桦木酸通过JAK2_STAT3信号通路对白血病细胞增殖和凋亡的影响.pdf

桦桦木木酸酸通通过过 /信信号号通通路路对对白白血血病病细细胞胞增增殖殖和和凋凋亡亡的的影影响响康亚伟 钦东煜 罗广立 作作者者单单位位:河河南南省省漯漯河河市市中中心心医医院院 【摘要】目的 探讨桦木酸对白血病 细胞增殖和凋亡的影响及其机制 方法 细胞分为对照组、桦木酸组、组和桦木酸 组桦木酸组细胞给予/桦木酸处理 组细胞给予/处理桦木酸 组细胞先用 /处理 后再给予/桦木酸处理 各组经处理后进行细胞增殖和凋亡检测以及酪氨酸激酶()、信号转导及转录激活因子()、和 蛋白检测 结果 与对照组比较 组和桦木酸组细胞增殖率降低细胞凋亡率升高/期细胞比例升高 和 蛋白相对表达量降低与 组或桦木酸组比较桦木酸 组细胞增殖率降低细胞凋亡率升高/期细胞比例升高 和 蛋白降低 结论桦木酸可抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡其可能是通过抑制/信号通路激活发挥作用 【关键词】白血病桦木酸增殖凋亡/信号通路 :./.中图分类号:.文献标识码:文章编号:()/.【】./.()()././.【】/(:)白血病是一种危害人类生命健康的血液和骨髓恶性克隆性疾病白血病干细胞的不断增殖和凋亡受阻是发生白血病的根源目前仍无安全有效的治疗白血病的方法 桦木酸是一种天然的五环三萜类化合物具有抗肿瘤活性在诱导胃癌细胞凋亡、抑制癌细胞增殖中具有重要作用 桦木酸还可抑制结肠癌细胞迁移和侵袭 发挥抗癌作用 酪氨酸激酶()活化后可募集胞浆中信号转导及转录激活因子()单体使无活性的 形成具有活性的二聚体并转移进入细胞核与 集合从而发挥信号传导作用/信号通路在急性单核细胞白血病中处于活化状态 研究发现 和 的活化状态与急性白血病细胞增殖密切相关 体内和体外研究表明桦木酸通过抑制/信号通路激活发挥抗骨肉瘤的作用 基于实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .以上研究本研究探讨桦木酸对白血病细胞 恶性生物行为学的影响及其具体机制 材材料料与与方方法法.细胞系 人白血病细胞株 购自美国 公司.试剂和仪器 桦木酸购自美国 公司、和 抗体购自美国 公司多功能酶标仪购自美国 公司流式细胞仪购自美国 公司电泳仪购自北京六一仪器厂.不同浓度桦木酸对细胞增殖的影响 常规培养 细胞第 代细胞离心后调整细胞密度为 个/将 细胞悬液接种于 孔板待细胞贴壁生长后给予不同浓度(、和 /)桦木酸处理细胞同时设置空白孔(只加入培养基)每个浓度设置 个复孔培养 后加入 溶液继续培养 置于酶标仪上测定 波长处的吸光度()值.检测细胞增殖 将 细胞分为对照组、桦木酸组、组和桦木酸 组桦木酸组细胞给予 /桦木酸处理 组细胞给予 /处理桦木酸 组细胞先用 /处理 后再给予 /桦木酸处理 收集细胞制成 个/的细胞悬液接种于 孔板每孔 细胞贴壁生长后加入 工作液继续培养 酶标仪测定吸光度()值计算细胞增殖率.流式细胞仪检测细胞凋亡 按照.的方法处理细胞后取细胞离心根据试剂盒说明书进行操作流式细胞仪检测细胞凋亡情况.流式细胞仪检测细胞周期 按照.的方法处理细胞后将密度为 个/的细胞悬液接种于 孔板每孔 置于培养箱中培养 胰蛋白酶消化 清洗 乙醇固定细胞置于 冰箱 清洗离心弃上清加入 碘化丙啶室温孵育流式细胞仪进行检测.蛋白印迹法检测细胞中各蛋白表达 取对数生长期细胞胰蛋白酶消化 清洗细胞 次裂解液裂解吸取上清液 法测定蛋白浓度煮沸使蛋白变性 电泳 .湿转 洗膜室温封闭 、和 蛋白抗体 孵育过夜洗膜二抗室温孵育 洗膜曝光并分析灰度值.统计学分析 所有数据采用 .进行分析计算结果均以()描述多组间比较采用单因素方差分析两两比较采用 检验 结结果果.桦木酸对细胞毒性检测结果 细胞存活率随桦木酸浓度的升高逐渐降低且具有剂量依赖性(.)见表 选用细胞存活率接近 的桦木酸浓度即 /用于后续实验表 不同浓度桦木酸对细胞存活率的影响()桦木酸浓度/()细胞存活率/.注:为与 /组比较 .为与 /组比较.为与/组比较.为与/组比较.为与 /组比较.细胞增殖率检测结果 与对照组比较桦木酸组和 组细胞增殖率降低(.)与桦木酸组比较桦木酸 组细胞增殖率降低(.)与 组比较桦木酸 组细胞增殖率降低(.)见表 表 各组细胞增殖率比较()组别细胞增殖率/对照组.桦木酸组.组.桦木酸 组.注:为与对照组比较.为与桦木酸组比较 .