T∕SDJKR 002-2022 阿胶中驴皮源性成分鉴定方法 气相色谱法.pdf

ICS 67.050 X 04 T/SDJKR 团 体 标 准 T/SDJKR 00200220222022 阿胶中驴皮源性成分鉴定方法阿胶中驴皮源性成分鉴定方法 气相色谱法气相色谱法 Identification of donkey skin derived components in Ejiao Gas chromatography method 20222022- -0303- -3131 发布发布 20222022- -0404- -0101 实施实施 山东健康肉产业联合会 发布发布 I 全国团体标准信息平台T/SDJKR 0022022 前前 言言 本文件按照新版 GB/T1.1-2020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东健康肉产业联合会提出并归口。 本文件起草单位：聊城大学、山东省农业科学院畜牧兽医研究所、东阿阿胶股份有限公司、聊城市食品药品检验检测中心、山东省临清市康庄镇畜牧兽医站、平阴县农业农村局。 本文件主要起草人：王会、李兰杰、刘桂芹、冯秀颜、张伟、嵇传良、于杰、杜兴兰、王长法、刘文强、周苗苗、李艳、邢敬亚、朱明霞、马青山、李孟孟、赵敏。全国团体标准信息平台T/SDJKR 0022022 阿胶中驴皮源性成分鉴定方法阿胶中驴皮源性成分鉴定方法 气相色谱法气相色谱法 1 1 范围范围 本文件规定了试验原理、试剂和材料、仪器设备、分析步骤和检测结果的分析与判定。 本文件适用于阿胶中驴皮源性成分的鉴定方法，其它含有驴皮源性的相关食品。 2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 术语和定义术语和定义 本文件无专用术语和定义。 4 4 试验原理试验原理 样品经乙酸乙酯提取其中的脂肪后，在碱性条件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，经气相色谱分析，建立阿胶总脂肪酸的指纹图谱，测定脂肪酸棕榈油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸含量。 5 5 试剂和材料试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 5.1 试剂试剂 5.1.1 5.1.1 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。 5.1.25.1.2 正己烷（C6H14）：色谱纯。 5.1.35.1.3 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.1.4 5.1.4 无水硫酸钠（Na2SO4）：使用前于120烘烤4 h。 5.1.5 5.1.5 氯化钠（NaCl）。 5.1.6 5.1.6 氢氧化钾（KOH）。 5.2 5.2 试剂配置试剂配置 5.2.1 5.2.1 饱和氯化钠溶液：称取 360 g 氯化钠溶解于1.0 L 水中，搅拌溶解，澄清备用。 5.2.2 5.2.2 氢氧化钾甲醇溶液（2 mol/L）：将13.1 g 氢氧化钾溶于100 mL无水甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸钠干燥，过滤，即得澄清溶液。 5.3 5.3 标准品标准品 全国团体标准信息平台T/SDJKR 0022022 脂肪酸甲酯混合标准品：见资料性附录A。 5.4 5.4 标准溶液配置标准溶液配置 混合脂肪酸甲酯标准溶液：取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至 10 mL 容量瓶中，用正己烷稀释定容，贮存于10 以下，保存备用。 6 6 仪器设备仪器设备 6.1 6.1 高速粉碎机。 6.2 6.2 气相色谱仪：具有氢火焰离子检测器（FID）。 6.3 6.3 毛细管色谱柱：70% 氰丙基聚硅氧烷，柱长 100 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.2 m。 6.4 6.4 恒温水浴：控温范围 40 100 ，精度 1 。 6.5 6.5 分析天平：感量为 0.01 g和 0.00001 g。 6.6 6.6 旋转蒸发仪。 7 7 分析步骤分析步骤 7.1 7.1 试样的制备试样的制备 试样使用高速粉碎机粉碎。制备过程中，应避免试样污染。 7.2 7.2 试样前处理试样前处理 7.2.17.2.1 油脂的提取油脂的提取 检测样品经高速粉碎机粉碎后，称取粉末 10.0 g 置于 250 mL 圆底烧瓶中，加入 100 mL 乙酸乙酯常温并搅拌 24 h，经过抽滤得滤液，滤液用旋转蒸发仪进行旋蒸，回收溶剂后得到油脂，20 保存备用。 7.2.2 7.2.2 油脂的水解、甲酯化油脂的水解、甲酯化 取 10.0 mg 油脂，加入 2.0 mL 14%三氟化硼-甲醇（质量比）溶液，再加入 3 滴 2,2-二甲基丙烷进行除水，60 水浴 30 min，使脂肪酸完全甲酯化。冷却后加入正己烷 1.0 mL、水 1.0 mL 充分震荡，静置分层后吸取上层有机层，加入 0.1 mL 浓度 400 ug/mL 的十七烷酸甲酯正己烷溶液 0.1 ml 做内标，使用氮吹仪完全吹干溶剂后，加入 400 L 正己烷溶解定容，准备气相色谱测定。 7.3 7.3 测定测定 7.3.1 7.3.1 色谱参考条件色谱参考条件 气相色谱仪，毛细管色谱柱，自动进样器；进样口温度：280 ，火焰离子检测器（FID）温度：260 ；柱升温程序：140 保持 5 min，140 240 ，4 /min；载气（高纯氮气）1.0 mL/min；进样量：1 L，分流比：1:40。 7.3.2 7.3.2 试样测定试样测定 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 0022022 在上述色谱条件下将脂肪酸标准测定液及试样测定液分别注入气相色谱仪，得各色谱峰出峰时间及峰面积。通过与 37 种脂肪酸甲酯色谱图对比，定性、定量分析阿胶油脂中各脂肪酸的种类、相对含量。 