DB52∕T 919-2014 金线莲规范化生产技术规程.pdf

ICS 65.020.01 B 38 DB52 贵州省地方标准 DB 52/T 9192014 金线莲规范化生产技术规程 Technical regulations for Standardized production of Anoectochilus 2014 - 09 - 13 发布 2014 - 10 - 13 实施贵州省质量技术监督局 发 布 DB52/T 9192014 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 选种和留种 . 2 5 组培苗培育 . 2 6 商品苗 . 3 7 种植环境 . 4 8 种植设施 . 4 9 基质 . 5 10 种植 . 5 11 种植管理 . 5 12 采收与加工 . 6 附录 A（资料性附录） 三个物种鉴定. 7 附录 B（资料性附录） 培养基配制方法. 8 附录 C（资料性附录） 种植基质配比. 9 附录 D（资料性附录） 金线莲主要病害防治表. 10 附录 E（资料性附录） 金线莲主要虫害防治表. 11 DB52/T 9192014 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化指导原则 第1部分：标准的结果和编写给出的规则起草。 请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由贵州省农业科学院提出并归口。 本标准由贵州省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：贵州省亚热带作物研究所、贵州省现代中药研究所、贵州师范大学生命科学院。 本标准主要起草人：罗晓青、吴明开、乙引、申刚、张宇斌、廖明亮、敖茂宏、张显波、汤毅。 DB52/T 9192014 1 金线莲规范化生产技术规程 1 范围 本标准规定了金线莲原植物、选种、留种、组培苗培育、组培苗出瓶分级标准、炼苗、种植环境、种植设施、基质、管理、病虫害防治及产品采收与产地加工的技术要求。 本标准适用于贵州省金线莲适生地区，以全草药食兼用为目的的人工种植与推广。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 19630.1 有机产品 GB 3095 环境空气质量标准 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB 15618 土壤环境质量标准 中药材生产质量管理规范（试行）（国家药品监督管理局局令第32号，2002） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蒴果 由两个或多个心皮形成的开裂干果。金线莲蒴果中具有大量无胚乳粉末状的种子。 3.2 原球茎 由金线莲不同部位如种子、茎尖、茎段等诱导产生，具有发育潜能的细胞团。 3.3 不定芽 凡从叶、根、或茎节间或是离体培养的原球茎、愈伤组织等通常不形成芽的部位生出的芽，则统称为不定芽。 3.4 丛生芽 DB52/T 9192014 2 不定芽经增殖培养形成的群体丛生芽苗。 3.5 基质 种植中用来固定植株及贮存植物所需水分、养分的材料。金线莲种植常采用的基质有腐殖土、草炭土、碎树皮、碎树叶等按一定比例配制。 4 选种和留种 4.1 选种 本标准所指的金线莲原植物包括兰科（Orchidaceae）开唇兰属（Anoectochilus）的3个种，即兴仁金线兰（Anoectochilus xingrenensis Z.H.Tsi et X.H.Jin）、金线兰（Anoectochilus roxburghii （Wall.）Lindl.）、台湾银线兰（Anoectochilus formosanus Hayata），经过鉴定确认，鉴定方法见附录A。 