医院污水监测方法.docx

医院污水监测方法
细菌总数及粪大肠菌群的测定
1. 采样时间
在消毒后1小时，排放前进行采样
2. 采样方法
1） 水样瓶采集前必须进行灭菌，并需保证在装运、保持过程中不受污染
2） 在采集水样时，先将出水口消毒，然后将水龙头完全打开，放水5-10min,以排除管道内的贮水后再采水样。
3） 如果是经加氯处理的污水，应按每500ml加1.5%硫代硫酸钠2ml中和余氯，终止余氯的杀菌作用。
4） 所才的水量为采样瓶容量的80%左右，以便在检验时可以充分摇动水样。
5） 水样从采集到检验一般不超过2h,如放冰箱保存，也应不超过4h.
3. 细菌总数的测定：
细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养48h后，所生长的细菌菌落数。
操作方法：
1） 无菌操作吸取10ml充分混匀的水样注入盛有90mln灭菌蒸馏水的玻璃瓶中，混匀成1:10稀释液。
2） 吸取1:10稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成1:100稀释液。
3） 用涂抹法或倾注法接种平皿。
4） 置37℃培养48h后计数菌落数，报告1ml水样的细菌总数。
4. 粪大肠菌群的检验方法
采用发酵法。
步骤：
①初发酵试验
②平板分离
③复发酵试验
⑴初发酵试验
1） 将水样作1:10及1:100稀释
2） 水样的接种1:100稀释水样(相当于原水样0.1ml)1ml
原水样1ml以上分别注入10ml普通浓度（单料）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）。
原水样10ml注入5ml3倍浓缩（三料）乳糖蛋白胨液中（内有倒管）
如水样较清洁，再取原水样10ml注入
50ml3倍浓缩乳糖蛋白胨液中，上述发酵
管置44℃，24h培养。
⑵平板分离
将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种伊红美蓝培养基上，于37℃培养18——24小时，挑去深紫黑色、具有金属光泽的菌落（或紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色、中心色较深的菌落），进行涂片、染色、镜检。
⑶复发酵试验
挑取镜检为革兰阴性无芽孢杆菌的典型菌落1—3革，接种于一支单料乳糖发酵管内，44℃培养24h，产酸产气即证实有大肠菌群存在。
⑷结果报告
根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表1或表2，报告没升水样中的粪大肠菌群数。
5、污水中沙门菌、志贺菌检验步骤：
污水样品过滤、稀释、增菌处理：取200ml污水，用灭菌滤膜进行抽滤；用100ml二倍浓度SF（亚硒酸盐增菌液）把滤膜上截留的杂质洗脱倒灭菌三角烧瓶内，充分摇匀，置于37℃培养24—48h；挑选可疑菌落接种于双糖37℃培养18—24小时。
鉴定：生化、血清学试验，检验结果报告一定体积样品中存在或不存在沙门
三、报告填写
编号： 格式：ZG-XJ-JL
细菌总数检测报告
样品名称：
检测日期： 生产日期：
稀释度
10
100
1000
菌落计数（CFU）
350
330
280
260
32
38
平均数（CFU）

结果（CFU）

检测人：
审核人：

编号： 格式：ZG-XJ-JL
大肠杆菌检测报告
样品名称：
检测日期： 生产日期：
稀释度
10
100
1000
初发酵产气管数

复发酵管数

MPN表结果

检测人：
审核人：