基于Fas_FasL信号通路探究调控miR-214-3p对帕金森病大鼠的干预效果.pdf

也J页.Life Sci,2021;282:119800郾3摇 Liu Z,Zhang L,Chen W,et al郾 miR鄄195鄄5p regulates cell prolifera鄄tion,apoptosis,and invasion of thyroid cancer by targeting telomerasereverse transcriptase也J页.Bioengineered,2021;12(1):6201鄄9郾4摇 Yang B,Li L,Tong G,et al郾 Circular RNA circ_001422 promotes theprogression and metastasis of osteosarcoma via the miR鄄195鄄5p/FGF2/PI3K/Akt axis也J页.J Exp Clin Cancer Res,2021;40(1):235郾5摇 Wang H,Niu X,Jiang H,et al郾 Long non鄄coding RNA DLX6鄄AS1 fa鄄cilitates bladder cancer progression through modulating miR鄄195鄄5p/VEGFA signaling pathway也J页.Aging,2020;12(16):16021鄄34郾6摇Li L,Feng T,Zhang W,et al郾 MicroRNA biomarkerhsa鄄miR鄄195鄄5pfor detecting the risk of lung cancer也J页.Int J Genomics,2020;2020:1鄄9郾7摇Engelmann JC,Amann T,Ott鄄R觟tzer B,et al郾 Causal modeling ofcancer鄄stromal communication identifies PAPPA as a novel stroma鄄se鄄creted factor activating NF资B signaling in hepatocellular carcinoma也J页.PLoS Comput Biol,2015;11(5):e1004293郾8摇 Lu G,Chu Y,Tian P郾 Knockdown of H19 attenuates Ox鄄LDL鄄inducedvascular smooth muscle cell proliferation,migration,and invasion byregulating miR鄄599/PAPPA axis也J页.J Cardiovasc Pharm,2021;77(3):386鄄96郾9摇 He F,Li W,Liu P,et al郾 Influence of uterine corpus invasion on prog鄄nosis in stage 玉A2鄄域B cervical cancer:a multicenter retrospectivecohort study也J页.Gynecol Oncol,2020;158(2):273鄄81郾10摇 Xu X,Dang Z,Zhang J,et al郾 The miRNA,miR鄄125b,Inhibited In鄄vasion and metastasis of gastric鄄cancer cells by triggering the STAT3signaling pathway也J页.Cancer Manag Res,2020;12:8569鄄80郾也2022鄄09鄄16 修回页(编辑摇 张艳利)基于 Fas/FasL 信号通路探究调控 miR鄄214鄄3p 对帕金森病大鼠的干预效果杜姝摇 傅增辉摇 姜岩摇 刘晶摇 林再红摇 陈团团(齐齐哈尔医学院附属第三医院神经内四科,黑龙江摇 齐齐哈尔摇 161000)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 研究基于 Fas/Fas 配体(FasL)信号通路探究调控微小 RNA(miR)鄄214鄄3p 对帕金森病模型大鼠的干预效果。方法摇 选取 36 只清洁级 SD 雄性大鼠,其中8 只为正常组,其余28 只建立帕金森病模型,建模成功24 只大鼠分为上调miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组各 8 只,各组脑组织中 miR鄄214鄄3p 表达采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,对各组步幅距离、悬挂时间进行观察,各组脑组织中炎症因子的表达采用酶联免疫吸附试验检测,采用 Western 印迹检测 Fas/FasL 信号通路相关蛋白表达。