DB61∕T 409-2007 牛奶制品中硝酸盐的测定—酶法(陕西省).pdf

DB61 陕西省地方标准DB611T钊9一却07牛奶制品中硝酸盐的测定酶法2007斗争03发布2007-09-03实施陕西省质量技术监督局发布DB61rr 409国2007-E司目。本标准中的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国陕西出入境检验检疫局提出井归口。本标准起草单位:中华人民共和国陕冈山入境检验检疫局。本标准起草人:欧阳宏、蒋宏伟、陈茂盛、张春山。本标准系首次发布。astt-yet-T钳司3且遭遇者指DB61ff409? 牛奶制品中硝酸盐的测定一酶法范圃本际准规定了酶法制定牛奶制品中硝最盐1号声量的方法。本栋准适用于牛妈制品中硝酸盐含量溜走。提建娃引离文件2 下民文件中的条款现过本标准的引地而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文作，其随后所有的停战单不包括勘误的内容)成修订版均不店用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究赴否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文忡，其最新版本适用于本怀准。DIN 10476 牛奶制品中硝酸盐及亚硝酸盐的剧IDF 97A 牛奶制品及乳消毒中硝酸盐的黯定tj-Eg-Fizz-i1、izz缮主专A动费转住姻自先按藤嘿岭二核昔酸(辅酶ID烟自先按腺喋岭L核甘酸(还原驯销商每10黄京腺嗯岭核1了酸硝西安盐脱统酶费每j古道;写际单位，在250C的林蓓条件于每分钟lU的第成imol的物质。段先度直物琪的故度捋号与结路i圭NADP NADPH FAD NR u 人C 主原理4 N民硝酸、盐十NA肝H十日一一渺茫赔酸盐+NADP今在OM即挂的总摇;吉踹最盐的总举计算NADP泛的提是在340nm条柯:F的吸光夜班获得。试齐1)5. 1 眯咄辗;中溜:5.2 NADP 5.3 FAD 5.4 1、R5.5 HCl 5.6 NaOH 5.7 KOH 5.8 童蒸水5 . DB611T 409-2007 5. 9 蓝铁氢化梆K1Fe(CN) n. 3日205.10琵酸将乱.501 7日205. 11 甜可使题商品试剂盒6 设备6.1 移液检(5mL、1mL、50-200L，10-50L) 6咽2比色思:光径1.Ocm 6.3 紫外分先光度计，可变波长，在340nm黯定。6.4 折替淀:菇，孔径1011 m。6. 5 离心机6.6 离斗智、烧杯、移液跄配器滴头、玻璃梅等检测步费7 检那步辍7. 1 试剂配羁7. 1. 1 咪瞠搓沛液将0.68g咪1哇溶于80ml7. 1. 2 N人DP工作液中，m HCl 调节pH至7.8，J:!j币;在7.1走洛至100mL月jlmL嗦瞠缓冲液熔解O.5mgNADP，1手戴辛1IO.Olmg FAD。即为NADP工作渣。7.1.3 硝酸盐肆童在搞恩浮物:J:!j0组8mL茶水济鲁平4U硝酸础是氢酶，即为暗毒委主主且是氢酶悬浮物。7. 1. 4 HC 1: 2 mo I /L 7.1.5 怠。H:2mol/L 7. 1. 6 KOH: 2mol/Lo 7. 1. 7 Carrez洛液7.1.8 Carrez阳门器法85mmol/ L Carrez-I溶液:称取3.60g1(4FeCCN) 6.3日20，加入100mLi豆蒸水济解c7.1.8.1 乙arrez-II溶液250汩汩01/LCarrez-II溶滚:称取7.20gZ01.7thO ，加入100mL重蒸*容章等。Ii备使用时，等击敌加入Carrez-1济液手1ICarrez-II咕珞椒，充分提匀即为Carrez溶渎。7. 2 试梓制备7. 2. 1 在体取2mL(g)样j夜，如入98mL重茶水，片$品攘攘荡器震鸪10分钟，充分滋匀乡过波:，波:液j二w子拉础。7. 2. 2 固体取5g经斡静、均搅成、i生i司终将子烧杯中，如入50mL煮沸;重茶水，在1弗水滔中保持15mn后，嵌w冷却至室报(20-25.C)，加入6mL Carrez.存液，时NaOH调pH烹8，移至容最瓶中，J:!j豆茶水定容为100mL，地匀，宣(fJ箱20mn，过边(将波;浓的前几mLJf之)，自主主滚检测o7.3 检翻接表l进行)7.3. 