明星,刘文秀,梁雨亭,等.硫化氢在心血管疾病中的研究进展J.中国现代医学杂志,2 0 2 0,3 0(2 1):3 4-3 8.5 L I H,MAN I S,WU L,e t a l.T 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