结果摇 与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组 miR鄄214鄄3p、甲状腺激素(TH)表达明显降低,Fas、FasL 表达明显升高(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 miR鄄214鄄3p、TH 表达较高,Fas、FasL 表达较低,下调 miR鄄214鄄3p 组 miR鄄214鄄3p、TH 表达较低,Fas、FasL 表达较高,差异有统计学意义(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 miR鄄214鄄3p、TH 表达较高,Fas、FasL 表达较低,差异有统计学意义(P0郾 05)。与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢、白细胞介素(IL)鄄1、IL鄄6 表达较高,步幅距离较小,悬挂时间较短,差异有统计学意义(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达较低,步幅距离较大,悬挂时间较长,下调 miR鄄214鄄3p 组步 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达较高,幅距离较小,悬挂时间较短,差异有统计学意义(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达较低,步幅距离较大,悬挂时间较长,差异有统计学意义(P0郾 05)。结论摇 上调 miR鄄214鄄3p 可有效改善大鼠帕金森病,其作用机制可能与 Fas/FasL 通路有关。也关键词页摇 Fas/Fas 配体(FasL)信号通路;微小 RNA鄄214鄄3p;帕金森病也中图分类号页摇 R742郾 5摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4290鄄05;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 052基金项目:齐齐哈尔市科技局联合引导科技攻关项目(LHYD鄄2021074)第一作者:杜姝(1985鄄),女,硕士,主治医师,主要从事帕金森病研究。摇 摇 帕金森病(PD)属于慢性神经系统退行性疾病。多发于中老年,主要临床特征包括肌强直、静止性震颤、姿势反射障碍和运动迟缓也1,2页。miRNA 在多种细胞活动中有着重要地位,可以指导形成 miRNA鄄mRNA 诱导沉默复合体。近几年,在 PD 中 miRNA的作用引起重视,miR鄄214 与各种神经系统疾病密切相关也3,4页。目前的研究发现,miR鄄214 作为一种功能性的 miRNA,可以抑制海马神经元的自噬和凋亡,故而 miR鄄214鄄3p 的表达可能与 PD 具有一定的关系也5页。研究显示,Fas 配体(FasL)属于肿瘤坏死因子(TNF)家族一种细胞表面分子,与其受体 Fas结合,从而诱导 Fas 携带细胞凋亡也6页。目前 miR鄄214鄄3p 在 PD 中的相关研究较少,本研究采用 miR鄄214鄄3p 对 PD 模型大鼠进行干预,探究其临床指标及与 Fas/FasL 通路的关系。0924中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷1摇 资料与方法1郾 1摇一般资料摇选取 36 只清洁级 SD 雄性大鼠,8 12周龄;平均(9郾 50依1郾 90)周龄;体质量 180 230 g,平均(194郾 75依23郾 75)g,购自河南省动物实验中心,许可证号:SYXK(豫)2017鄄0002,大鼠均进行常规饲养,自由饮食、饮水,昼夜交替 12 h,湿度在50%左右,统一适应性喂养 1 w。1郾 2摇 PD 模型大鼠制备也7页摇 采取颈背部皮下注射鱼藤酮制备 PD 大鼠模型。28 只大鼠称体质量后逐日给予鱼藤酮 2 mg/kg 颈背部皮下注射,将大鼠行为变化分为 6 个等级计分。