DB34∕T 3636-2020 水产品中洛美沙星、培氟沙星残留量的测定 胶体金免疫层析法(安徽省).pdf

TCS 65.150 B 52 DB34 .l-. 文徽省山巳ET且，万标准DB 34/T 3636-2020 水产品中洛美沙星、培氟沙星残留量的测定胶体金免疫层析法Determination of residues of lomecacin and pefloxacin metabolites in aquatic Products-Colloidal gold immunochromatography method 2020 - 06 -22发布2020 - 07 -22实施安徽省市场监督管理局发布目IJ1=1 本标准按照四月1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省水产技术推广总站提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。DB34/T 3636-2020 本标准起草单位:安徽名湖农业科技有限公司、宁国市金东坊农业开发有限公司、宁国市金鼎家庭农场、安徽省水产技术推广总站、安徽国泰众信检测技术有限公司、宣城市阿太特种水产养殖有限公司、合肥市畜牧水产技术推广中心、安徽省农产品质量安全检测中心、杭州|南开日新生物技术有限公司、合月巴金荣生态农业有限公司O本标准主要起草人:孙德祥、陈洪周、下红正、许世富、桂淦、李瑞、何广、周作友、徐丽、荣朝振、钱之云、吴敏、沈亚东、金家红、郭恒心、王静、刘卫芳、魏泽能、桑丽雅、王振、何超、范希芹、王先锋、杨忠喜、凌建海、彭克平、秦道仓、彭文广。DB34/T 3636-2020 水产品中洛美沙星、培氟沙星残留量的测定胶体金免疫层析法1 范围本标准规定了水产品中洛美沙星(lomefloxacin，缩写Lom)、培氟北l、星(pefloxaci口，缩写Pef)残留量的测定胶体金免疫层析法的原理、试剂和材料、仪器与设备、分析步骤、结果判断、性能指标及阳性结果确证。本标准适用于鱼类、虾类等水产品中洛美沙星、I音氟沙星残留量的快速筛检，本方法洛美沙星、培氟11、星的检出限均为2.0 g/kgo 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，叉所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB!T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB!T 30891 水产品抽样规范农业部1077号公告-1-2008水产品中17种磺肢类及15种睦诺酣类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法农业部1192号公告1-2009水产菌种违禁药物抽检技术规范3 原理本法应用竞争抑制免疫层析原理。样品溶液中的洛美沙星、培氟11、星与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上洛美沙星、培氟11、星BSA1国联物的结合。当样品中的洛美沙星、培氟j少星含量超过本方法检出限时，检测线(T线)较控制线(C线)浅甚至无显色，判定为阳性:反之，当样品中的洛美沙星、培氟沙星含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线显色与控制线相近或偏深，判定为阴性。4 试剂和材料除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，用水应符合GB!T6682规定的二级水。4.1 浓盐酸，浓度大于37%。4. 2 磷酸氢二呐。4. 3 磷酸二氢押。4.4 氧化纳。4. 5 氧化押。4. 6 乙酸乙醋:色谱纯4. 7 正己炕:色谱纯4. 8 甲醇:色语纯DB34/T 3636-2020 4. 9 吐温2004.10 1 mol/L盐酸溶液:量取8.6mL 1农盐酸(4.1)，加蒸惰水定容至100mL，室温保存。4. 11 O. 01 mol/L磷酸盐缓冲液(含0.5%吐温20，pH 7.4)溶解8.0 g氯化铀(4.的、O.2 g氯化押(4.5)、1.44g磷酸氢二铀(4.2)、0.24g磷酸二氢押(4.3)、0.5mL吐温-20(4.9)于800mL水中溶解，并用水定容至1L，用盐酸溶液(4.10)调pH至7.4，经1210C高压灭菌15min, 40C下避光保存。4.12 标准溶液的配制4. 12. 1 洛美沙星、培氟沙星标准储备液(100mg/L):分别准确称取10mg洛美沙星CCAS:98079-51-7)、培氟沙星(CAS:6159-55-3) ，用甲醇溶解，定容至100mL, -180C冰箱中保存，有效期6个月O4.12.2 洛美沙星、培氟沙皇标准中间液C1 mg/L) :分别准确移取标准储备液1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。