第十章-抗生素.pptx

第十第十 章章 抗生素类药物的分析检验抗生素类药物的分析检验-内酰胺类抗生素分析内酰胺类抗生素分析-内酰胺类抗生素的结构内酰胺类抗生素的结构性质（1）酸性和溶解性质 青霉素和头孢菌素分子中的游离羧基具有相当强的酸性，能与无机碱或某些有机碱形成盐。它们的碱金属盐易溶于水，而有机碱盐则易溶于甲醇等有机溶剂，难溶于水。（2）旋光性 青霉素族分子中含有3个手性碳原子，头孢菌素族含有2个手性碳原子，故都具有旋光性。利用这一特点，可对这两类药物进行定性和定量分析。（3）紫外吸收特性 青霉素分子中的环状部分无紫外吸收，但其侧链酰胺基上R取代基如具苯环等共轭系统，则有紫外吸收特性。如青霉素在257nm和264nm波长处有吸收峰。头孢菌素族，由于母核部分具有O=CNC=C的结构，在260nm波长处有强吸收，这是7-ACA的特征吸收峰。（4）-内酰胺环的不稳定性 干燥纯净的青霉素盐稳定，对热也稳定。青霉素的水溶液则不稳定，而且随pH和温度的变化影响很大，在pH66.8时较稳定。青霉素的-内酰胺环是整个分子结构中最不稳定的部分，如与酸、碱、重金属、青霉素酶、羟胺等作用，均能导致-内酰胺环的破坏而失去抗菌活性，形成一系列的降解产物。与青霉素相比，头孢菌素较不易发生开环反应，对青霉素酶和稀酸比较稳定。鉴别试验本类药物的鉴别试验，现版药典采用的方法主要为IR、HPLC和TLC法。1.色谱法利用比较供试品与对照品主峰的保留时间（tR）或斑点的比移值（Rf）是否一致进行鉴别。HPLC法一般都规定在含量测定项下的色谱图中，供试品与对照品主峰的保留时间应一致。2010版药典对抗生素药物的鉴别试验一般都设立了HPLC法和TLC法两种方法，规定可在两种鉴别方法中任选一种。2.光谱法（1）红外吸收光谱法(IR)红外吸收光谱是一种专属性较高的鉴别方法，反映了分子固有的结构特征。各国药典对收载的-内酰胺类抗生素几乎均采用了本法进行鉴别。（2）紫外分光光度法(UV)通常利用最大吸收波长鉴别法，即将供试品溶液配成适当浓度的水溶液，测定紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长或最大吸收波长处的吸收度进行鉴别。3.钾、钠盐的火焰反应青霉素族、头孢菌素族药物中，许多制成钾盐或钠盐供临床使用，因而可利用其火焰反应进行鉴别。4.呈色和沉淀反应（1）在稀盐酸中生成白色沉淀 青霉素钾和青霉素钠加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离酸白色沉淀。这些沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中溶解。（2）羟肟酸铁反应 青霉素和头孢菌素在碱性介质中与羟胺作用，-内酰胺环破裂生成羟肟酸；在稀酸中与高铁离子呈色。不同的青霉素和头孢菌素的络合物显示不同的颜色，如氨苄西林呈紫红色，头孢氨苄呈红褐-褐色。（3）类似肽键反应 本类药物具-CONH-结构，一些取代基有-氨基酸结构，可产生双缩脲反应和茚三酮反应。如氨苄西林，中国药典采用TLC鉴别时，以茚三酮为显色剂。三、特殊杂质的检查 -内酰胺类抗生素的特殊杂质主要有高分子聚合物、有关物质和异构体等。一般采用HPLC法控制其限量，也有采用杂质的吸光度来控制杂质量的。此外，有的还进行结晶性、“抽针试验”、“悬浮时间与抽针试验”等有效性试验，对原料药物则规定了“残留溶剂”的检查。含量测定高效液相色谱法(HPLC)头孢噻肟钠的测定方法如下：色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取7.1 g无水磷酸氢二钠至1000ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，用磷酸调节pH值至6.25）-甲醇(85:15)为流动相；检测波长为235nm。取头孢噻肟对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1 mg的溶液，作为系统适应性试验溶液，取10l注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。测定法 取供试品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml约含1 mg的溶液，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢噻肟对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C16H16N5O7S2的含量。链霉素的结构链霉素的结构氨基糖苷类抗生素的分析氨基糖苷类抗生素的分析 庆大霉素庆大霉素C族的结构族的结构鉴别试验1.茚三酮反应本类抗生素为氨基糖苷结构，具有羟基胺类和-氨基酸的性质，可与茚三酮缩合，生成蓝紫色化合物.中国药典（2010年版）采用本法鉴别硫酸小诺霉素，方法为：取供试品约5mg，加水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5min，即显紫蓝色。氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素图图 茚三酮反应原理茚三酮反应原理2.麦芽酚(Maltol)反应此反应为链霉素的特征反应。链霉素在碱性溶液中，链霉糖经分子重排使环扩大形成六元环，然后消除N-甲基葡萄糖胺和链霉胍，生成麦芽酚。在微酸性溶液中，麦芽酚与铁离子形成紫红色配位化合物。图图 麦芽酚麦芽酚(Maltol)反应式反应式色谱法鉴别（1）薄层色谱法 中国药典（2010年版）采用该法对本类抗生素进行鉴别。如对硫酸庆大霉素的鉴别方法：取供试品与标准品，分别加水制成每1ml中含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2l,分别点于同一硅胶G薄层板（临用前于105活化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-氨溶液(1:1:1)混合振摇，放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开后，取出薄层板，于20-25晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和颜色相同。特殊杂质检查及组分分析1.有关物质的检查本类抗生素中的有关物质一般采用HPLC法检查。中国药典（2010年版）规定，硫酸链霉素、硫酸西索米星、硫酸奈替米星、硫酸庆大霉素等药物需要进行有关物质的检查。2.庆大霉素C组分测定由于抗生素各生产厂采用的发酵菌种不同、发酵工艺略有差别、提炼工艺也各有特点，因此各厂产品的庆大霉素C组分含量的比例不完全一致。庆大霉素C1、C2、C1a对微生物的活性无明显差异，但其毒副作用和耐药性有差异，从而影响产品的效价和临床疗效。因此，多国药典均规定控制各组分的相对百分含量。中国药典（2010年版）采用高效液相色谱法测定C组分含量,并规定C1应为25%50%，C1a应为15%40%，C2+C2a应为20%50%。含量测定氨基糖苷类抗生素的效价测定包括高效液相色谱法和微生物检定法。谢谢谢谢!