1 分为大鼠拒逮捕能力减弱,外表颜色变黄变脏,毛发垂直,弓背,主动活动能力减少;2 分为在 1 分大鼠基础上出现主动活动能力明显下降,动作迟缓、震颤、步态不稳;4 分为基于2 分大鼠行为,步态不稳定、不能直行、行走时向一侧旋转;6 分为单侧斜倚,单侧肢体瘫痪,进食困难;8 分为肢体完全瘫痪,体质量明显减轻,无法进食,四肢拘挛;10 分为濒死状态、死亡。造模后次日进行行为学评分,评分的环境与饲养环境一致,放置于具有干净垫料的大笼子中,待大鼠适应新环境后,记录大鼠行为学特征并评分。行为学评分 2 8 分的大鼠为造模成功,共 24 只大鼠建模成功。1郾 3摇 分组及干预摇 将建模成功的 24 只大鼠随机分为上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组各 8 只,未行建模的 8 只正常大鼠为正常组,下调miR鄄214鄄3p组 腹 腔 注 射antagomiR鄄214鄄3p30 mg/kg进行干预。上调 miR鄄214鄄3p 组腹腔注射miR鄄214鄄3p 30 mg/kg,正常组、模型组腹腔注射等量生理盐水进行干预。1郾 4摇 步幅距离测量摇 正式步幅试验前,大鼠先行步幅训练 3 次。装置:木盒子长 22 cm,宽 18 cm,高12 cm;跑道长 44 cm,宽5 cm,高10 cm,将跑道穿过木盒。大鼠前爪涂上黑墨水,跑道上放上白纸,宽5 cm,长 44 cm,在放有白纸的跑道上行走,穿过盒子,记录大鼠在白纸上遗留前爪印记前后间的距离,选取 3 个最长距离,记录。重复测量 3 次。1郾 5摇 悬挂时间测定摇 正式悬挂开始前,大鼠先行悬挂训练 3 次。悬挂于直径约 3 mm 水平铁线上,正常大鼠将前爪悬挂于该铁丝上,肌力越大且越持久悬挂时间越长,放置软垫防止大鼠摔伤。大鼠不能翻坐于铁线,通过前爪悬挂于铁线上,记录抓铁丝线时间,重复检测 3 次,每次检测间隔 2 min 以防大鼠疲惫。1郾 6摇各组前额叶皮层苏木素鄄伊红(HE)染色摇大鼠麻醉后,断头取脑,脑组织放置冰盘,取前额叶皮层组织,予 0郾 9%氯化钠溶液洗净组织中血液,吸干,于 EP 管中,-80 益保存备用。组织块固定在切片机标本固定架上,暴露组织最大切面,4 滋m 的厚度切片。恒温水浴锅内展平裱片,烘片2 6 h,依次浸入二甲苯玉、二甲苯域脱蜡15 min,完成后依次浸入 100%玉、100%域、95%玉、95%域、90%、80%、70%乙醇溶液中各5 min,后置于蒸馏水中。置于苏木素液中染色 20 min,洗去苏木素液,将切片浸入1%盐酸乙醇溶液中,再水洗后流水返蓝30 min。伊红液中染色 30 s 水洗,以与入水相反顺序乙醇溶液脱水,浸入二甲苯中3 min,中性树胶封片,阴凉处晾干。置于光学显微镜下观察各组前额叶皮层部位组织切片。1郾 7摇 miR鄄214鄄3p 表达检测摇脑组织中 miR鄄214鄄3p的表达采用荧光定量鄄聚合酶链反应(PCR)检测,取大鼠脑组织,Trizol 试剂提取总 RNA,逆转录合成cDNA。加入 PCR 引物,进行 qPCR 扩增反应,反应条件:94 益预变性 30 s;94 益 变性 10 s,64 益 退火30 s,72 益延伸 30 s,共 30 个循环。U6 为内参照,应用凝胶成像系统(Bio鄄Rad)摄影,Quantity One 软件进行扫描分析,计算采用 2-驻驻Ct法。引物序列为:miR鄄214鄄3p 上游 5忆鄄CAGCAGGCACAGACAGGC鄄3忆,下游 5忆鄄CTATGTCCTCACCGZZCGCAACC鄄3忆;U6 上游 5忆鄄CTCGCTTCGGCAGCACA鄄3忆,下游 5忆鄄AACGCT鄄TCACGAATTTGCGT鄄3忆。1郾 8摇大鼠炎症因子检测摇酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织中白细胞介素(IL)鄄1、IL鄄6 和肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢 的水平,取大鼠脑组织进行组织匀浆,4 益离心后收集上清液,应用 IL鄄1、TNF鄄琢和 IL鄄6 ELISA 检测试剂盒测定上清液中 IL鄄1茁、TNF鄄琢 和 IL鄄6 的水平,按照试剂盒说明书进行具体步骤操作。1郾 9摇 Western 印迹检测 Fas/FasL 信号通路相关蛋白表 达 摇取 出 脑 组 织,对 每 块 进 行 称 重 后 按12郾 5 滋l/mg加 入 组 织 裂 解 液,充 分 研 磨,静 置30 min,4 益 12 000 r/min 离心15 min,抽取上清液,加热 10 min。-80 益冰箱保存,十二烷基硫酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS鄄PAGE),转膜。