BD--Pharmingen-产品专题.ppt

主要内容nBD Pharmingen 简单介绍nBD Pharmingen 产品分类nBD Pharmingen 特色技术第1页/共30页BD Pharmingen 简介nBD公司成立于1897年，财富周刊500强n公司的业务分为三大类：BD医疗系统 BD生物科学系统 BD临床实验室系统n产品丰富，足迹遍及世界六大洲第2页/共30页BD Pharmingen 简介nBD Biosciencens BD Immunocytometry Systems(IS)BD Pharmingen Discovery Labware BD Clontechn分子生物学、细胞生物学、免疫学、流式細胞分析技术等领域n为生命科学的基础研究和临床应用，提供全方位強有力的支援和协助。第3页/共30页BD Pharmingen 简介nBD Pharmingen是华人在美国最成功的生物公司n涉及领域：免疫学，细胞生物学，分子生物学n流式抗体和基于流式平台开发的产品种类日益丰富，拥有全球领先科技和多项专利，与高速发展的研究前沿保持一致第4页/共30页免疫学问题n产生哪些BRM,以及由何种类型的细胞产生?n这些细胞的数目和产生频率?n体外分析抗原特异性 T cells?n对一个样品同时分析多种BRM(multiplexing)?第5页/共30页BD Pharmingen产品特色nPMG高品质的流式产品在BD和Beckman Coulter的流式细胞仪上都能得到完美的检测结果。n Pharmingen优势在于免疫学领域，不仅是流式。n直标型抗体，FITC,PE,APC等特异性灵敏性好n抗体涉及多个物种，常规抗体齐全。n抗体效价很高。n许多产品具有独家的专利产权。第6页/共30页BD Pharmingen常见抗体nICC：免疫细胞化学(甩片)nIHC：免疫组织化学nIHC(F)*：免疫组织化学-甲醛固定样品（需抗原修复）nIHC(Fr)：免疫组织化学-冰冻切片 nIHC(P)：免疫组织化学-石蜡切片 nIHC(Zn)：免疫组织化学-锌固定nIC/FCM：胞内染色（流式细胞分析）nIctrl：同型对照 第7页/共30页BD Pharmingen 流式抗体标记缩写缩写 中文名中文名 标记标记 em(nm)FITC 异硫氰酸荧光素 直标 530PE 藻红蛋白 直标 575APC 别藻蓝蛋白 直标 660PerCP 多甲藻素叶绿素 直标 679PerCPCy5.5 多甲藻素-叶绿素-花青甙5.5 直标 694Biotin 生物素 间标，需加avidin/streptavidin标记的二抗Purified 未标记，间接法检测，需加荧光标记的二抗第8页/共30页BD Pharmingen 产品分类第9页/共30页BD Dimer X nTCR不能自动与Ag结合，Ag必须被摄取、加工，与MHC结合为复合物由APC（DC、B细胞、巨噬细胞）呈递给T细胞。nMHC Class I 将Ag（胞内）呈递给CD8+T 细胞 产生细胞毒性免疫反应nMHC Class II 将Ag（胞外）呈递给CD4+T cells 引起细胞因子分泌和Ig的产生第10页/共30页BD Dimer X nMHC Class I病毒、肿瘤细胞等胞内基因编码的Ag经加工后的肽段或者胞内寄生细菌产生的Ag经加工后的肽段810 aa 的Ag肽段在ER中与MHC I分子结合MHC I/肽复合物由Golgi 转运到细胞表面，Ag被呈递给CD8+T细胞nMHC Class II胞外蛋白经过加工后的抗原肽段，比MHC I分子结合的肽段长且结构复杂MHC II/肽复合物被呈递给CD4+T细胞第11页/共30页Dimer X 结构v b2微球蛋白使 MHC I 分子具有结合肽段的功能v 重组融合蛋白表达于真核细胞系(鼠浆细胞瘤细胞系J558L),具有更好的构象完整性，更容易加载肽段，结构高度稳定。