rc冷藏避光保存，有效期1个月。4.13 氟唾诺国同类胶体金免疫层析快速检测试剂板组成，参见附录A。5 仪器与设备5. 1 电子天平:感量0.01g、O.OOOlgo5. 2 均质机:转速不小于8000 r/mino 5.3 离心机:转速不小于4000 r/mino 5.4 氮吹仪:加热温度不小于600C。5.5 移液检1L10J.lL, 10L100L， 100Ll 000 J.lL。5.6 高压灭菌器6 分析步骤6.1 试样制备6. 1. 1 鱼去鳞，取皮及肌肉部分:虾去头、壳、肠腺，取肌肉部分，剪碎，用均质机均质，-180C冷冻避光保存，试样量不少于50g。6.1.2 试样制备按GB/T30891或农业部1192号公告-1-2009的规定执行。6. 2 提取称取2g士O.1 g均质后样品于5mL离心管中，加入3mL乙酸乙醋(4.肘，剧烈振荡3mi丑，室温(200C:!:5C)下4000 r/min离心5min;移取2mL上清液于新的.5mL试管中，600C下吹近干:向试管中依次加入0.3mL正己皖(4.7)和0.3mL磷酸盐缓冲液(4.11)，充分混匀。静置2min, 待检。6. 3 测定6.3.1 所有操作需在室温下C20oC:!:50C)进行。6.3.2 取出氟唾诺自同类胶体金免疫层析检测试剂板。吸取6.2中待测液100L于加样孔中，在3min 5 min内读取结果。6.4 质控试验6.4.1 空白对照:以磷酸盐缓冲液C4. 11)代替6.2中待测液按6.3进行测定。2 DB34/T 3636-2020 6.4.2 质控样测定:每一批次试验时，选取己知不含洛美沙星、培氟沙星的均质水产品组织作为质控样，称取两份平行样，其中一份作为阴性质控样，另一份添加洛美沙星、培氟沙星标准中间溶液使其终浓度均为2g/kg，作为阳性质控样。按6.2和6.3步骤进行。注:不同制造商间的肢体金免疫层析检测试剂板产品组成和操作会有细橄的差别，应严格按说明节要求规范操作。7 结果判断7. 1 检测结果7. 1. 1 无效与有效空白对照结果控制线(C线)不出现红包条带，说明检测试剂板失效，不能进行检测(见图1，分图a)如空白对照结果控制线(C线)和检测线(T线)均出现红包条带，而且T线比C线颜包深或一样i泵，说明检测试剂板有效，可进行检测。7.1.2 阴性结果待测试验检测线(T线)出现红色条带，且颜色比控制线(C线)深或一样深(见图1，分图b)为阴性。7. 1.3 阳性结果待测试样检测线(T线)出现红色条带，但颜色比控制线(C线)浅或检测线(T线)未出现红色条带(见图1，分图c)为阳性。无效a) 注:检验结果需注明检出限。7. 2 质量控制要求阴性b ) 图1结果判断图阳性c) C辑T辑7.2.1 每批次样品检测时，或胶体金卡批号不同时，均需按6.4进行质控。7. 2. 2 阴性质控样结果应为阴性:阳性质控样结果应为阳性，否则试验无效。8 性能指标3 DB34/T 3636-2020 8. 1 检出限:洛美沙星检出限为2.0 g/kg、培氟沙星检出限为2.0g/kgo 8.2 灵敏度:灵敏度应二99%。8. 3特异性:特异性应呈95%。8.4假阳性率:假阳性率应三5%。8.5 假阴性率:假阴性率应三1%。8. 6 性能指标计算方法见附录B。9 阳性结果确证试样中洛美沙星、培氟;少星检测结果为阳性时，应用农业部1077号公告一1-2008的方法或等价方法确证。4 DB34/T 3636-2020 附录A(资料性附录)氟H奎诺自同类肢体金免疫层析快速检测试剂板组成国同类胶体金免疫层析快速检测试剂版组成(见图A.1，含分图a、b)过f; ?: :11 1丁川一?一串一一e-.l:巳p图中:l一一塑料模板:2 加样孔:3一一观察窗:4 背衬:5一一样品垫:6 胶体金标记结合垫:7一-NC膜:8 检测线(T); 9一一控制线(C)10一一吸水垫:11一一不干胶。样品垫:玻璃纤维或纸质薄片。a)试剂板剖视图山b)试剂板俯视图图A.1 胶体金标记结合垫:聚醋纤维片，胶f本释放时间小于5min，释放效率大于80%。NC膜:孔径为12川，4 cm毛细管时间小于135So 吸水垫:滤纸或玻璃纤维或吸水纸。背衬PVC。塑料模板:内置试纸条卡槽。5 DB34/T 3636-2020 样品情况阳牛|扩牛特异性忡，%) 灵敏度(p十，%) 假阴性率(pf一，%) 假阳性率(pf+，%) 附录B(规范性附录)性能指标计算方法表B.1 定性方法性能计算表检测结果阳性阴性Nll N12 N21 N22 p一二N22/N2.p十二Nll/Nl.pf一二N12/Nl.pf+二N22/N2.注1:样品情况是由基准方法检验得到的结果1检测结果是由本方法得到的检测结果。注2:N指任何特定单元的结果数，第个下标指行，第二个下标指列O总数Nl.二Nll+N12 N2.二N12+N22例如Nll表示第-行，第-列，Nl.表示所有的第行，N2.表示所有的第二行N12表示第行，第二列。6