河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及gE基因遗传变异分析.pdf

中国畜牧兽医 ,():C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r yM e d i c i n e河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及g E基因遗传变异分析王林青,赵丽,陈曦艋,吴少峰,韩莹莹,刘芳,金钺,陈红英(河南农业大学动物医学院,郑州 ;郑州师范学院分子生物学郑州市重点实验室,郑州 ;河南牧业经济学院动物医药学院,郑州 ;河南农业大学动物科技学院,郑州 )摘要:【目的】调查河南省猪伪狂犬病病毒(P s e u d o r a b i e sv i r u s,P R V)野毒流行特征及遗传变异情况.【方法】用E L I S A法检测 年从河南省 个不同养殖规模猪场采集的 份血清样本的g E抗体水平;采用P C R法对从 个猪场疑似P R V感染猪群中收集的 份病料进行g E基因扩增,并将阳性病料样品接种S T细胞进行病毒分离、g E全基因测序和遗传进化分析.【结果】血清样品g E抗体总阳性率为 ,从 年的 降至 年的 ,猪场阳性率为 .随着猪场规模增大,猪场阳性率、血清样本阳性率呈下降趋势;商品代养殖场、屠宰场和种猪场的场阳性率、血清样本阳性率依次降低;豫东、豫西、豫南、豫北和豫中血清g E抗体阳性率分别为 、和 ,月阳性率最高,月最低.组织病料样品中P R V阳性率为 (/),从P R V阳性病料样品中共分离出株P R V分离株.g E全基因序列遗传进化分析结果显示,分离株都属于G e n o t y p e 型,且猪群中既有P R V经典株也有P R V变异株.【结论】河南省猪场中仍然存在P R V感染,且同时存在P R V经典株和P R V变异株,本研究结果为河南省猪伪狂犬病的防控与净化提供参考依据.关键词:猪;伪狂犬病病毒(P R V);血清学调查;g E基因;遗传变异中图分类号:S 文献标识码:AD o i:/j c n k i 开放科学(资源服务)标识码(O S I D):收稿日期:基金项目:河南省科技攻关项目(、);河南省自然科学基金面上项目();河南省高校科技创新人才支持计划(HA S T I T );河南牧业经济学院博士启动基金(HNUAHE D F )联系方式:王林青,E m a i l:w a n g l i n t s i n g c o m;赵丽,E m a i l:z h a o l i s q c o m.王林青和赵丽对本文具有同等贡献,并列为第一作者.通信作者金钺,E m a i l:j i n y u e c o m;陈红英,E m a i l:c h h y c o mS e r o l o g i c a l I n v e s t i g a t i o no fP o r c i n eP s e u d o r a b i e sV i r u s I n f e c t i o na n dG e n e t i cV a r i a t i o nA n a l y s i so fg EG e n e i nH e n a nP r o v i n c eWANGL i n q i n g,Z HAOL i,CHE NX i m e n g,WUS h a o f e n g,HANY i n g y i n g,L I UF a n g,J I NY u e,CHE N H o n g y i n g(C o l l e g e o fV e t e r i n a r yM e d i c i n e,H e n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,Z h e n g z h o u ,C h i n a;Z h e n g z h o uK e yL a b o r a t o r yo fM o l e c u l a rB i o l o g y,Z h e n g z h o uN o r m a lU n i v e r s i t y,Z h e n g z h o u ,C h i n a;C o l l e g e o fV e t e r i n a r yM e d i c i n e,H e n a nU n i v e r s i t yo fA n i m a lH u s b a n d r ya n dE c o n o m y,Z h e n g z h o u ,C h i n a;C o l l e g e o fA n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,H e n a nA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,Z h e n g z h o u ,C h i n