黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力及肺功能的影响及其机制.pdf

深圳中西医结合杂志 2023 年 7 月第 33 卷第 14 期 5 文章编号 1007-0893(2023)14-0005-04 DOI：10.16458/ki.1007-0893.2023.14.002黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力 及肺功能的影响及其机制林浩龙凯琴（雅安职业技术学院，四川 雅安 625100）摘要目的：研究黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力及肺功能的影响及其机制。方法：采用卵清蛋白法建立支气管哮喘 BALB/c 小鼠模型，分为低剂量黄芪提取物处理组（L-ASE 组，采用 5 mgmL-1黄芪提取物灌胃）、高剂量黄芪提取物处理组（H-ASE 组，采用 10 mgmL-1黄芪提取物灌胃），选择建模成功支气管哮喘小鼠模型为模型组，选择正常小鼠为对照组。检查并比较四组小鼠 2 min 咳嗽次数、特殊气道阻力（sRaw）、气道阻力（RI）、潮气量（TV）、每分钟通气量（MV）、静态肺顺应性（Cst）、血清肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-1（IL-1）、IL-6 水平差异。结果：模型组小鼠 2 min 咳嗽次数、0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、Cst、血清 TNF-、IL-1、IL-6 水平显著高于对照组，TV 和 MV 显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。L-ASE组和 H-ASE 组小鼠 2 min 咳嗽次数、0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、Cst、血清TNF-、IL-1、IL-6水平显著低于模型组，TV和MV显著高于模型组，差异均具有统计学意义（P0.05）。H-ASE组 2 min 小鼠咳嗽次数、0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、Cst、血清TNF-、IL-1、IL-6 水平显著低于 L-ASE 组，TV 和 MV 显著高于 L-ASE 组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。结论：黄芪提取物可显著改善支气管小鼠气道阻力和肺功能，其机制可能与下调支气管哮喘小鼠炎症反应有关。关键词支气管哮喘；黄芪提取物；动物实验；小鼠中图分类号 R 562.2+5 文献标识码 AEffects of Astragalus Extract on Airway Resistance and Lung Function in Mice with Bronchial Asthma and its MechanismLIN Hao,LONG Kaiqin(Yaan Polytechnic College,Sichuan Yaan 625100)AbstractObjectiveTo study the effect and mechanism of astragalus extract on airway resistance and lung function in mice with 收稿日期2023-05-05基金项目雅安市科技计划项目（2018yyjskf19）作者简介林浩，男，副教授，主要研究方向是药理学与临床药物治疗学。（4）：23-259 潘利妞，张伟宏，余珍，等郑州市社区老年人认知衰弱患病现状及影响因素J护理学杂志，2019，34（11）：79-8210 韩君，王君俏，王悦，等75 岁及以上社区老年人身体衰弱与认知功能现状及相关性分析J复旦学报（医学版），2021，48（4）：494-502，54411 李岚君，呼日勒特木尔老年衰弱综合征标志物研究进展世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊），2020，20（85）：99-10112 GUTIERREZ-ROBLEDO L M，VILA-FUNES J A，AMIEVA H，et alAssociation of low serum 25-hydroxyvitamin D levels with the frailty syndrome in Mexican community-dwelling elderlyJAging Male，2016，19（1）：58-6313 戴靖榕，李婕，何旭，等评估老年衰弱相关血清生物学标志物的研究进展J基础医学与临床，2022，42（4）：646-65014 