4.2 留种 留种应选择植物形态特征典型，植物之间形态差异小，长势均匀，生长健壮的植株进行人工授粉结实获得的蒴果。 4.2.1 授粉 盛花期进行人工授粉，采用异株异花授粉，母本在授粉后立即套袋，挂牌标记。人工授粉只能在同一种内进行。 4.2.2 结实 授粉成功，子房开始膨大时进行疏果，每株留果23个；蒴果成熟时，选择饱满的果实采收备用。 4.2.3 蒴果保存 留种蒴果置于冰箱4 保存备用。 5 组培苗培育 5.1 种子无菌培养 5.1.1 蒴果处理与播种 蒴果表面先用清水清洗干净，放在75酒精里浸泡3分钟，在酒精灯上快速烧干表面酒精，剖开蒴果，将种子播于培养基上，40天左右种子开始膨大，通过种子萌发，经培养获得大量实生苗。 5.1.2 种子萌发培养基 1/2 MS+10%马铃薯原汁+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。 5.1.3 增殖分化 种子萌发后适时转接，进行增殖分化培养。 DB52/T 9192014 3 5.1.4 增殖分化培养基 MS+(1.02.0 mg/L)6-BA+ (0.10.2 mg/L)NAA+10%马铃薯原汁+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。 5.1.5 壮苗生根 将分化长至2 cm3 cm的小苗适时转接，进行壮苗生根培养。 5.1.6 壮苗生根培养基 MS+（0.51.0 mg/L)NAA+10%马铃薯原汁+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。 5.2 丛生芽培养 5.2.1 外植体获取 选择健壮的种植植株或野生植株的茎段作外植体，也可从无菌瓶苗中选择外植体。 5.2.2 外植体处理 种植或野生植株金线莲用自来水冲洗干净，清理叶、叶苞鞘、根，用肥皂水浸泡20 min，流水冲洗30 min，在超净工作台上用75%酒精消毒30 s，后用0.1%升汞消毒10 min，再用无菌水洗5次，无菌滤纸吸干水分，将植株切为0.5 cm长带节的茎段备用。无菌瓶苗可直接在超净工作台上取出，无菌操作，将植株切为0.5 cm长带节的茎段备用。 5.2.3 不定芽诱导与增殖 将带腋芽的茎段接种于不定芽诱导与增殖培养基中，经继代增殖培养，形成大量丛生芽。 5.2.4 不定芽诱导与增殖培养基 MS+(1.02.0 mg/L)6-BA+ (0.10.2 mg/L)NAA+10%马铃薯原汁+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。 5.2.5 壮苗生根 当丛生芽长至2 cm3 cm时，转入壮苗生根培养。 5.2.6 壮苗生根培养基 MS+（0.5-1.0 mg/L)NAA+10%马铃薯原汁+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH5.8。 5.3 培养条件 光照1000 Lx1500 Lx，光照时间12 h/d ，温度（252）。 5.4 继代次数 原球茎和丛生芽继代控制在68代。 6 商品苗 6.1 商品苗分级 用于种植的苗应无污染，无烂茎，无烂根，叶色正常并展开。商品苗分级标准（见表1） DB52/T 9192014 4 表1 金线莲商品苗分级 分级/项目 根（条） 株高（cm） 茎粗（cm） 优质苗 2 条3 条 5.0 0.25 合格苗 1 条2 条 4.0 0.20 6.2 炼苗 试管苗移栽前将培养瓶放置于与栽培相近的环境中进行炼苗，利用遮光率为80%遮阳网双层遮阴，温度20 28 ，炼苗1周2周。 6.3 出瓶 用镊子从培养瓶中取出组培苗，清水反复漂洗干净，用杀菌液浸根10 min左右。杀菌液应符合GB/T 19630.1有机产品规定。 7 种植环境 符合GB 3095 环境空气质量标准，GB 5084 农田灌溉水环境质量标准，GB 15618土壤环境质量标准。 