DB63∕T 1002-2011 马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范(青海省).pdf

TCS 65. 020. 01 B. 16 DB63 主同海省Eh巳tTJ 方标准DB 63/ T1 002-2011 马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范2011 - 06 -14发布2011 -07 -01实施青海省质量技术监督局发布目IJ1=1 本圳范的编写符合GB/T1. 1-2009的要求。本规范由青海省农林科学院提出井归U。本规范起草单位:青海省农林手中于?院柏物保护研究所。本规范主要起草人:郭青云、王信、叶广棋、朱海霞、程亮、姚强。D863/ T1002-2011 D863/ T1002-2011 马铃薯抗晚疫病性室内评价技术规范1 范围本规范规定了马铃薯品种(系)的试验地环境、参试质量和菌株选择、栽培技术、室内抗性鉴定方法和抗恼性评价。本规范适用于马铃薯品种(系)晚疫娟的室内抗性鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。DB63/T 514 青海省旱地马铃薯栽培技术规范3 术语和;主义3. 1 3. 2 3. 3 3. 4 下列术语和定义适用于本规范。抗病性鉴定Evaluationof Disease Resistance 是评价寄主品种、品系对特定病害抵抗;或感染程度。离本日十片鉴定Evaluationof Leaf in Vitro 将马铃薯品种(系)的叶片从柏株七取下，经室内培养、人工按种而进行的抗性水平鉴定。对R吉思病品种ControlAffected Variety 用于鉴定试验中的本地易感1铃薯品种。目前常用的感病品种有:大西洋、夏波蒂、Favoritao脱毒马铃薯种薯Virus-FreeSeed Potato 去除马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)马铃薯等主要病毒的马铃薯种薯。3. 5 抗性评价Evaluationof resistance 根据采用的技术标准判刑寄主植物对特定病害反应程度和抵抗水平的定性描述。D863/ T1002-2011 4 仪器、试剂及材料4. 1 仪器生物微镜、光照培养箱、超净工作白、生化培养箱、冰箱、泊毒锅、移液器、烧杯、培养lill(90mm)、不锈钢打孔器(5mm)、接种针、血球il数板和直尺。4. 2 试剂琼脂、75%酒精、展糖。4. 3 材料黑麦。5 试验地环境、参试马铃薯质量和菌株选择5. 1 试验地环境试验地选择在远离50m马铃薯种植怪的医域。5. 2 参试马铃薯品种(系)选择选择薯形整齐、纯度高、健康的脱毒马铃薯。5. 3 品种(系)田间种植数量于寻品种(系)种植10株以上。5. 4 菌株的选择j主择青海省优势马铃薯生理小种2个-3个进行接种。青海省马铃薯晚疫病菌优势生理小种有3，4, 10号、3，10号和3号C6 栽培技术按DB63/T514执行。7 室内抗性鉴定方法7. 1 培养基制备7. 1. 1 滤纸培养基直径90mm的滤纸2张放入直径为90mm的培养皿巾，力口蒸t留水润湿，但无积水，备用。7. 1.2 黑麦培养基用蒸锢水浸泡60g黑麦24h, I自压滤灭南20min, 4层纱布过滤，加入18g/L琼脂，20 g/L庶糖，蒸t留水定容至1000ml，湿热灭南，在121oCi自j压灭南锅湿热灭南20min后备用。2 7.2 取样7.2.1 取样时间付丰直株生长至8片一10片复叶后进行取样。7.2.2 取样方法和数量在每个品种(系)的各个植株中随机采集小叶叶片30片。7.3 菌种繁殖和菌液制备7.3.1 繁殖D8631 T1002-2011 将采回的病叶流水冲洗10h-12 h，晾干后在超净工作台紫外杀菌30mino选择易感晚疫病马铃薯品种夏波蒂的块茎，7.5 %酒精消毒后在超iP工作台上将块茎中问切J一深槽，将病叶夹入槽内，用火菌报纸包好，室温黑暗处6d-10 d，特薯块表雨山现典型晚疫病症状，无菌条件下取3小块-4小块发病薯块放入无菌培养阳中保泪培养4d-7 d, 1;菌丝长山，挑取少量菌丝于黑麦培养基上18C黑暗培养，1;菌丝呈放射状生长，在菌落边缘切取自单菌丝的培养基放在黑麦培养基上18C黑暗培养。