a)A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】T h e p u r p o s e o ft h i s s t u d y w a st oi n v e s t i g a t e t h e e p i d e m i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c sa n dg e n e t i cv a r i a t i o no fP s e u d o r a b i e sv i r u s(P R V)i ns w i n ei n H e n a nP r o v i n c e【M e t h o d】g Ea n t i b o d y l e v e l sw e r ed e t e c t e db yE L I S Ai n s e r u ms a m p l e s c o l l e c t e d f r o m p i gf a r m s i nH e n a nP r o v i n c ed u r i n g g Eg e n ew a sa m p l i f i e db yP C Ri n s a m p l e s期王林青等:河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及g E基因遗传变异分析f r o m p i gf a r m ss u s p e c t e do fP R V i n f e c t e dp i g s,a n dt h ep o s i t i v es a m p l e sw e r e i n o c u l a t e dw i t hS Tc e l l s f o rv i r u s i s o l a t i o n,g Eg e n e s e q u e n c i n ga n dg e n e t i c e v o l u t i o na n a l y s i s【R e s u l t】T h e t o t a lp o s i t i v er a t eo f g Ea n t i b o d y i ns e r u ms a m p l e sw a s ,w h i c hd e c r e a s e d f r o m i n t o i n T h ep o s i t i v er a t ei np i gf a r m sw a s W i t ht h ei n c r e a s eo fp i gf a r ms i z e,t h ep o s i t i v er a t eo f f a r ma n ds e r u ms a m p l es h o w e dad o w n w a r dt r e n d T h e f a r ma n ds e r u mp o s i t i v er a t e i nc o mm o d i t yf a r m,s l a u g h t e r h o u s ea n dp i gb r e e d i n gf a r md e c r e a s e ds u c c e s s i v e l y T h ep o s i t i v er a t e so fg Ea n t i b o d yi ne a s t e r n,w e s t e r n,s o u t h e r n,n o r t h e r na n dc e n t r a lH e n a nw e r e ,a n d ,r e s p e c t i v e l y T h ep o s i t i v er a t e sw e r et h eh i g h e s t f r o mJ a n u a r y t oM a r c ha n d t h e l o w e s t f r o mO c t o b e r t oD e c e m b e r T h ep o s i t i v e r a t eo fP R Vi nt i s s u es a m p l e sw a s (/)At o t a l o f P R Vi s o l a t e sw e r e i s o l a t e df r o mP R Vp o s i t i v es a m p l e s P h y l o g e n e t i ca n a l y s i sb a s e do nt h eg Ec o m p l e t es e q u e n c e si n d i c a t e dt h a ta l li s o l a t e sb e l o n g e dt oG e n o t y p e a n dt h e r ew e r eb o t hc l a s s i c a ls t r a i n sa n dv a r i a n ts t r a i n s