巨噬细胞吞噬.ppt

实验十一、实验十一、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察目的要求目的要求1 1 1 1、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程、熟悉并理解细胞吞噬活动的生理过程2 2 2 2、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法、掌握诱导产生小鼠腹腔巨噬细胞的方法实验用品实验用品 光学显微镜、光学显微镜、光学显微镜、光学显微镜、2ml2ml2ml2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、注射器、载玻片、盖玻片、解剖器械、1 1 1 1鸡红细胞液、小白鼠、鸡红细胞液、小白鼠、鸡红细胞液、小白鼠、鸡红细胞液、小白鼠、6 6 6 6淀粉肉汤淀粉肉汤淀粉肉汤淀粉肉汤(含台盼蓝含台盼蓝含台盼蓝含台盼蓝)、生理盐水、生理盐水、生理盐水、生理盐水试剂的配制：试剂的配制：试剂的配制：试剂的配制：6 6 6 6淀粉肉汤：称取牛肉膏淀粉肉汤：称取牛肉膏淀粉肉汤：称取牛肉膏淀粉肉汤：称取牛肉膏0.3g0.3g0.3g0.3g、蛋白胨、蛋白胨、蛋白胨、蛋白胨1.0g1.0g1.0g1.0g、氯化钠、氯化钠、氯化钠、氯化钠O.5gO.5gO.5gO.5g和和和和台盼蓝台盼蓝台盼蓝台盼蓝(trypan blue)0.3g(trypan blue)0.3g(trypan blue)0.3g(trypan blue)0.3g分别加入到分别加入到分别加入到分别加入到100ml100ml100ml100ml蒸馏水中溶解，蒸馏水中溶解，蒸馏水中溶解，蒸馏水中溶解，再加入可溶性淀粉再加入可溶性淀粉再加入可溶性淀粉再加入可溶性淀粉6g6g6g6g，混匀后煮沸灭菌，置，混匀后煮沸灭菌，置，混匀后煮沸灭菌，置，混匀后煮沸灭菌，置4444保存，使用时保存，使用时保存，使用时保存，使用时温浴溶解。温浴溶解。温浴溶解。温浴溶解。.实验原理实验原理 高高高高等等等等动动动动物物物物体体体体内内内内存存存存在在在在着着着着具具具具有有有有防防防防疫疫疫疫功功功功能能能能的的的的吞吞吞吞噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞系系系系统统统统，它它它它由由由由粒粒粒粒细细细细胞胞胞胞和和和和单单单单核核核核细细细细胞胞胞胞等等等等白白白白细细细细胞胞胞胞构构构构成成成成，是是是是机机机机体体体体免免免免疫疫疫疫系系系系统统统统的的的的重重重重要要要要组组组组成成成成部部部部分分分分。巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞是是是是体体体体内内内内的的的的一一一一种种种种重重重重要要要要的的的的免免免免疫疫疫疫细细细细胞胞胞胞，具具具具有有有有非非非非特特特特异异异异性性性性吞吞吞吞噬噬噬噬功功功功能能能能，当当当当机机机机体体体体受受受受到到到到细细细细菌菌菌菌等等等等病病病病原原原原体体体体及及及及其其其其它它它它异异异异物物物物侵侵侵侵入入入入时时时时，巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞将将将将向向向向病病病病原原原原体体体体或或或或异异异异物物物物游游游游走走走走，当当当当接接接接触触触触异异异异物物物物时时时时，伸伸伸伸出出出出伪伪伪伪足足足足将将将将其其其其包包包包围围围围并并并并进进进进行行行行内内内内吞吞吞吞作作作作用用用用，将将将将病病病病原原原原体体体体或或或或异异异异物物物物吞吞吞吞入入入入细细细细胞胞胞胞，形形形形成成成成吞吞吞吞噬噬噬噬泡泡泡泡，进进进进而而而而初初初初级级级级溶溶溶溶酶酶酶酶体体体体与与与与吞吞吞吞噬噬噬噬泡泡泡泡发发发发生生生生融融融融合合合合，将将将将异异异异物物物物消消消消化化化化分分分分解解解解掉掉掉掉。本本本本实实实实验验验验将将将将观观观观察察察察到到到到小小小小鼠鼠鼠鼠巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞对对对对进进进进入入入入其其其其体体体体内内内内的的的的鸡鸡鸡鸡血血血血红红红红细细细细胞胞胞胞进行吞噬的情况。进行吞噬的情况。进行吞噬的情况。进行吞噬的情况。.单核巨噬细胞单核巨噬细胞.实验内容和方法实验内容和方法实验内容和方法实验内容和方法(一一一一)标本制备标本制备标本制备标本制备1 1 1 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6 6 6 6淀粉肉汤淀粉肉汤淀粉肉汤淀粉肉汤(含含含含4 4 4 4的台盼蓝的台盼蓝的台盼蓝的台盼蓝)lml)lml)lml)lml。2 2 2 2、实验时、实验时、实验时、实验时每组取一只每组取一只每组取一只每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射经上述处理的小鼠，腹腔注射经上述处理的小鼠，腹腔注射经上述处理的小鼠，腹腔注射1 1 1 1的的的的鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液lmllmllmllml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分散。散。散。散。(腹腔注射时不要刺伤内脏腹腔注射时不要刺伤内脏腹腔注射时不要刺伤内脏腹腔注射时不要刺伤内脏)3 3 3 3、20202020分钟后向腹腔注射分钟后向腹腔注射分钟后向腹腔注射分钟后向腹腔注射0.5 ml0.5 ml0.5 ml0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部，生理盐水，轻揉小鼠腹部，生理盐水，轻揉小鼠腹部，生理盐水，轻揉小鼠腹部，使其腹腔液稀释。