5%脱脂牛奶封闭 1 h,加入封闭液稀释的 Fas(1 颐1 000)、FasL(1 颐1 000)、甲状腺激素(TH,1 颐1 000)抗体,4 益孵育过夜。PBST 洗涤 3 次,加入标记的二抗,室温孵育 1 h,PBST 洗涤 3 次,电化学发光(ECL)显影。1郾 10摇 统计学处理摇采用 SPSS26郾 0 软件进行齐性方差分析、独立样本 t 检验。1924杜姝等摇 基于 Fas/FasL 信号通路探究调控 miR鄄214鄄3p 对帕金森病大鼠的干预效果 摇 第 17 期2摇 结摇 果2郾 1摇 各组 miR鄄214鄄3p 表达比较摇与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组miR鄄214鄄3p 表达明显降低(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 miR鄄214鄄3p 表达明显升高,下调 miR鄄214鄄3p 组 miR鄄214鄄3p 表达明显降低(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p组 miR鄄214鄄3p 表达明显升高(P0郾 05)。见表 1。2郾 2摇 miR鄄214鄄3p 对各组步幅距离、悬挂时间的影响摇与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组步幅距离明显缩短,悬挂时间明显减少(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p组步幅距离明显变长,悬挂时间明显增加,下调miR鄄214鄄3p 组步幅距离明显缩短,悬挂时间明显减少(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组步幅距离明显变长,悬挂时间明显增加(P0郾 05)。见表 1。2郾 3摇miR鄄214鄄3p 对各组脑组织炎症因子的影响摇与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达明显升高(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达明显降低,下调 miR鄄214鄄3p 组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达明显升高(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 TNF鄄琢、IL鄄1、IL鄄6 表达明显降低(P0郾 05)。见表 1。表 1摇 各组 miR鄄214鄄3p 表达、步幅距离、悬挂时间、脑组织中炎症因子比较(x依s,n=8)组别miR鄄214鄄3p步幅距离(cm)悬挂时间(s)TNF鄄琢(滋g/L)IL鄄1(滋g/L)IL鄄6(滋g/L)下调 miR鄄214鄄3p 组0郾 52依0郾 131)2)8郾 89依1郾 181)2)2郾 15依0郾 981)2)4郾 85依1郾 061)2)1郾 26依0郾 471)2)1郾 62依0郾 411)2)模型组0郾 71依0郾 361)10郾 65依1郾 141)3郾 51依0郾 711)3郾 95依0郾 781)0郾 97依0郾 281)1郾 49依0郾 251)上调 miR鄄214鄄3p 组1郾 49依0郾 281)2)3)12郾 58依1郾 361)2)3)8郾 01依2郾 281)2)3)2郾 95依0郾 671)2)3)0郾 88依0郾 151)2)3)1郾 32依0郾 351)2)3)正常组2郾 15依0郾 5413郾 95依1郾 898郾 79依2郾 262郾 16依0郾 350郾 65依0郾 141郾 21依0郾 26F/P 值12郾 452/0郾 0019郾 634/0郾 00111郾 436/0郾 00110郾 224/0郾 0015郾 277/0郾 0023郾 584/0郾 021摇 与正常组比较:1)P0郾 05;与模型组比较:2)P0郾 05;与下调 miR鄄214鄄3p 组比较:3)P0郾 05;表 2 同2郾 4摇 各组前额叶皮层 HE 染色摇正常组前额叶皮层区域神经元分布紧密,数量正常,排列整齐,形态较为规整,胞体轮廓清晰,大而圆,空泡变性较少;模型组前额叶皮层区域神经元细胞则较正常组数量较少、排列散裂、胞体轮廓较模糊,胞核固缩与空泡变性较多;下调 miR鄄214鄄3p 组前额叶皮层区域神经元细胞数量减少、排列疏松、胞体模糊,胞核固缩与空泡变性增多,上调 miR鄄214鄄3p 组前额叶皮层部位神经元细胞数有所增加,细胞整体形态与排列情况改善显著。