8 种植设施 8.1 设施准备 金线莲以保护地种植为宜， 可使用温室或大棚等设施种植， 配备遮阳网、 防虫网、 喷雾和灌溉设备。 8.2 薄膜大棚 单栋或连栋大棚。大棚上方和东、西两侧设两层遮光率为80的遮光网。连栋大棚要确保通风，面积不宜超过1500 m2。 8.3 简易棚 用热镀锌钢管（或其它坚固材料）插地建成，棚高度 2.8 m3.5 m。棚上方和东、西两侧覆盖两层遮光率为80的遮光网。 8.4 喷灌系统 安装可以形成雾状的喷头进行喷灌。 8.5 种植苗床 8.5.1 高架苗床 高架苗床,材料选用钢架或其它坚固材料， 架高0.6 m0.8 m，架宽1.0 m1.5 m， 架间距0.4 m0.6 m。 8.5.2 水泥瓦苗床 用砖块支撑离地面高0.2 m0.3 m的水泥瓦苗床，苗床宽1.0 m1.5 m，苗床间距 0.4 m0.6 m。 DB52/T 9192014 5 9 基质 9.1 基质选择 基质用腐殖土、草炭土、碎树皮、碎树叶等按一定比例配制而成（见附录B）。 9.2 基质处理 树皮和树叶粉碎至0.5 cm1 cm大小。充分腐熟，经太阳暴晒23 d，并用1:1000的高锰酸钾溶液喷雾处理。 9.3 基质铺设 9.3.1 将基质铺在种植苗床上，厚约 8 cm10 cm。 9.3.2 高架苗床，先用孔径小于 0.5 cm 的塑料网铺于框架上，再铺上种植基质。 9.3.3 水泥瓦苗床，先用直径 35 cm 的小石子铺于水泥瓦凹沟里，再铺上种植基质。 10 种植 10.1 金线莲种苗 种苗应达到本标准“6 商品苗”的合格种苗质量要求。 10.2 种苗处理 用清水仔细冲洗种苗根部附着的培养基，清洗干净后用1:1000高锰酸钾溶液浸根10 min左右。 10.3 种植季节 金线莲适宜种植季节为每年3月6月。 10.4 种植方式 种植前2天将苗床基质浇透、浇均匀，阴干待用。以株为单位种植，株行距按58 cm810 cm。栽植深度以基质盖过根系与少许基部即可。 11 种植管理 11.1 光照 5月10月需在大棚顶上和东、西两侧面太阳照射到的地方采用两层80的遮阳网遮阴，其他时间用一层80的遮阳网。 11.2 温湿度 金线莲生长适宜温度为20 28 ，空气湿度为6580。 11.3 水分 11.3.1 水源要求符合 GB 5084 农田灌溉水质标准。 DB52/T 9192014 6 11.3.2 浇水以保持基质湿润为宜。一般情况每天上午 9:00 之前喷灌，每天一次；持续干旱季节在下午 17:00 以后再喷灌一次。 11.3.3 雨季应及时开沟排水，避免棚内及四周积水。 11.4 施肥 11.4.1 施肥原则: 可少施或不施肥。 11.4.2 施肥方法：结合浇水进行叶面喷施。 11.4.3 肥料与浓度: 可用磷酸二氢钾、 功能性复合肥、 平衡肥等， 叶面喷施浓度以稀释至 15002000倍为宜。 11.5 除草 适时人工清除杂草。 11.6 病虫害防治 11.6.1 遵循“预防为主、综合防治”的植保方针。 11.6.2 农药的使用应符合GB/T 19630.1 有机产品。 11.6.3 金线莲主要病虫害及防治方法见附录 C 和附录 D。 12 采收与加工 12.1 采收时间 种植56个月后，植株长到1520 cm即可采收，时间一般在1011月。 12.2 采收方法 金线莲全草用药，剔除病株，全草采收，包括根和地上部分。 12.3 加工 将植株清洗干净，60 烘干，干品水分小于12%，置于通风干燥处防潮保存。也可采用微波真空干燥，真空包装或充CO2包装。 