施红，孟丽，石婧，等老年人衰弱与血液生物指标的关系研究J中华老年医学杂志，2018，37（12）：1383-138615 崔光辉，李少杰，尹永田，等济南市社区老年人中医体质类型与衰弱综合征的关联性分析J中医药导报，2021，27（1）：178-181Shenzhen Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine July 2023 Vol.33.No.14 6 支气管哮喘与炎症反应、基因调控及神经调节有关，各种因素损伤支气管黏膜上皮导致气管炎症因子激活及炎症细胞浸润，产生气道重塑而导致气道高反应性最终产生哮喘，调控炎症反应为支气管哮喘的主要治疗方法1。黄芪提取物包含皂苷、黄酮、多糖等多种活性成分，发现黄芪提取物具有调控炎症反应等功能，对支气管哮喘气道炎症反应具有改善功能，为支气管哮喘潜在的治疗药物2。本研究旨在探讨黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力及肺功能的影响及其机制。1材料与方法1.1主要仪器与试剂黄芪提取物购自南京春秋生物公司（纯度99%以上）。卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）、氢氧化铝、乌拉坦购自北京天根公司，肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）、白细胞介素 6（interleukin6，IL6）、IL10检测试剂盒购自上海碧云天公司。eSpira FM System 动物肺功能检测仪购自上海玉研科学仪器公司。无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级别 BALB/c 小鼠 6 7 周龄，体质量（21.0 3.0 g购自四川普莱美行之公司许可证号 SYXK（川）2021203。黄芪提取物 采用0.9%氯化钠溶液配置成10 mgmL-1后行后续实验。1.2方法1.2.1支气管哮喘小鼠模型建立及分组根据杨丰鹤等3方法建立支气管哮喘小鼠模型。适用性饲养1周后 小鼠建立支气管哮喘模型，取 OVA 10 mg 溶于 0.9%氯化钠溶液 1 mL 中，加入等体积氢氧化铝制成致敏液，取 OVA 10 mg 溶于 0.9%氯化钠溶液 10 mL 中制成质量浓度为 10 gL-1的激发液，于第 1 天和第 8 天小鼠腹腔注射致敏液 1 mL，第 15 天开始雾化吸入激发液，5 mLmin-1，30 min 次-1，1 次d-1，共 4 周，以 小鼠出现喘息、气促、口唇发绀和站立不稳等表现为建模成功。建模成功小鼠模型给予低剂量黄芪提取物处理组（LASE 组，采用 10 mgmL-1黄芪提取物灌胃）、高剂量黄芪提取物处理组（HASE 组，采用 5 mgmL-1黄芪提取物灌胃），另选择建模成功小鼠模型给予 0.9%氯化钠溶液处理（模型组）及正常小鼠为对照（对照组，仅行 0.9%氯化钠溶液灌胃），四组小鼠每次 2 mL 灌胃，2 次d-1，连续处理 14 d。每组均设置 9 只小鼠进行实验。本研究动物实验遵守国际公认 3R 原则。1.2.2检测指标及方法LASE 组、HASE 组、模型组及对照组小鼠均检测以下指标，（1）咳嗽敏感性检测：采用辣椒素溶液对小鼠诱导咳嗽，观察 2 min内小鼠咳嗽次数；（2）特殊气道阻力检测：将小鼠置入双通道动物无创气道检测系统中测量特殊气道阻力（specific airway resistance，sRaw），采用 0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱溶液处理，记录吸入不同浓度乙酰甲胆碱溶液后 3 min内 sRaw；（3）肺功能：采用动物肺功能检测仪检测，包括气道阻力（airway resistance，RI）、潮气量（tidal volume，TV）、每分钟通气量（minute ventilation，MV）、静态肺顺应性（static lung compliance，Cst）；（4）炎症 因子及 T 淋巴细胞检测：各组小鼠消毒后乌拉坦麻醉，取鼠尾静脉血2 mL检测血清炎症因子水平，包括TNF、IL1、IL6，检测方法为酶联免疫吸附法。