T∕SHZSAQS 00132-2022 绵羊胚胎程序化冷冻保存操作技术规范.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 41 团体标准 T/SHZSAQS 001322022 绵羊胚胎程序化冷冻保存操作 技术规范 2022- 10 -05 发布 2022-10-05 实施 石河子市质量标准化协会 发 布 T/SHZSAQS 001322022 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 绵羊胚胎程序化冷冻流程 . 1 附录 A（资料性附录） 绵羊胚胎冷冻液配方 . 3 T/SHZSAQS 001322022 II 前 言 本文件参照GB/T1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。 本文件起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。 本文件主要起草人：万鹏程、傅祥伟、刘昱成、张振良、郭延华、卢守亮、石国庆、倪建宏、刘长彬、代蓉、王晶晶。 T/SHZSAQS 001322022 1 绵羊胚胎程序化冷冻保存操作技术规范 1 范围 本文件规定了绵羊胚胎程序化冷冻保存的术语与定义及绵羊胚胎程序化冷冻流程等。适用于绵羊胚胎程序化冷冻保存的操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件； 不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5458 液氮生物容器 NY/T 1900 畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 DB65/T 4120 绵羊冷冻胚胎 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 0.25mL 的塑料麦管 指程序化冷冻保存的一种冷冻保存载体。 4 绵羊胚胎程序化冷冻流程 4.1 采用1mL移液器将400 L的冷冻液转移到4孔板中，于室温平衡10min。 4.2 启动程序化冷冻仪（Cryologic-CL5500TC），并在冷冻槽中加入高于最低警戒线的液氮，设定冷冻程序为：由20降至-7，降温速率1/min；于-7维持10min（5min植冰）；由-7降至-35， 降温速率0.3/min； 由-35降至-38， 降温速率0.11/min， 维持5min。按下Run键。当冷冻程序显示温度为4时，按下Holding键 4.3 T/SHZSAQS 001322022 2 采用酒精灯外焰将BJ-40细玻管加热拉制成可以容纳胚胎通过口径的口吸管。 4.4 采用口吸管将胚胎从胚胎洗涤液吸取到冷冻液中，吹吸23次。 4.5 采用最小带液量的方法，将35枚胚胎吸取到0.25mL的塑料麦管中封口标记，并置于冰箱4环境中暂存。 4.6 将40min内封口标记的0.25mL 的塑料麦管有序排列。 4.7 将封口标记的0.25mL的塑料麦管迅速插入程序化冷冻仪的冷冻槽中，同时检测密封盖严密度，按下Run键。 4.8 在冷冻程序运行期间，每隔20min检查冷冻槽中液氮剩余量，并及时补充，保证液氮剩余量高于最低警戒线。 4.9 待冷冻程序运行结束后，将0.25mL的塑料麦管迅速浸没于液氮中，批量装入已标记的沙布袋中，并置于液氮罐提篮中长期保存。 T/SHZSAQS 001322022 3 A A 附 录 A（资料性附录） 绵羊胚胎冷冻液配方 PBS（v/v） Glycerol（v/v） BSA（m/v） Sucrose（M） 冷冻液 90% 10% 4% - B -