i np i gh e r d s【C o n c l u s i o n】P R Vc l a s s i c a ls t r a i n sa n dP R Vv a r i a n ts t r a i n ss t i l le x i s t e di np i gf a r m si nH e n a np r o v i n c e T h er e s u l t sp r o v i d e dr e f e r e n c e f o r t h ep r e v e n t i o na n dc o n t r o l a n dp u r i f i c a t i o no fP R Vi nH e n a np r o v i n c e K e yw o r d s:p i g;P s e u d o r a b i e sv i r u s(P R V);s e r o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o n;g Eg e n e;g e n e t i cv a r i a t i o n伪狂犬病(P s e u d o r a b i e s,P R)是由伪狂犬病病毒(P s e u d o r a b i e sv i r u s,P R V)引起的多种动物共患的一种急性传染病.猪是P R V的自然储存宿主,一旦感染后呈潜伏感染状态,可终身带毒.猪感染P R V后会引起发热、母猪流产、仔猪神经症状、高死亡率、育肥猪呼吸道症状等临床表现.年 在 匈 牙 利 猪 群 首 先 发 现P R V,后 于 年传入中国.世纪 年代,中国引进了匈牙利B a r t h aK 株,世纪 年代大规模使用基于B a r t h aK 的基因缺失疫苗进行免疫接种,同时严格 执 行“感 染 动 物 和 疫 苗 接 种 动 物 的 区 分(D I VA)”策略,猪伪狂犬病在国内猪场得到了有效控制.然而 年底,猪伪狂犬病在国内已免疫伪狂犬病疫苗的猪场中暴发,首先在华北、华中、东北流行,随后迅速蔓延到国内多个省份 ,对养猪业造成毁灭性打击.研究发现,新一轮暴发的P R V已发生变异,而现有疫苗只能提供部分保护,且抗体阳性率逐年上升,严重制约着养猪业的可持续发展.近年来,从人类急性脑炎病例中分离出P R V,表明人类可能是P R V的潜在宿主,再次引起了学者的关注 .g E作为P R V的一个重要的毒力决定基因,通常利用g E基因缺失来制备P R V疫苗,欧、美国家规定,缺 失g E基 因 的 疫 苗 才 可 被 使 用,用g E E L I S A方 法 即 可 区 分 野 毒 株 和 疫 苗 株,有 利 于P R V的逐步根除.为了解河南省猪伪狂犬病流行动态,分析P R V野毒流行特征及遗传变异情况,本研究 采 用E L I S A鉴 别 诊 断 方 法 对 年月至 年 月从河 南省 个 猪场 采 集 的 份血清进行g E抗体检测,并对P R V分离株g E基因进行遗传进化分析,以期为猪伪狂犬病的防控和相关产品的研发提供参考.材料与方法 材料 细胞、血清和组织病料 猪睾丸细胞(S T)购自中国兽药监察所.采集的 份猪血清样本来源于 年月至 年 月河南省 个地区 个不同规模猪场(包括屠宰场、商品代养殖场和种猪场),根据猪场规模分为小型(头)、中型(头)和大型养猪场(头).份临床病料样品(包含大脑、淋巴结和肺脏),分别采自 年河南省 个规模化猪场疑似患有伪狂犬病的 头病猪,于 保存备用.主 要 试 剂 P s e u d o r a b i e s V i r u sg EA n t i b o d yT e s tK i t购自I D E X XL a b o r a t o r i e s公司;T a qM a s t e r M i x购自南京诺唯赞生物科技有限公司;D L D NA M a r k e r、p MD T载体、大肠杆菌DH 感受态细胞购自宝生物工程(大连)有限公司;柱式D NA抽提试剂盒、D NA凝胶回收试剂盒、柱式质粒D NA提取剂盒购自Om e g a公司;胎牛血清和DMEM培养基购自G i b c o公司.方法 血清学检测按照P s e u d o r a b i e sV i r u s中国畜牧兽医 卷g EA n t i b o d yT e s tK i t说明对采集的血清样本进行g E抗体检测.以S/N值区分感染和接种疫苗的动物(S为样品孔D n m值,N为阴性对照孔D n m值),S/N 时,判为阳性;S/N 时,判为阴性;S/N 时,判定样品可疑且需要重新检测.病料样品P R V的P C R鉴定取组织病料样品,加入适量磷酸盐缓冲液(P B S,p H)研磨、制成匀浆,冻融次,r/m i n离心m i n.收取上清液,利用柱式D NA抽提试剂盒抽提样 品D NA.