见图 1。2郾 5摇miR鄄214鄄3p 对 PD 模型大鼠 Fas/FasL 信号通路相关蛋白的影响摇与正常组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组、下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组 Fas、FasL 表达较高,TH 表达较低,差异有统计学意义(P0郾 05);与模型组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组 Fas、FasL 表达较低,TH 表达较高,下调 miR鄄214鄄3p 组 Fas、FasL 表达较高,TH 表达较低,差异有统计学意义(P0郾 05);与下调 miR鄄214鄄3p 组相比,上调 miR鄄214鄄3p 组Fas、FasL 表达较低,TH 表达较高,差异有统计学意义(P0郾 05)。见表 2、图 2。图 1摇 各组前额叶皮层变化(HE 染色,伊400)2924中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷表 2摇 miR鄄214鄄3p 对 PD 模型大鼠 Fas/FasL通路蛋白的影响(x依s,n=8)组别FasFasLTH下调 miR鄄214鄄3p 组 1郾 83依0郾 451)2)1郾 53依0郾 411)2)0郾 43依0郾 111)2)模型组1郾 46依0郾 371郾 36依0郾 390郾 72依0郾 18上调 miR鄄214鄄3p 组0郾 83依0郾 211)2)3)0郾 75依0郾 241)2)3)1郾 28依0郾 241)2)3)正常组0郾 44依0郾 120郾 47依0郾 111郾 61依0郾 42F/P 值12郾 663/0郾 00110郾 595/0郾 00111郾 531/0郾 0011 4:下调 miR鄄214鄄3p 组、模型组、上调 miR鄄214鄄3p 组、正常组图 2摇 各组 Fas/FasL 通路蛋白表达3摇 讨摇 论摇 摇 目前,尚未明了 PD 的致病机制,成功的动物模型制备不仅能够为研究提供良好基础,且可以明确疾病的发病机制也8 10页。miRNA 在神经系统中表达丰富,具有明显的组织和细胞特异性,多个 miRNA 均与 PD 的发生相关,可能参与并调节 PD 的发病机制。据报道,miR鄄NA 调节的相关系统炎症反应机制也成为 PD 发病机制研究重点,胶质细胞激活及炎性过程均能对 PD的发病和进展起到促进作用也11 12页。miR鄄214鄄3p 在多种肿瘤发生发展中具有重要地位,范文秀等也13页研究显示,miR鄄214鄄3p 的表达可能与卵巢癌的发生、发展有关,故 miR鄄214鄄3p 的表达应该引起相应的重视,以促进早期干预,为生物治疗提供新靶点,阻止病情的发展。步幅试验是评价 PD 动物模型四肢运动障碍程度的方法,可检测实验动物运动能力,悬挂试验评价 PD 模型动物在姿势平衡障碍的程度,因此本研究对 PD 模型大鼠采用步幅试验与悬挂试验的进行评价,以侧面反映 PD 模型大鼠脑部多巴胺能神经元细胞丢失程度也14页。本文研究显示,上调miR鄄214鄄3p 表达,可有效改善 PD 模型大鼠步幅距离、悬挂时间,侧面反映 miR鄄214鄄3p 上调可有效改善神经及运动功能。在 PD 患者脑内过度的激活引起的神经元丢失及 TNF鄄琢 等炎症因子的增加。在 PD 动物模型的中同样有研究发现,小胶质细胞分泌 TNF鄄琢 引起后续的炎症反应,而抑制小胶质细胞的激活并减少 TNF鄄琢 的分泌,可以进一步防止神经元的损失也15页。研究表明,在雄性大鼠注射脂多糖,可以产生 IL鄄1,IL鄄6 等激活的小胶质细胞,介质的过度释放会导 致 PD。抑 制 促 炎 分 子 可 阻 止 PD 的 进展也16页。说明在 PD 的病情发生发展中,炎症因子引起的神经炎症反应发挥着决定性的作用。本研究显示,上调 miR鄄214鄄3p 表达可显著改善 PD 大鼠TNF鄄琢、IL鄄6、IL鄄1 表达,通过抑制促炎性细胞因子与程序性黑质的神经元死亡的关系,降低细胞毒性作用,促进神经元恢复。Fas 是属于 TNF 受体超家族成员的一种跨膜蛋白,它与 FasL 结合诱导 Fas 自身的三聚化,然后在细胞膜上形成凋亡诱导复合物。同时,Fas鄄FasL 系统可自行执行 Fas 介导的凋亡,从而下调免疫应答也17,18页。