1 设空昌对照取比色缸，使法加入1.OOOmLNJ气DP1:作捷、0.1OOmL NAD 1:作洁、2.000mL豆蒸水，剖合13min i卖最吸光度值(A1)，再加入0.050mL硝酸盐脱虱酶恙浮物，1号t合王三f号，完成(太给40min)，读取吸先度虽(A2)，空吸光度值夹在=CA广岛)过20mn后再继姑i主取鼓光度值A307.3.2样品取比色虫，f在次加入1.000mLNADP 1.作法、O.lOOmL样品济接、1.900mL革茶/刘国合J高t3min启读取吸Yt度值(A1)，再加入0.050mL硝酸盐，眼氢酶必泞物，f，挝合辰1句完成大给40mn)，实取暖7 DB61i丁409-2007先度直(A2)，样品吸党度值羔(A1-A2)州，过20min后:好继接读瑕较先皮值人3;分别溺辛辛品与空白的吸光&值芳，剧样品!霞光度值主主减去空在吸先度值差可以得到公式(1)6A= (Al也)IU2X (A2As)削1一(A-fu)(i-2X(A2-A).c;孝心1.畸.(1)最后的殴无度值差应太子0.100，方能得到最黯确的结果。表1检来!Ij程草移被自样，品河ADPl作液l翩OOOmL1. OOOmL 样品洛滚O. 100mL 革蒸水2.000mL 1. 900mL 挠和，真空前反应完全反应后，约3min，读取眼光度镶丸，稽酸盐脱氢悔悬浮物摆手11，等反问进行完全后(约40旧时，立即i卖取样品翠J空向的眼光度f主A，:在20min后继楼i卖取眼光度值扣，茧烹!tt直不辞变化。, 计算根据公式。计算浓殷:VjXMW 8 Ll AX f.(2) X C E XdXf毛X10009 硝酸盐含量计算道德如F公式:3. 050X62. 0 XLJAX f 川(VE X 1. OOXO. IOOX 1000 1. 891 XLJAX f 要拉谢物质的浓度:g!L 要检部物主爱的摩尔质撑。硝最盐j夺权质鼓62.0g/mol比色皿中测试溶液的总体积，单位是mL由试梓制备的样耐11容攘的，导体积，单位是mL样品济浓的稀释借数比色豆豆揭光棋，单位赴cmNADPH的消先系数:在340nm 6.3 1 x mmorl x cm-1 吸光度值差r 成ucmwv门vhsfd式A L1A 3 躇墨麦盐检现IJ才韵匮瓷试验硝酸盐质控济法是一个标准的硝酸盐点前液旗茬的1i.J+J 10 飞G110.2 DB61/T 409-2007 10.2. 1 舔加质控洛液到反应体系中。10.2.2 玉在新开始进行定量反应样品攘攘反应结束，人2最己知，如0.050时的质控接加到栓摇摇合壤中，反归结束后(lOmin) , 瑕菇上嚣的等式(A3-A2)计:挥棒度差，应该考虑改变黑体积。i卖暖光度量A20可以现察到较充度值增J)O 0 10.2.3 内辑质投可以作为内标，对确的实验过程进行监测，决定样品榕液中是否有杂质干扰。表2脑控试验步曙加入过色杯中的珞液自样品际准样品+标准?让DP仁作或L OOOrnL 1.OOOmL 1.000mL 1.000mL 样品消液O.lOOmL 0.050照L质控济液O. 100mL 0.050rnL 重蒸水2.000mL 1嗣900rnL1.900mL 1.900mL 海军1，直至高反芮完全反应茹，约3韶山，读取吸光度组A1，按顶7.3翰测程序和表1检测科!芋继读接件。 样准的阿拉率可通过公式(3)进行计算!f!/技事,n-t-H什一矿AA二和一布府机HMHdA A-A A V八一、石一XI00:劣;.梅.布.(3) 4 DB61ff 409-2007 附策A资料性附录注意事项1、检剖硝酸盐时m到的试剂无危窑姓李组是必须遵循基本的实验摆章髓度。2、配制好的缓冲液、酶弃Ui去粉等应存于2.C8.C。配制成的NADP_t:作模、黯草委盐脱氢酶屈;浮物在2aC8.C可稳定兰要期。建议对酶剖最好现片j现配制。 高3, f令藏的援冲液f吏目前;再混至宝崩后再使书。 4、所有使用的试剖举须保证不含硝喜爱盐。可加大样5、如果能量到吸光度f直羔锦斗、(如0.100)，期样品晦f夜用室主革开娃理，即在7.3.2黯向溶液的最终体积相向。品的纬积，减少蓝蒸;j(体权，使样品和6、可通过吕;在率检测测试过括中的可能强失。7、古iJ试也可使用商品试齐IJ盒，但操ft前须仔细阅读有关说明书。8、各对H在组成立的情况F万可判定纣果。!;!; 5 11 s