bronchial asthma.MethodsA BALB/c mouse model of bronchial asthma was established by the ovalbumin method,and divided into a low-dose astragalus extract treatment group(L-ASE group,administered with 5 mgmL-1 astragalus extract)and a high-dose astragalus extract treatment group(H-ASE group,administered with 5 mgmL-1 astragalus extract).The successful bronchial asthma mouse model was selected as the model group,and normal mice were selected as the control group.The 2-min cough times,specific airway resistance(sRaw),airway resistance(RI),tidal volume(TV),minute ventilation(MV),static lung compliance(Cst),the levels of serum tumor necrosis factor-(TNF-),interleukin-1(IL-1),and IL-6 among the four groups of mice were checked and compared.ResultsThe cough times in 2 minutes,the levels of sRaw at concentrations of 0 mgmL-1,5 mgmL-1,10 mgmL-1,15 mgmL-1 of acetylcholine,RI,Cst,the levels of serum TNF-,IL-1,IL-6 in the model group were significantly higher than those in the control group,the levels of TV and MV were significantly lower than those in the control group,and the differences were statistically significant(P 0.05).The cough times in 2 minutes,the levels of sRaw at concentrations of 0 mgmL-1,5 mgmL-1,10 mgmL-1,15 mgmL-1 of acetylcholine,RI,Cst,the levels of serum TNF-,IL-1,IL-6 in L-ASE group and H-ASE group were significantly lower than those in the model group,the levels of TV and MV were significantly higher than those in the model group,and the differences were statistically significant(P 0.05).The cough times in 2 minutes,the levels of sRaw at concentrations of 0 mgmL-1,5 mgmL-1,10 mgmL-1,15 mgmL-1 of acetylcholine,RI,Cst,the levels of serum TNF-,IL-1,IL-6 in HASE group were significantly lower than those in the L-ASE group,the levels of TV and MV were significantly higher than those in the L-ASE group,and the differences were statistically significant(P 0.05).ConclusionAstragalus extract can significantly improve the airway resistance and lung function of bronchial asthma mice,and the mechanism may be related to the down-regulation of inflammatory response in bronchial mice.KeywordsBronchial asthma;Astragalus extract;Animal experiment深圳中西医结合杂志 2023 年 7 月第 33 卷第 14 期 7 1.3统计学方法采用 SPSS 19.0 软件进行数据处理，计量资料以sx表示，多组间比较采用单因素方差分析（组间两两比较采用 SNK 检验），计数资料用百分比表示，采用 2 检验，P 0.05 为差异具有统计学意义。