参 照Z h a n g等 方 法 合 成 靶 向P R Vg E基因的 检测引物,引 物 序 列:g E p F:T G G GA C A C G T T C GA C C T GAT G ;g E p R:C C T T GAT GA C C G T GA C G T A C T ,以病料D N A为模板,进行P C R扩增.P C R反应体系 L:模板L,T a qM a s t e r M i x L,上、下 游 引 物(p m o l/L)各 L,双 蒸 水 补 足 至 L.P C R反应程序:预变性m i n;变性 s,退火 s,伸延 s,共 个循环;伸延 m i n.P C R产物用 琼脂糖凝胶电泳检测.病毒分离P C R鉴定阳性组织样品经 m滤膜过滤后接种S T细胞,并盲传代.当 的S T细胞呈现细胞病变(c y t o p a t h i c e f f e c t,C P E)时,收集病毒细胞液,进行噬斑纯化.用柱式D NA抽提试剂盒提取细胞病毒D NA,用P R V特异性检测引物g E p F/R进行P C R检测.P C R扩增体系、程序同 .P R Vg E全基因克隆及遗传进化分析参照Z h a o等 方法合成扩增g E全基因P C R扩增引物(引 物 序 列:F:G G T G T G G G T G G C G T T T T AT C T ;R:T T T G G T G G G C AT G T C G G AAT G ).利用柱式D NA抽提试剂盒抽提分离株的D NA,以P R V分离株D NA为模板,进行P C R扩增.P C R反应体系 L:模板L,T a qM a s t e r M i x L,上、下游引物(p m o l/L)各L,双蒸水 L.P C R反应程序:预变性m i n;变性 s,退火 s,延伸 s,共 个循环;延伸 m i n.用D NA凝胶回 收 试 剂 盒 回 收P C R产 物,纯 化 后 产 物 与p MD T载体连接后转化大肠杆菌DH 感受态细胞,接种L B肉汤培养基,用柱式质粒D NA提取剂盒提取质粒,筛选阳性克隆送生工生物工程(上海)股 份 有 限 公 司 测 序.应 用D NA S t a r软 件 的E d i t S e q程序对测序结果进行编辑,并用M e g A l i g n程序对P R Vg E基因核苷酸序列进行相似性分析.通过M e g a 软件的C l u s t a lW进行序列比对,并用邻近法(n e i g h b o r j o i n i n g)进行P R Vg E基因系统进化树构建和氨基酸变异位点分析.结果 河南省猪群g E抗体阳性率对 年月至 年 月间河南省 个猪场 份血清样本进行P R V感染调查,E L I S A检测结果显示,份血清样本中 份样本g E抗体为阳性,阳性率为 ;个猪场共有 个猪场检出g E抗体阳性,阳性率为 (表).表 年河南省猪群血清样品P R Vg E抗体检测结果T a b l eD e t e c t i o nr e s u l t so fP R Vg Ea n t i b o d y i ns e r u ms a m p l e so fp i g s i nH e n a np r o v i n c e f r o m t o 年份Y e a r血清S e r u m/份阳性血清P o s i t i v es e r u m/份血清阳性率S e r u mp o s i t i v er a t e/猪场P i gf a r m s/个阳性场P o s i t i v ef a r m s/个场阳性率F a r mp o s i t i v er a t e/合计T o t a l 不同规模猪场g E抗体阳性率对不同规模猪场进行P R V感染调查,结果显示,年采 集 的 份 血 清 样 本 中,大 型 猪 场(头)的血清样本g E抗体阳性率为 ,小型猪场(头)阳性率为 ,随着猪场规模的增大,猪场阳性 率、样本阳性 率呈下降趋 势(表).不同类别场g E抗体阳性率对不同类别场进行P R V感染调查,结果显示,屠宰场血清样本阳性率为 ,商品代养殖场为 ,种猪场为 ,且场阳性率、血清样本阳性率均是商品代养殖场屠宰场种猪场(表).期王林青等:河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及g E基因遗传变异分析表 年不同规模猪场P R Vg E抗体检测结果T a b l eD e t e c t i o nr e s u l t so fP R Vg Ea n t i b o d y i nd i f f e r e n tp i gf a r m s f r o m t o 猪群规模P i gh e r ds i z e/头猪场P i gf a r m s/个阳性场P o s i t i v ef a r m s/个场阳性率F a r mp o s i t i v er a t e/血清S e r u m/份阳性血清P o s i t i v es e r u m/份血清阳性率S e r u mp o s i t i v er a t e/表 年不同类别猪场P R Vg E抗体检测结果T a b l eD e t e c t i o nr e s u l t so fP R