使其腹腔液稀释。使其腹腔液稀释。使其腹腔液稀释。3 3 3 3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。4 4 4 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。5 5 5 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，标本便制备好了。标本便制备好了。标本便制备好了。标本便制备好了。6 6 6 6、实验绘图。、实验绘图。、实验绘图。、实验绘图。.(二二二二)观察观察观察观察 巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞体体体体积积积积较较较较大大大大，呈呈呈呈圆圆圆圆形形形形或或或或不不不不规规规规则则则则形形形形，表表表表面面面面具具具具有有有有多多多多个个个个突突突突起起起起(伪伪伪伪足足足足)，胞胞胞胞质质质质中中中中含含含含有有有有数数数数量量量量不不不不等等等等、大大大大小小小小不不不不一一一一的的的的蓝蓝蓝蓝色色色色颗颗颗颗粒粒粒粒，它它它它们们们们是是是是细细细细胞胞胞胞吞吞吞吞噬噬噬噬含含含含台台台台盼盼盼盼蓝蓝蓝蓝的的的的淀粉肉汤后形成的吞噬体；淀粉肉汤后形成的吞噬体；淀粉肉汤后形成的吞噬体；淀粉肉汤后形成的吞噬体；鸡鸡鸡鸡红红红红细细细细胞胞胞胞呈呈呈呈椭椭椭椭圆圆圆圆形形形形，淡淡淡淡黄黄黄黄色色色色，具具具具椭椭椭椭圆圆圆圆形形形形的的的的细细细细胞胞胞胞核。核。核。核。在在在在视视视视野野野野中中中中仔仔仔仔细细细细寻寻寻寻找找找找巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞吞吞吞吞噬噬噬噬鸡鸡鸡鸡红红红红细细细细胞胞胞胞的的的的不不不不同同同同阶阶阶阶段段段段。有有有有的的的的鸡鸡鸡鸡红红红红细细细细胞胞胞胞紧紧紧紧贴贴贴贴在在在在巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞表表表表面面面面；有有有有的的的的红红红红细细细细胞胞胞胞已已已已部部部部分分分分被被被被吞吞吞吞入入入入；有有有有的的的的巨巨巨巨噬噬噬噬细细细细胞胞胞胞已已已已吞吞吞吞入入入入1 1 1 1个个个个或或或或多多多多个个个个红红红红细细细细胞胞胞胞，形形形形成成成成了了了了吞吞吞吞噬噬噬噬泡泡泡泡。还还还还可可可可见见见见有有有有的的的的吞吞吞吞噬噬噬噬泡泡泡泡体体体体积积积积已已已已缩缩缩缩小小小小并并并并呈呈呈呈圆圆圆圆形形形形，这这这这说说说说明明明明该该该该吞吞吞吞噬噬噬噬泡泡泡泡已已已已与与与与溶溶溶溶酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。酶体发生融合，泡内的物质正在消化分解。.腹腔注射腹腔注射捉拿方法捉拿方法捉拿方法捉拿方法：将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。给药方法给药方法给药方法给药方法：小白鼠的给药途径有经口给药、小白鼠的给药途径有经口给药、小白鼠的给药途径有经口给药、小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射腹腔内注射腹腔内注射腹腔内注射、尾静、尾静、尾静、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如如如如前所述前所述前所述前所述)，在其腹正中线稍外侧，在其腹正中线稍外侧，在其腹正中线稍外侧，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管避开膀胱和血管避开膀胱和血管避开膀胱和血管)用用用用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针进针进针进针1 1 1 12mm2mm2mm2mm后，再以后，再以后，再以后，再以45454545角刺穿腹部肌肉而进入腹角刺穿腹部肌肉而进入腹角刺穿腹部肌肉而进入腹角刺穿腹部肌肉而进入腹腔腔腔腔(刺穿腹肌时有一落空感刺穿腹肌时有一落空感刺穿腹肌时有一落空感刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿针头刺入腹腔后切勿针头刺入腹腔后切勿针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏左右摆动，以免损伤肠管或肝脏左右摆动，以免损伤肠管或肝脏左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的。注意每次注入的。注意每次注入的。注意每次注入的液体量应为液体量应为液体量应为液体量应为0.10.10.10.10.2ml0.2ml0.2ml0.2ml10101010克体重。克体重。克体重。克体重。.思考题思考题计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。吞噬率吞噬率吞噬率吞噬率%=%=%=%=（吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞100100100100个巨噬细胞个巨噬细胞个巨噬细胞个巨噬细胞）100%100%100%100%吞噬指数吞噬指数吞噬指数吞噬指数=100=100=100=100个巨噬细胞中吞噬鸡血红细胞的总数个巨噬细胞中吞噬鸡血红细胞的总数个巨噬细胞中吞噬鸡血红细胞的总数个巨噬细胞中吞噬鸡血红细胞的总数100100100100个吞个吞个吞个吞噬鸡血红细胞的巨噬细胞噬鸡血红细胞的巨噬细胞噬鸡血红细胞的巨噬细胞噬鸡血红细胞的巨噬细胞 .