研究发现,Fas/FasL 配体相互作用,以自主的方式诱导炎症细胞死亡。Fas 通路不仅是重要的凋亡通路,而且与肿瘤发生发展密切相关也19页。本文研究显示,miR鄄214鄄3p 可靶向调控凋亡通路,改善相关蛋白表达,引起细胞骨架重塑和突触形成,诱导细胞分泌金属基质酶,凋亡敏感性增强,有利于机体清除病毒感染的细胞也20页,提示上调 miR鄄214鄄3p改善 PD 的作用机制可能与 Fas/FasL 信号通路有关。综上,miR鄄214鄄3p 上调对 PD 大鼠神经功能可有效改善,降低炎症因子,其作用机制可能与 Fas/FasL 信号通路有关。4摇 参考文献1摇Jankovic J,Tan EK郾 Parkinson忆s disease:etiopathogenesis and treat鄄ment也J页.J Neurol Neurosurg Psychiatry,2020;91(8):795鄄808郾2摇 Khan AU,Akram M,Daniyal M,et al郾 Awareness and current knowl鄄edge of Parkinson忆s disease:a neurodegenerative disorder也J页.Int JNeurosci,2019;129(1):55鄄93郾3摇 刘金泉,孙永胜,刘春云 郾 miR鄄34a 通过靶向 SIRT1 对 MPP+诱导的帕金森病模型细胞凋亡和氧化应激损伤的影响也J页.中国免疫学杂志,2020;36(6):647鄄52,657郾4摇 彭秀华,柳明杰 郾 miR鄄486鄄5p 靶向 TRPM2 对帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响也J页.中国老年学杂志,2021;41(1):115鄄22郾5摇 曹春 郾 慢性心力衰竭患者血浆外泌体 miR鄄214鄄3p 和 miR鄄184 的表达及意义也J页.河北医药,2021;43(2):246鄄9郾6摇 王宜平,周鹏飞,叶正钦,等 郾 二烯丙基二硫化物诱导 MDCC鄄MSB鄄1 细胞的凋亡及 Fas/FasL 信号通路调控作用也J页.动物医学进展,2021;42(8):7鄄13郾7摇 黄世明,岳建兰,尹亮,等 郾 帕金森病模型大鼠纹状体 11C鄄CFTmicroPET/CT 多巴胺转运蛋白显像与中脑黑质多巴胺能神经元受损的相关性研究 也J页.中华核医学与分子影像杂志,2021;41(5):291鄄5郾8摇 Cabreira V,Massano J郾 Parkinson忆s disease:clinical review and update3924杜姝等摇 基于 Fas/FasL 信号通路探究调控 miR鄄214鄄3p 对帕金森病大鼠的干预效果 摇 第 17 期也J页.Acta Med Port,2019;32(10):661鄄70郾9摇 Reich SG,Savitt JM郾 Parkinson忆s disease也J页.Med Clin North Am,2019;103(2):337鄄50郾10摇 Simon DK,Tanner CM,Brundin P郾 Parkinson disease epidemiology,pathology,genetics,and pathophysiology 也 J页.Clin Geriatr Med,2020;36(1):1鄄12郾11摇 章红妍,刘全颖,许梦秋,等 郾 帕金森病患者血清微小 RNA鄄128、221 的表达水平变化及其临床意义也J页.卒中与神经疾病,2020;27(6):778鄄81,808郾12摇 陈红利,梁会娟,李燕 郾 黄连碱上调 miR鄄146a鄄5p 后通过 PI3K/AKT 通路减轻由 MPP+诱导的帕金森病细胞模型损伤也J页.中华神经医学杂志,2020;19(1):2鄄8郾13摇 范文秀,马思晨,张亚洁,等 郾 miR鄄214鄄3P 在卵巢癌中的表达及临床意义也J页.医学研究杂志,2021;50(3):95鄄9郾14摇 陈乃洁,钟佳男,唐岚芳,等 郾 松果菊苷对帕金森病模型大鼠纹状体 GRP78 及 MANF 表达的影响也J页.中西医结合心脑血管病杂志,2020;18(2):244鄄6郾15摇 许吉怡,赵程,王铁山,等 郾 T 细胞相关炎症因子在帕金森病发病中的作用也J页.中国神经免疫学和神经病学杂志,2021;28(2):131鄄3,145郾16摇 王倩,秦伟伟,龙治华,等 郾 帕金森病患者血清 Cys C 与炎症因子氧化应激反应的关系也J页.