Vg Ea n t i b o d y i nd i f f e r e n tp i gf a r m s f r o m t o 类别C a t e g o r y猪场P i gf a r m s/个阳性场P o s i t i v ef a r m s/个场阳性率P o s i t i v er a t e/血清S e r u ms a m p l e s/份阳性血清P o s i t i v es a m p l e s/份血清阳性率P o s i t i v er a t e/屠宰场 S l a u g h t e r h o u s e商品代养殖场 C o mm o d i t yf a r m种猪场 P i gb r e e d i n gf a r m 不同地域、不同月份P R V感染调查结果 年河南省各地区P R Vg E抗体阳性率结果见表,由表可知,开封最高,为 (/);鹤壁最低,为 (/).豫东、豫西、豫南、豫北和豫中的g E抗体阳性率分别为 、和 .表 河南省不同地区P R Vg E抗体阳性率检测结果T a b l eD e t e c t i o nr e s u l t so fP R Vg Ea n t i b o d yp o s i t i v e r a t e i nd i f f e r e n t r e g i o n so fH e n a np r o v i n c e f r o m t o 河南省各地区R e g i o n s i nH e n a np r o v i n c e阳性率P o s i t i v er a t e地市C i t y阳性率P o s i t i v er a t e豫北 (/)安阳 (/)N o r t hH e n a n濮阳 (/)鹤壁 (/)新乡 (/)焦作 (/)豫西 (/)济源 (/)W e s t e r t nH e n a n三门峡 (/)洛阳 (/)豫中 (/)郑州 (/)C e n t r a lH e n a n许昌 (/)平顶山 (/)漯河 (/)豫东 (/)开封 (/)E a s t e r nH e n a n周口 (/)商丘 (/)豫南 (/)南阳 (/)S o u t hH e n a n驻马店 (/)信阳 (/)中国畜牧兽医 卷对 年不同月份采集的猪血清样本进行P R V调查,结果见表,月份血清g E抗体阳 性 率 最 高,、年 阳 性 率 分 别 为 、;月份最低,、年阳性率分别为 、.其中,豫南、豫北在 、年月阳性率最高;豫东、豫西在 年月、年月阳性率最高;豫中在 、年月阳性率最高.表 年河南省各地区不同月份P R Vg E抗体阳性率检测结果T a b l eD e t e c t i o nr e s u l t so fP R Vg Ea n t i b o d yp o s i t i v e r a t e i nd i f f e r e n tm o n t h s i nH e n a np r o v i n c e f r o m t o 年份Y e a r月份M o n t h总阳性率T o t a lp o s i t i v er a t e河南省各地区阳性率P o s i t i v er a t e i nd i f f e r e n t r e g i o n so fH e n a np r o v i n c e豫东E a s t e r nH e n a n豫西W e s t e r t nH e n a n豫南S o u t hH e n a n豫北N o r t hH e n a n豫中C e n t r a lH e n a n (/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)(/)组织样品P R V分离及g E全基因测序P C R检测结果显示,份(,/)临床组织样品为P R V阳性.阳性病料样品接种S T细胞,盲传代后出现典型的P R V细胞病变.用P R V特异性检测引物进行P C R检测,证实所分离的病毒为P R V.将分离的株P R V毒株分别命名为:HN L L,HN LH,HN L Y,HN YH,HN HX,HN MY,HN W Z,HN X T和HN Y Y.测序结果显示,HN YH株P R Vg E全基因序列全长为 b p,其余株P R Vg E全基因序列全长均 b p.P R Vg E基因核苷酸序列相似性比对及遗传进化分析株P R V分离株g E基因核苷酸序列相似性为 ,与 株P R V参考株相似性为 .基于g E基因构建的系统进化树结果见图,结合g E蛋白中独特的氨基酸变异可用作遗传进化分析中区分P R V基因型的分子标记,P R V毒 株 分 为个 基 因 型:G e n o t y p e和G e n o t y p e.来自欧美的 个P R V毒株主要为G e n o t y p e 型,而G e n o t y p e 型主要由来自中国和亚洲其他国家的 个P R V毒株构成.G e n o t y p e主 要 分 为 两 大 簇:C l a s s i c a lP R V和V a r i a n tP R V.