2结果2.1各组小鼠 2 min 咳嗽次数比较模型组小鼠 2 min 咳嗽次数显著高于对照组，差异具有统计学意义（P 0.05）。LASE 组和 HASE 组小鼠 2 min 咳嗽次数显著低于模型组，差异具有统计学意义（P 0.05）。HASE 组小鼠 2 min 咳嗽次数显著低于 LASE 组，差异具有统计学意义（P 0.05），见表 1。表 1各组小鼠 2 min 咳嗽次数比较（n=9，sx）组别咳嗽次数/次对照组 6.7 1.2模型组14.3 1.5aLASE 组11.4 0.8bHASE 组 9.5 0.5bc注：与对照组比较，aP 0.05；与模型组比较，bP 0.05；与 LASE 组比较，cP 0.05。2.2各组小鼠不同乙酰甲胆碱浓度下 sRaw 比较模型组小鼠 0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw 显著高于对照组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。LASE 组和 HASE 组 小 鼠 0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw 显著低于模型组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。HASE 组小鼠 0 mgmL-1、5 mgmL-1、10 mgmL-1、15 mgmL-1浓度乙酰甲胆碱时 sRaw 显著低于 LASE 组，差异均具有统计学意义（P 0.05），见表 2。表 2各组小鼠不同乙酰甲胆碱浓度下 sRaw 比较（n=9，sx，cmH2Os-1）组别0 mgmL-15 mgmL-110 mgmL-115 mgmL-1对照组3.5 0.36.1 0.57.2 0.6 9.7 0.8模型组 4.6 0.5d 7.9 0.8d 9.1 0.9d 12.6 1.1dLASE 组 4.2 0.4e 7.2 0.5e 8.4 0.8e11.9 0.9eHASE 组 3.8 0.3ef 6.8 0.4ef 7.7 0.6ef 10.5 0.8ef注：注：sRaw 特殊气道阻力。与对照组比较，dP 0.05；与模型组比较，eP 0.05；与 LASE 组比较，fP 0.05。2.3各组小鼠肺功能比较模型组小鼠 RI 和 Cst 显著高于对照组，TV 和 MV显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。LASE 组和 HASE 组小鼠 RI 和 Cst 显著低于模型组，TV 和 MV 显著高于模型组，差异均具有统计学意义（P0.05）。HASE组小鼠RI和Cst显著低于LASE组，TV 和 MV 显著高于 LASE 组，差异均具有统计学意义（P 0.05），见表 3。表 3各组小鼠肺功能比较 （n=9，sx）组别RI/cmH2O mL-1s-1TV/mLMV/mLCst/mLcmH2O-1对照组0.2 0.15.6 0.6163.4 11.71.1 0.2模型组 0.6 0.1g 3.8 0.4g 134.1 8.2g 1.7 0.2gLASE 组 0.5 0.1h 4.2 0.4h 146.5 8.9h 1.5 0.2hHASE 组 0.4 0.1hi 4.6 0.4hi 151.2 9.3hi 1.3 0.2hi注：RI 气道阻力；TV 潮气量；MV 每分钟通气量；Cst 静态肺顺应性。与对照组比较，gP 0.05；与模型组比较，hP 0.05；与 LASE 组比较，iP 0.05。2.4各组小鼠血清炎症因子水平比较模型组小鼠血清 TNF、IL1、IL6 水平显著高于对照组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。LASE组和 HASE 组小鼠血清 TNF、IL1、IL6 水平显著低于模型组，差异均具有统计学意义（P 0.05）。HASE 组小鼠血清 TNF、IL1、IL6 水平显著低于 LASE 组，差异均具有统计学意义（P 0.05），见表 4。表 4各组小鼠血清炎症因子水平比较（n=9，sx，pgmL-1）组别TNFIL1IL6对照组3.1 0.41.5 0.32.1 0.4模型组 9.5 0.8j 8.4 0.6j 7.3 0.5jLASE 组 7.4 0.7k 5.7 0.6k 5.8 0.8kHASE 组 5.6 0.5kl 4.4 0.5kl 4.1 0.6kl注：TNF 肿瘤坏死因子；IL 白细胞介素。与对照组比较，jP 0.05；与模型组比较，kP 0.05；与 LASE 组比较，lP 0.05。3讨论支气管哮喘为一种由多种炎症因子和免疫细胞介导的以气道炎症、气道重塑及气道高反应性为特征的炎症性疾病，炎症反应参与哮喘的发生、发展及转归4-5。