DB52/T 9192014 7 A A 附 录 A （资料性附录） 三个物种鉴定 A.1 兴仁金线兰（Anoectochilus xingrenensis Z.H.Tsi et X.H.Jin） 地生草本，具肉质匍匐根状茎，茎肉质，圆柱形，植株高1520 cm；叶25枚，卵形，长25 cm，宽23 cm，上面暗绿色，具57条金黄色脉，近圆形，具柄，叶柄长1.52 cm，基部扩大为包茎鞘；花葶直立，长610 cm，密被具多节的腺柔毛，花序轴具23鞘；总状花序具35朵花；苞片卵状披针形，长11.2 cm，带红色，先端渐尖，背面被短柔毛；花倒置，萼片带红色，具1脉，背面被短柔毛；中萼片卵形，凹陷，长57 mm，宽35 mm，先端急尖，花瓣白色，斜卵形，无毛，长68 mm，宽23 mm，基部稍狭，先端急尖，具1脉，两侧不等；唇瓣倒置，位于下方，外伸呈Y形，爪两侧具48个短齿，较萼片长。基部有距，距长34 mm，基部宽2 mm，蕊柱粗短，长约1 mm。 注：资料来源贵州植物志（第十卷）2004年。 A.2 金线兰（Anoectochilus roxburghii （Wall.）Lindl.） 地生草本，具肉质匍匐根状茎，茎肉质，圆柱形；叶卵形或卵圆形，长1.53.5 cm，宽13 cm，上面暗紫色，有金红绢丝光泽的网脉，背面淡紫红色，先端急尖，基部圆形，叶柄长510 mm，基部扩大为包茎的鞘；总状花序具25朵花，被柔毛，花苞片淡红色，花白色或淡红色，不倒置，萼片背面被柔毛，中萼片卵形，舟状，长约6 mm，与花瓣粘合呈兜状，侧萼片长圆形，花瓣近镰状，唇瓣长约12 mm，呈Y形，前部扩大并2裂，裂片近长圆形，长约6 mm，全缘，中部收狭，具爪，两侧有多条流苏状裂条，基部具圆锥状距，距长约5 mm，上举，末端2浅裂，内面有2枚胼胝体。 注：资料来源贵州植物志（第十卷）2004年。 A.3 台湾银线兰（Anoectochilus formosanus Hayata） 地生草本，具肉质匍匐根状茎，茎肉质，圆柱形；叶24枚，卵形或卵圆形，长2.74 cm，宽2.53.5 cm，先端急尖，基部圆形，骤狭成柄，柄的基部有鞘；叶片上面呈绒毛状墨绿色，具白色美丽的网脉，背面带红色；花茎高约15 cm，红褐色，被毛，下部疏生23枚鞘状苞片；总状花序具35朵花；花苞片卵状披针形，长1 cm，宽3.5 cm，背面被毛；唇瓣位于下方，萼片红褐色，背面被毛，中萼片近圆形，顶部骤狭，先端急尖，长67 mm，宽4.8 mm，凹陷呈舟状；侧萼片长椭圆形，斜歪，长810 mm，宽5 mm，先端急尖；花瓣白色，斜歪的镰状，近先端骤狭呈尾状，长8 mm，宽2.6 mm，与中萼片粘合呈兜状；唇瓣呈Y字形，含距长1.8 mm，基部具圆锥状距，前部扩大并2裂，裂片镰状披针形、菱状长圆形或狭长圆形，白色，长7 mm，宽3 mm，先端钝，中部淡黄色，收狭成其两侧各具5条、略向上弯曲、长5 mm的丝状长流苏裂条的爪；距贴近子房，长4 mm，宽3 mm，其末端2浅裂，内面近末端处具2枚胼胝体。 注：资料来源中国植物志（第十七卷）2006年。 DB52/T 9192014 8 B B 附 录 B （资料性附录） 培养基配制方法 表B.1 MS（Murashige 和 Skoog,1962）培养基的配制 化合物名称 用量 mg/L 化合物名称 用量 mg/L NH4NO3(硝酸铵) 1650 KI（碘化钾） 0.83 KNO3(硝酸钾) 1900 Na2Mo4.2H2O（钼酸钠） 0.25 KH2PO4（磷酸二氢钾） 170 CuSO4.5H2O（硫酸铜） 0.025 MgSO4.7H2O（硫酸镁） 370 CoCl2.6H2O（氯化钴） 0.025 CaCl2（氯化钙） 440 甘氨酸 2 FeSO4.7H2O（硫酸亚铁） 27.8 盐酸硫胺素 VB1 0.4 Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠) 37.3 盐酸吡哆醇 VB6 0.5 MnSO4.4H2O（硫酸锰） 22.3 烟酸 0.5 ZnSO4.7H2O（硫酸锌） 8.6 肌醇 100 H3BO3（硼酸） 6.2 表B.2 1/2MS 培养基的配制 化合物名称 用量 mg/L 