本研究中的HN YH分离株属 于V a r i a n tP R V,与V a r i a n tP R V簇内参考毒株g E基因核苷酸序列相似性为 ,其余株分离株属于C l a s s i c a lP R V,与C l a s s i c a lP R V簇内参考毒株g E基 因 核 苷 酸 序 列 相 似 性 为 .期王林青等:河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及g E基因遗传变异分析,本研究分离获得的P R V经典株;,本研究分离获得的P R V变异株,P R Vc l a s s i c a l s t r a i n s i s o l a t e d i nt h i ss t u d y;,P R Vv a r i a n t s t r a i n s i s o l a t e d i nt h i ss t u d y图基于g E基因构建的系统进化树F i g P h y l o g e n e t i c t r e eb a s e do ng Eg e n e P R V分离株g E氨基酸序列分析P R V分离株g E氨基酸序列比对结果见图,与G e n o t y p e 型毒株相比,株G e n o t y p e型毒株有个氨基酸插入,位 于(D/n o i n s e r t i o n s),以 及 个氨 基 酸 突 变,分 别 位 于(D/Y N)、(N D/N)、(V L)、(A S/A)、(R M)、(T S),(R/Q L),(L A),(A D),(G R),(R H),(A I/V),(S A)、(V A/T)、(A P)、(S/N N)、(N M/N/H)和 (A S/A/V).株P R V经 典 株 的 氨 基 酸 突 变 位 于 (A P)和 (P S/P).此外,河南省经典株独有的氨基酸突变位于 (D G/D);V a r i a n tP R V簇内 株P R V变异株中有个氨基酸插入,位于 (Di n s e r t i o n),以 及个 氨 基 酸 突 变,分 别 位 于(G D)、(V I/V)和 (G S/G).中国畜牧兽医 卷黑色矩形框为本研究中获得的P R V分离株T h eb l a c kr e c t a n g l eb o xw a s t h eP R Vi s o l a t eo b t a i n e d i nt h i ss t u d y图P R V毒株g E氨基酸突变位点F i g g Ea m i n oa c i dm u t a t i o ns i t eo fP R Vs t r a i n讨论本研究对 年河南省 个地区 个规模化猪场的 份血清样本进行g E抗体检测,结果表明,血清总阳性率为 ,猪场总阳性率为 .和 年血清样本阳性率分别为 和 ,表明河南省猪伪狂犬病疫情仍存在,但呈现下降趋势,且低于解伟涛等 报 道 的 ()、()、()、()和 年()g E抗体血清阳性率.此外,年种猪场的血清样本阳性率为 ,不仅远低于同时期屠宰场和商品代养殖场,而且也低于 年河南省成年种猪()和后备种猪()的血清样本阳性率.表明近年来通过补充阴性后备种猪和自然淘汰阳性种猪,降低了种猪群的带毒率,有利于猪伪狂犬病的净化.不同规模猪场的g E抗体检测结果发现,阳性率呈现小型中型大型猪场,这表明规模更大的猪场在猪伪狂犬病的防治上表现更好,可能是受益于更严格的生物安全措施.年底,国家统计局河南省调查总局发布的统计数据显示,河南省生猪存栏呈现出明显的南东中北西趋势.虽然南部和东部的猪群较大,但个别城市血清样本阳性率反而较低,如位于豫东的周口在省内存栏排名第二,抗体阳性率为 (/),位于豫南的南阳 在 省 内 存 栏 排 名 第 三,g E抗 体 阳 性 率 为 (/).进一步证实了规模较大的猪场具有更严格的生物安全措施而受益,如良好的硬件设施(猪舍安装空气过滤装置),日常生物安全防护和严格执行科学免疫程序等.据报道P R V感染与季节性和区域性相关.本研究发现,猪伪狂犬病感染高峰期在 、年分别是月和月,而 月感染较低,符合猪伪狂犬病在一年四季均能发生但寒冷的冬春季较为多发的特期王林青等:河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及g E基因遗传变异分析点.年河南省豫东、豫西、豫南、豫北、豫中各区域血清阳性率不一致,表明随着种猪场净化措施的实施,逐步净化策略可以扩大到区域性防治和省内联合净化.本研究分离获得了株P R V毒株,g E基因遗传进化分析结果显示,大多数来自中国和亚洲的P R V毒株处于一个相对独立的分支,亲缘关系较近,与欧美P R V毒株亲缘关系相对较远.欧美的P R V毒株聚为G e n o t y p e型,而中国和亚洲其他国家的P R V毒株聚成G e n o t y p e型.姜平 发现新暴发的P R V与以前流行的P R V毒株相比,在基因和蛋白水平上发生了变异.