7.3.2 菌液制备用接种针挑取黑麦培养基上的菌丝休丰日子包子囊装有无菌水的烧杯中，生物显v提镜镜检，用血球计数板记录无菌水中的子包于囊的数量，调整由于囊的数量为2000个Iml-3000个1m!，放入4C的冰箱内O.5 h-1 h，取出后3h内完成接种。7.4 接手中i每鉴定品种(系)的叶片口十背面朝七放在培养某r.，用移液器取30止炮子囊悬浮液怕|于叶片背面，静置12h左右，将口十片翻转成正面朝七，置光照培养箱中培养。7.5 培养在设定温度18C, 12 h黑暗，12h光照的光照培养箱中培养。7.6 调查时间培养后的第4d进行调查，连续调查3f欠，第7d对抗病性进行综合评价。7.7 调查方法以叶片为单位，调查具有典型晚疫病症状(见附录A)的各个叶片，以病斑的长为准，用直尺按十字交叉法测量病斑的长和宽。7.8 计算方法评价病斑而积Cmm2)=1/4X长(mm)X宽(mm)X 3. 14 7.9 菌种保藏根据待用时间的长知，菌种保藏I-lJ分知期保藏和长期保藏。7.9.1 短期保藏3 D863/ T1002-2011 当菌种在5d6 d内使用时，将菌种接种在适宜的固体斜向培养基上，何菌充分生长后，棉塞部分用油纸包好，移至2oC8 oC的冰箱中备用。7.9.2 长期保藏当菌种利用火菌的矿物油(液体石蜡)灌在斜阳菌种的表阳，其油由高度应超过斜阳顶部1cm，以隔绝斜向上菌种与空气接触，使之处于无氧条件下，以拥制菌种的生长与代谢活动，而培养基也不会干燥，加入石蜡油的菌种管可以放在室温下，置于液氮或80oC冰箱中O8 抗病性评价8. 1 马铃薯品种(系)晚疫病病情分级见表1表1马铃薯品种(系)晚疫病病情分级病级病情或症状1 病十面积为O2 病斑山积5%3 5%主三病1封面积15%4 15%三三病J:J十面积35%5 35%三三病斑面积65%6 65%运病斑面积85%7 85%病J;i;I面积95%8 95%三三病Ij干旬积100%9 病斑而14(为100%8. 2 鉴定有效性判别室内鉴定中的高感对照品种发病病情指数达到66以上时，该批次抗晚疫病鉴定视为有效。8. 3 重复鉴定初次鉴定中表现为高抗、中抗的材料，次年需用相同的病原菌进钉重复鉴定。8. 4 抗性评价标准依据鉴定品种(系)发病程度(病情指数和病斑面积)确定其对晚疫病的抗性水平，其评价标准见表2。如果两年鉴定结果不一致，以抗i咔弱的发病程度为准。表2马铃薯品种(系)B免疫病抗性鉴定评价标准抗病级别病级病|青指数高抗(HR)1、2。15抗病(R)3、41630 中抗(MR)5 3145 感病(S)6 4665 高J惑(HS)7、8、966100 4 D863/ T1002-2011 8. 5 鉴定记载表格马铃薯抗晚疫病鉴定原始记录及结果记载表格见附录B。5 D863/ T1002-2011 附录A(资料性附录)A. 1 马铃薯晚疫病侵染植株症状A. 1. 1 病原Phytophthora infestans称致恼疫霉，属鞭毛菌亚门真菌。A. 1.2 症状A. 1.2.1 主要侵害叶、辛和薯块。A.1.2.2 叶片染病，发病初期，先在叶尖或叶缘生水浸状绿褐色斑点，恼斑周国具浅绿色晕圈，温度大时锅斑迅速扩大，呈褐色，并产生一圈白霉，目IJ由于梗和由于囊，尤以叶背最为明显，干燥时恼斑变褐干枯，质脆易裂，不见霉，且扩展速度减慢。A. 1.2.3 ;王部或叶柄染捕，现褐巳条斑。发病严重的叶片萎乖，卷缩，终致全株照腐，全田一片枯焦，散发出腐败气味。A.1.2.4 块苇染病，初生褐色或紫褐包大块锅斑，稍凹陷，厢部皮下薯肉亦呈褐色，慢慢向四周扩大或腐烂。6 DB63/ T1002-2011 附录B(资料性附录)B. 1 马铃薯H免疫病室内病情调查记载见表B.1表B.1 马铃薯晚疫病室内病情调查记载表鉴定地点:训盒、记载人:训查时间:年月U州情训查结果品种(系)日|片序口长宽叶片背面症状mm mm l 2 3 . 30 平均l 2 3 . 30 平均7