中国实用神经疾病杂志,2019;22(2):149鄄53郾17摇 焦晓路,何秀萍 郾 PI3K/AKT 及 FAS/FASL 信号通路在卵巢癌中作用研究进展也J页.中国生育健康杂志,2020;31(6):596鄄9郾18摇 朱垠,郑浩轩 郾 Fas/FasL 信号通路对大肠癌恶性生物学特性的影响也J页.现代消化及介入诊疗,2020;25(8):989鄄93郾19摇 王玉玲,高华,蒋森,等 郾 Fas/FasL 信号通路与帕金森病大鼠多巴胺能神经元的相关性研究也J页.实用心脑肺血管病杂志,2020;28(4):82鄄5郾20摇 李艳,黄萱,肖兰,等 郾 miR鄄214鄄3p 对人卵巢癌细胞顺铂耐药及EGR1 表达的影响也J页.安徽医科大学学报,2020;55(10):1525鄄9郾也2022鄄06鄄19 修回页(编辑摇 张艳利)基于 TLR4/NF鄄资B 通路探究调控 MIP鄄2 对肺炎老龄大鼠的干预效果鲍敏摇 甄海宁摇 何芳摇 丁敏摇 林玫摇 袁竹青摇 陈亚隽摇 薛欣欣(武汉市第三医院呼吸与危重症医学科,湖北摇 武汉摇 430060)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 分析基于 Toll 样受体(TLR)4/核转录因子(NF)鄄资B 通路探究调控巨噬细胞炎症蛋白(MIP)鄄2 对肺炎老龄大鼠的干预效果。方法摇 选取 60 只健康雄性老龄大鼠,随机选取 15 只作为健康组,其余 45 只大鼠采用气管插管法制备肺炎老龄大鼠模型,最终 43 只老龄大鼠建模成功,随机分为模型组 15 只,上调组、下调组各 14 只。建模后上调组注射含10 滋l MIP鄄2 的上调慢病毒悬液,下调组注射 10 滋l MIP鄄2 的下调慢病毒悬液。空白组、模型组不做处理,1 w 后观察各组老龄大鼠变化。鉴定 MIP鄄2 转染效率,对比各组肺系数、肺含水量,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(IL)鄄6、IL鄄1茁、肿瘤坏死因子(TNF)鄄琢 水平,流式细胞仪检测 CD3+、CD4+、CD8+水平,Western 印迹法检测 TLR4/NF鄄资B 通路蛋白相对表达量。结果摇 与模型组比较,上调组 MIP鄄2 表达、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白、肺系数、肺含水量较高,CD3+、CD4+水平较低,差异有统计学意义(P0郾 05);下调组肺系数、肺含水量、MIP鄄2 表达、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白表达较低,CD3+、CD4+水平较高,差异有统计学意义(P0郾 05);与上调组比较,下调组 CD3+、CD4+水平较高,肺系数、肺含水量、IL鄄6、IL鄄1茁、TNF鄄琢、CD8+水平、TLR4、NF鄄资B 蛋白表达量较低,差异有统计学意义(P0郾 05)。结论摇 下调 MIP鄄2 干预肺炎老龄大鼠,肺系数、肺含水量减轻,炎症反应改善,免疫功能提升,TLR4/NF鄄资B 通路蛋白得到调控,进而肺炎严重程度减轻,起到肺保护作用。也关键词页摇 肺炎;Toll 样受体 4;核转录因子鄄资B;巨噬细胞炎症蛋白鄄2;肺系数;炎症反应也中图分类号页摇 R563郾 1摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4294鄄05;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 053基金项目:武汉市医学科研项目(No.WX19C06)第一作者:鲍敏(1972鄄),女,硕士,副主任医师,主要从事肺损伤研究。摇 摇 老年肺炎首发症状为呼吸困难、嗜睡、脱水等,严重危害老年人健康也1 4页。相关统计显示,肺炎在各种致死病因中居第 5 位,而在老年人中致死率高居首位,因此,提高该疾病检出率,及早作出针对治疗,可提高临床疗效,减少死亡率,改善预后也5 7页。临床研究认为,肺炎的发生与多种因素相关,巨噬细胞炎症蛋白(MIP)鄄2 在肺炎发病过程中起重要作用,MIP鄄2 属于趋化因子家族成员,可活化中性粒细胞参与炎症反应,其被证实与肺炎发病相关也8,9页。本研究建立肺炎老龄大鼠模型,分析下调 MIP鄄2 对肺炎老龄大鼠 Toll 样受体(TLR)4/核转录因子(NF)鄄资B 信号通路的影响,明确 MIP鄄2 是否经TLR4/NF鄄资B 信号通路参与该病的发生发展。4924中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