化合物名称 用量 mg/L NH4NO3(硝酸铵) 825 KI（碘化钾） 0.83 KNO3(硝酸钾) 950 Na2Mo4.2H2O（钼酸钠） 0.25 KH2PO4（磷酸二氢钾） 85 CuSO4.5H2O（硫酸铜） 0.025 MgSO4.7H2O（硫酸镁） 185 CoCl2.6H2O（氯化钴） 0.025 CaCl2（氯化钙） 220 甘氨酸 2 FeSO4.7H2O（硫酸亚铁） 27.8 盐酸硫胺素 VB1 0.4 Na2-EDTA(乙二胺四乙酸二钠) 37.3 盐酸吡哆醇 VB6 0.5 MnSO4.4H2O（硫酸锰） 22.3 烟酸 0.5 ZnSO4.7H2O（硫酸锌） 8.6 肌醇 100 H3BO3（硼酸） 6.2 DB52/T 9192014 9 C C 附 录 C （资料性附录） 种植基质配比 A.1 75%草炭土+25%碎树皮。 A.2 75%腐殖土+25%碎树皮。 A.3 75%碎树叶+25%碎树皮。 DB52/T 9192014 10 D D 附 录 D （资料性附录） 金线莲主要病害防治表 病害名称 病害说明 防治方法 软腐病 细菌性病害，主要为害中下部内茎和近地表叶片的叶柄。发病初期很难察觉，中期病症在茎基的表皮外出现褐色的坏死斑，叶脉上出现褐色湿腐。植株中下部叶发黄，高温下呈萎蔫状，后期表现为全株蔫枯。 （1）环境控制：棚室环境应空气流通，避免高温高湿； （2）少数植株发病时，立即清除病株； （3）剪刀等用具要严格消毒； （4）可将发病植株拔出，用1.0高锰酸钾溶液浸泡 5 分钟，清洗后单独种植； （5）可用 0.5波尔多液喷施。 猝倒病 主要为镰刀菌危害引起，病苗茎基部出现黄褐色水渍状病斑，很快发展至绕茎一周，病部组织腐烂干枯溢缩呈线状。病势发展迅速，幼苗迅速倒伏死亡，出现猝倒现象。 （1）环境控制：棚室环境应空气流通，避免高温高湿； （2）少数植株发病时，立即清除病株； （3）剪刀等用具要严格消毒； （4）可将发病植株拔出，用1.0高锰酸钾溶液浸泡 5 分钟，清洗后单独种植； DB52/T 9192014 11 E E 附 录 E （资料性附录） 金线莲主要虫害防治表 虫害名称 虫害说明 防治方法 蛞蝓 蛞蝓喜欢温暖潮湿的环境，白天藏匿于水沟杂草或棚架下的泥土或基质等阴暗处，夜间活动，从傍晚开始，晚上1011时达到高峰，啃食植株的新芽、新叶、新根和花，爬过的叶片留有银灰色痕迹。 （1）清洁大棚及四周杂草杂物； （2）经常检查棚架下，夜间手持电筒进行检查，人工捕杀； （3）在蛞蝓经常出没的地方撒施石灰粉，形成隔离带，阻止其向苗床爬行； （4） 用颗粒杀螺剂冠达、 密达 （主要成分四聚乙醛）等，于傍晚进行诱杀。 蜗牛 蜗牛喜欢温暖潮湿的环境，白天藏匿于水沟杂草或棚架下的泥土或基质等阴暗处，晚上出来啃食植株的新芽、新叶、新根和花。 （1）清洁大棚及四周杂草杂物； （2）经常检查棚架下，夜间手持电筒进行检查，人工捕杀； （3）在蜗牛经常出没的地方撒施石灰粉，形成隔离带，阻止其向苗床爬行； （4） 用颗粒杀螺剂冠达、 密达 （主要成分四聚乙醛）等，于傍晚进行诱杀。 小地老虎 3龄前幼虫取食金线莲的心叶、叶片吃成小刻口或呈网孔状，3龄后幼虫将金线莲幼苗从近地面的嫩茎咬断。 （1）大棚通风口设置防虫网，减少害虫进入棚内为害的机会。 （2）设置糖醋液诱杀小地老虎等害虫。糖、醋、酒、水比例为3412，糖醋液须加入少量杀虫剂（乐斯本或三唑磷）白天盖好，晚上掀起。 （3）人工捕杀，清晨在被咬断幼苗附近捕捉到潜伏的小地老虎幼虫。 螨类害虫 主要是红蜘蛛、黄蜘蛛和假蜘蛛类的小虫。一般在干燥的环境和气温高的热天容易发生，初期不易被发现，小虫寄生在叶片进行危害，使受害叶片出现灰白斑点，严重时叶背常发现丝网，使叶片慢慢焦黄凹痕，至萎缩变形。 （1） 人工即时清除虫害植株， 集中处理， 减少虫源。（2）用肥皂泡水喷洒叶片两面，形成一层薄膜，可防止和减少螨类寄生； _