8 8 检测结果的分析与判定检测结果的分析与判定 8.1 8.1 分析结果的表述分析结果的表述 试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比 Yi 按下式计算， 通过测定相应峰面积对所有成分峰面积总和的百分数来计算给定组 i 的含量： Yi =AsiFiAsiFi% 式中： Yi-试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（%）； Asi-试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积； Fi-脂肪酸甲酯 i 转化成脂肪酸的系数，分子量之比； Asi-试样测定液中各脂肪酸甲酯的峰面积之和。 结果保留 3 位有效数字，分析棕榈油酸（C16:1）和肉豆蔻酸（C14:0）相对含量。 8.28.2 分析结果的判定分析结果的判定 气相色谱法所构建的阿胶中总脂肪酸成分的指纹图谱，包含了样本中脂肪酸的所有信息，可以将待测样品中总脂肪酸成分与标准的阿胶中总脂肪酸成分的指纹图谱对比，进行定性分析。 阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱见附录 B。 通过计算，若棕榈油酸（C16:1）相对含量2.15%，且肉豆蔻酸（C14:0）0.8%，判为阳性，即样品中检测出驴皮源性成分；反之为阴性。 3 全国团体标准信息平台T/SDJKR 0022022 附附 录录 A A （资料性附录）（资料性附录） 脂肪酸甲酯脂肪酸甲酯混合混合标准品标准品色谱图色谱图 脂肪酸甲酯混合标准品的气相色谱图见图A.1。 Component 1. Butyric acid methyl ester(C4:0) 2. Caproic acid methyl ester(C6:0) 3. Caprylic acid methyl ester(C8:0) 4. Capric acid methyl ester(C10:0) 5. Undecanoic acid methyl ester(C11:0) 6. Lauric acid methyl ester(C12:0) 7. Tridecanoic acid methyl ester(C13:0) 8. Myristic acid methyl ester(C14:0) 9. Myristoleic acid methyl ester(C14:1) 10. Pentadecanoic acid methyl ester(C15:0) 11. Cis-10-Pentadecenoic acid methyl ester(C15:1) 12. Palmitic acid methyl ester(C16:0) 13. Palmitoleic acid methyl ester(C16:1) 14. Heptadecanoic acid methyl ester(C17:0) 15. Cis-10-Heptadecenoic acid methyl ester(C17:1) 16. Stearic acid methyl ester(C18:0) 全国团体标准信息平台 T/SDJKR 0022022 17. Elaidic acid methyl ester(C18:1n9t) 18. Oleic acid methyl ester(C18:1n9c) 19. Linolelaidic acid methyl ester(C18:2n6t) 20. Linoleic acid methyl ester(C18:2n6c) 21. Arachidic acid methyl ester(C20:0) 22. Y-Linolenic acid methyl ester(C18:3n6) 23. Cis-11-Eicosenoic acid methyl ester(C20:1) 24. Linolenic acid methyl ester(C18:3n3) 25. Heneicosanoic acid methyl ester(C21:0) 26. Cis-11,14-Eicosadienoic acid methyl ester(C20:2) 27. Behenic acid methyl ester(C22:0) 28. Cis-8,11,14-Eicosenoic acid methyl ester(C20:3n6) 29. Erucic acid methyl ester(C22:1n9) 30. Cis-11,14,17-Eicosadienoic acid methyl ester(C20:3n3) 31. Tricosanoic acid methyl ester(C23:0) 32. Methyl cis-5,8,11,14-eicosatetraenoic acid methyl ester(C20:4n6)* 33. Cis-13,16-Docosadienoic acid methyl ester(C22:2) 34. Lignoceric acid methyl ester(C24:0) 35. Cis-5,8,11,14,17-Eicosenoic acid methyl ester(C20:5n3) 36. Nervonic acid methyl ester(C24:1) 37. Cis-4,7,10,13,16,19-Docosadienoic acid methyl ester(C22:6n3) 图图A.1 A.1 脂肪酸甲酯混合标准品脂肪酸甲酯混合标准品的气相色谱图的气相色谱图 5 全国团体标准信息平台T/SDJKR 0022022 附附 录录 B B （资料性附录）（资料性附录） 阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱 阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱见图 B.1 。 图图B.1 B.1 阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱阿胶与驴皮中脂肪酸气相色谱指纹图谱 _ 全国团体标准信息平台