目前发现与哮喘相关的炎症因子包括 IL、白三烯及 TNF 等炎症介质，其中 IL 为白细胞及淋巴细胞间相互作用的炎症因子，可激活 NFB 等炎症相关信号通路而放大炎症反应6。IL6 及 IL1 为促炎因子，可诱导 Th2 细胞及诱导 B 细胞分泌免疫球蛋白 E（immunoglobulins E，IgE）增加，为诱导哮喘急性发作的重要因素7。TNF 主要由单核巨噬细胞及淋巴细胞产生，可调节机体内环境免疫平衡，研究发现哮喘患者 TNF 水平显著升高且与病情严重程度正相关8。本研究中，模型组、LASE 组 和HASE组小鼠血清TNF、IL1、IL6水平显著高于对照组，证实炎症因子与支气管哮喘发病机制的相关性。黄芪提取物为豆科植物黄芪的干燥根提取物，含有黄芪多糖等多种活性成分，研究发现黄芪提取物具有调Shenzhen Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine July 2023 Vol.33.No.14 8 控炎症反应及免疫功能等多种功能。李钦等9研究发现黄芪提取物可显著改善环磷酰胺所致免疫抑制模型大鼠的免疫功能。本研究中，低剂量和高剂量黄芪提取物均可显著改善支气管哮喘大鼠气道阻力、肺功能及血清TNF、IL1、IL6 水平，进一步研究显示该作用呈黄芪提取物剂量依赖性，表明黄芪提取物可显著改善支气管哮喘小鼠气道阻力和肺功能，其机制可能与下调支气管哮喘小鼠炎症反应有关。综上所述，黄芪提取物可显著改善支气管哮喘小鼠气道阻力和肺功能，其机制可能与下调支气管哮喘小鼠炎症反应有关，其具体分子机制有待于进一步研究。参考文献1 刘健支气管哮喘气道重塑机制的研究进展J中国现代医学杂志，2022，32（12）：51-542 朱学懿，魏颖，董竞成黄芪治疗支气管哮喘的药理作用研究述评J中国中医基础医学杂志，2021，27（1）：182-1853 杨丰鹤，高辉，高炜，等达比加群酯改善支气管哮喘小鼠模型气道重塑的机制 J 西北药学杂志，2020，35（5）：689-6954 杨一民，洪菲萍，石慧莉，等白三烯受体拮抗剂治疗支气管哮喘的药物基因组学研究进展J广西医学，2022，44（5）：548-5525 黄帅阳，崔红生，候丹，等PNECILC2 神经免疫通路在支气管哮喘中的研究进展J实用医学杂志，2022，38（1）：120-1246 李东楠，王海，邢鑫鑫支气管哮喘上皮 间质转化发生机制相关信号通路的研究进展J世界中西医结合杂志，2022，17（4）：843-8487 刘翠兰，冯琴，魏春艳支气管哮喘患儿血清 IgE、IL6、TNF 水平变化及其与肺炎支原体感染的相关性J中国实验诊断学，2021，25（8）：1126-11298 迪丽努尔乌甫尔，才开沙热力，海迪娅艾尔肯，等支气管哮喘合并抑郁症患者 IL17、IL6、TNF、5HT变化水平研究J新疆医科大学学报，2020，43（7）：905-9089 李钦，范强，胡继宏，等富硒黄芪提取物对免疫抑制大鼠细胞因子 IL2、IL4、IFN 及 TNF 的影响J西部中医药，2018，31（3）：22-25文章编号 1007-0893(2023)14-0008-04 DOI：10.16458/ki.1007-0893.2023.14.003孕前健康教育联合婚前孕前优生健康检查 在优生遗传咨询中的应用价值梁柳仙1黄秀菊2蓝桂仙1（1.清远市清新区妇幼保健院，广东 清远 511800；2.清远市清新区人民医院，广东 清远 511800）摘要目的：探讨孕前健康教育联合婚前孕前优生健康检查在优生遗传咨询中的应用价值。方法：选取清远市清新区妇幼保健院 2021 年 9 月至 2022 年 5 月接诊的 700 例（350 对）优生遗传咨询的夫妇，按随机数字表法分为对照组和观察组，各 350 例（175 对）。对照组给予孕前健康教育，观察组给予孕前健康教育婚前孕前优生健康检查，比较两组夫妇干预前后的不良情绪、优生知识知晓率、检查配合度、不良妊娠结局及新生儿出生缺陷率。结果：干预后，观察组夫妇汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、汉密尔顿焦虑量表（HAMA）评分均低于对照组，差异具有统计学意义（P 0.05）；观察组夫妇的优生知识知晓率、检查配合度高于对照组，差异具有统计学意义（P 0.05）；观察组夫妇的不良妊娠结局发生率、新生儿出生缺陷率低于对照组，差异具有统计学意义（P0.05）。结论：通过实施孕前健康教育联合婚前孕前优生健康检查，能够调节改善备孕夫妇孕期不良情绪，提高备孕夫妇优生知识知晓率和检查配合度，预防不良妊娠结局，减少新生儿出生缺陷，有助于优生优育。关键词优生遗传咨询；孕前健康教育；婚前孕前优生健康检查中图分类号 R 715 文献标识码 B收稿日期2023-05-22基金项目清远市科技计划项目（211119144561387）作者简介梁柳仙，女，主治医师，主要研究方向是妇女保健。