有研究报道P R Vg E氨 基 酸 序 列 的 第、位 均 插 入 天 冬 氨 酸(D),而第 位氨基酸插入天冬氨酸是P R V变异 毒 株 的 一 个 特 征,这 是 由g E基 因 第 位的碱基插入造成的.在本研究中,G e n o t y p e中 的 毒 株 除 了Y a n g s a n S o u t hK o r e a AY 和 来 自 中 国 的F a C o w A F 外,其他毒株都在(D/n o i n s e r t i o n s)插入氨基酸,这可能是猪伪狂犬病在 世纪 至 世纪 年代暴发后亚洲猪群中传播的P R Vg E基因的特征.年中国新暴发的P R V毒株和以前流行的P R V毒株分别组成了G e n o t y p e的两个小簇,V a r i a n tP R V和C l a s s i c a lP R V.属于V a r i a n tP R V的 株P R V变 异 株 有个 氨 基 酸 插 入 位 于 (Di n s e r t i o n)和个 氨 基 酸 突 变 分 别 位 于(G D)、(V I/V)和 (G S/G).推测这可能是新暴发的P R V变异毒株的特点,也符合中国P R V株 独 立 进 化 导 致 变 异 株 出 现 的 观 点 .年的湖南省血清学调查分离株中也出现株P R V经典株.今后P R V是否会恢复为经典毒株,尚需进一步研究.结论 年间河南省猪场中仍然存在猪伪狂犬病,分离获得的株P R V分离株既有经典株也有变异株,都属于G e n o t y p e 型,其中株P R V经典 株 与C l a s s i c a lP R V簇 内 其 他 毒 株 相 比,于 (D G/D)处存在独特的氨基酸突变.参考文献(R e f e r e n c e s):殷震,刘景华动物病毒学M 版北京:科学技术出版社,Y I N Z,L I U J H A n i m a l V i r o l o g yM n de d B e i j i n g:S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y P r e s s,(i nC h i n e s e)童光志,陈焕春伪狂犬病流行现状及我国应采取的防制措施J中国兽医学报,:T ON GGZ,CHE N H C P r e v a l e n c eo fP s e u d o r a b i e sa n dp r e v e n t i v e m e a s u r e st ob et a k e ni n C h i n aJC h i n e s eJ o u r n a lo fV e t e r i n a r yS c i e n c e,:(i nC h i n e s e)RU IW,B A IC,S UNJ,e t a l E m e r g e n c eo fv i r u l e n tP s e u d o r a b i e sv i r u si n f e c t i o ni n N o r t h e r n C h i n aJJ o u r n a l o fV e t e r i n a r yS c i e n c e,():L I UQ,KUAN GY,L IY,e t a l T h e e p i d e m i o l o g ya n dv a r i a t i o n i nP s e u d o r a b i e s v i r u s:Ac o n t i n u i n gc h a l l e n g et o p i g s a n d h u m a n sJV i r u s e s,():Z HANGC,C U IH,Z HAN GW,e t a l E p i d e m i o l o g i c a l i n v e s t i g a t i o no fP o r c i n eP s e u d o r a b i e sv i r u si n H e b e i p r o v i n c e,C h i n a,JF r o n t i e r s i nV e t e r i n a r yS c i e n c e,:TANL,YA OJ,YANG Y,e t a l C u r r e n ts t a t u sa n dc h a l l e n g e o fP s e u d o r a b i e sv i r u s i n f e c t i o n i nC h i n aJV i r o l o g i c aS i n i c a,():B OZ,L IX Ar e v i e wo fP s e u d o r a b i e sv i r u sv a r i a n t s:G e n o m i c s,v a c c i n a t i o n,t r a n s m i s s i o n,a n d z o o n o t i cp o t e