为与 组比较.细胞凋亡率检测结果 与对照组比较桦木酸组和 组细胞凋亡率升高(.)与桦木酸组比较桦木酸 组细胞凋亡率升高(.)与 组比较桦木酸 组细胞凋亡率升高(.)见表.细胞周期分布检测结果 与对照组比较桦木酸组和 组/期细实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .胞比例升高 期和/期细胞比例降低(.)与桦木酸组比较桦木酸 组/期细胞比例升高 期和/期细胞比例降低(.)与 组比较桦木酸 组/期细胞比例升高 期和/期细胞比例降低(.)见表 表 各组细胞凋亡率比较()组别细胞凋亡率/对照组.桦木酸组.组.桦木酸 组.注:为与对照组比较.为与桦木酸组比较 .为与 组比较.表 各组细胞周期分布()组别/期 期/期对照组.桦木酸组.组.桦木酸 组.注:为与对照组比较.为与桦木酸组比较 .为与 组比较.蛋白印迹法检测结果 与对照组比较桦木酸组和 组 和 蛋白相对表达量降低(.)与桦木酸组比较桦木酸 组 和 蛋白相对表达量降低(.)与 组比较桦木酸 组 和 蛋白相对表达量降低(.)见表、图 表 各组细胞中、和 蛋白相对表达量比较()组别对照组.桦木酸组.组.桦木酸 组.注:为与对照组比较.为与桦木酸组比较.为与 组比较.图 细胞中各蛋白表达电泳图 讨讨论论 目前临床上针对白血病的治疗方法主要包括化疗和造血干细胞移植但最大的难题是白血病难治愈和复发率高因此明确白血病的分子机制并寻找治疗白血病的分子靶点是治疗白血病的有效方法和途径 桦木酸又名白桦脂酸、白桦酸具有抗病毒、抗炎以及抗氧化和抗肿瘤等多种药理学活性桦木酸诱导胃癌细胞凋亡、抑制上皮间质转化、阻碍癌细胞迁移和侵袭 桦木酸通过诱导食管癌细胞凋亡、抑制干细胞特性增强食管癌细胞对顺铂的敏感性 桦木酸通过抑制/信号通路诱导自噬介导的细胞凋亡并抑制肝细胞癌 本研究采用不同浓度桦木酸处理白血病细胞结果显示细胞存活率随着桦木酸浓度的升高逐渐降低且具有依赖性 由此推测桦木酸在多种恶性肿瘤中具有抗癌作用 /信号通路是细胞因子激活相关的信号转导通路 受细胞因子激活后可活化 研究发现 和 在非小细胞肺癌中被活化 等研究报道甲基硒酸通过抑制/信号通路发挥抗乳腺癌作用 由此可见/信号通路活化与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关 等研究报道在急性淋巴细胞白血病中淫羊藿苷通过抑制 和 激活可诱导对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病细胞凋亡抑制细胞增殖 为探讨/信号通路是否在 白血病细胞中发挥作用本研究通过 抑制 细胞中 和 的表达采用 法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况结果表明:抑制/信号通路可阻碍 细胞增殖诱导 细胞凋亡 此外流式细胞仪检测细胞周期结果显示:使细胞阻滞在/期而 期和/期细胞比例降低 蛋白印迹法检测结果显示:降低 和 蛋白相对表达量 等研究发现桦木酸通过抑制 和 激活实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .发挥抗氧化应激作用从而减轻 毒素诱导的睾丸氧化损伤 为探讨桦木酸是否能通过/信号通路发挥抗白血病 细胞增殖本研究采用 和桦木酸联合处理 细胞结果显示:与单独使用桦木酸或 处理相比联合使用桦木酸和 可显著降低细胞增殖率同时升高细胞凋亡率和/期细胞比例而 期和/期细胞比例降低 和 蛋白相对表达量降低 由以上结果可见:联合使用 和桦木酸对 细胞的抑制作用要显著优于单独使用 或桦木酸 综上所述桦木酸可抑制白血病细胞增殖、诱导凋亡其可能是通过抑制/信号通路从而阻滞细胞周期发挥作用可为临床治疗白血病提供理论依据参考文献 .():.丁 璐邵淑丽何孟奇等.桦木酸对胃癌 细胞凋亡的影响.中国应用生理学杂志():.林晓英沈阿灵吴美珠等.桦木酸通过调节/信号通路抑制结肠癌细胞转移的研究.康复学报():.():./.():./.():.冯佳徐海婵温健等.桦木酸通过调控/信号通路对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制.吉林大学学报:医学版():.():.():./.():./.():./.():./.():./.():.(收稿日期 修回日期 )(编辑:甘 艳)实用癌症杂志 年 月第 卷第 期 .