第12页/共30页BD OptEIA特色：特色：F(ab)检测抗体、专用Buffer和稀释体系包装：包装：Kit、Set 和Pair第13页/共30页BD IMAG 磁分离系统抗原-抗体反应磁场原理第14页/共30页BD IMAG 磁分离流程1 向细胞悬液中加入抗体标记的磁珠2 磁珠通过特异性抗体与带有相应抗原的细胞结合3 置于磁场中，与磁珠连接的细胞被磁场吸附4 吸去上清，带有抗原的细胞留在试管里，其他细胞在吸出的上清中正选法:去除上清，将试管移出磁场，分析被磁珠捕获的细胞，即为目的细胞负选法:分析上清，目的细胞在上清液中第15页/共30页BD IMAG 磁分离产品BD IMag：直接标记直接标记磁珠磁珠/间接标记磁珠间接标记磁珠 磁珠包被了针对白细胞亚群表面特异性标志的单抗磁珠包被了针对白细胞亚群表面特异性标志的单抗 磁珠包被了链霉亲和素（磁珠包被了链霉亲和素（streptavidin）在实验系统中加入biotin标记的单抗，磁珠通过streptavidin与biotin标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。第16页/共30页BD ELISPOTELISPOT（酶连免疫斑点）：体外检测单个细胞分泌某特定蛋白的水平和确定产生该特定蛋白的细胞频率的工具。第17页/共30页BD ELISPOTn单细胞水平检测分泌到的胞外细胞因子n动态观察活细胞应答而非检测培养上清、血清、血浆、裂解液（静态）n结果以斑点显示,能计数效应细胞，分析效应分子产生频率n能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达1/300,000n捕获抗体为BD Pharmingen高亲和力、无叠氮钠、低内毒素抗体，不会引起非特异性细胞激活。第18页/共30页ELISA与ELISPOT比较nELISPOT-细胞产生效应分子一分泌出细胞，被包被在板上的抗体直接捕获，灵敏度更高nELISA-细胞产生的效应分子分泌到上清后被稀释，或者被其高亲和力的受体吸收而不被抗体检测到或被蛋白水解酶降解而灵敏度较低ELISA只能检测到分泌的效应分子总量，而不知效应细胞有多少nELISPOT能计数效应细胞，得到单个细胞分泌效应分子的相对量；细胞活化后产生效应分子的变化第19页/共30页BD CBABD Cytometric Bead Array 简称BD CBA，是利用一系列荧光强度不同的微球，同时分析样本中多种成分的流式检测方法。第20页/共30页BD CBAn携带有荧光的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样本孵育后，形成“三明治”复合物。微球在流式细胞仪的FL3通道检测，定性目的蛋白，PE标记的检测抗体在FL2通道来对目的蛋白定量。液相ELISAn流式检测第21页/共30页BD CBA 技术原理 Capture Bead Capture AbBead+Analyte of interestFluorescent detection Ab第22页/共30页CBA检测原理123不同强度红色荧光的捕获微球，在FCM FL3检测不同的目标蛋白PE 标记的检测抗体，在FCM FL2检测。荧光强度即为靶蛋白量456第23页/共30页BD CBA特点n液相中反应,实时检测细胞因子的表达n操作简单（无需包被），省时（3h）n同时同步检测多指标n微量样本(5-50ul)n特异性和灵敏度2-7pg/ml,(20-100pg/ml)n避免由于信号放大的假阳性n更好的线性度和更宽的检测范围n流式细胞仪和CBA软件自动分析第24页/共30页CBA与ELISA比较 ELISAn抗原检测的经典方法n单项检测n每项实验样本用量50-200Ln需要抗原包被n实验时间大于24hn酶-底物背景干扰 BD CBA 多参数检测 样本用量少-50L 操作方便，节省时间 流式细胞仪自动检测 标准曲线自动生成，专用软件自动计算结果 无酶-底物背景干扰 提高检测效率第25页/共30页BD CBA 应用n眼泪等来源珍贵的微量样本(5-10ul)，血清、血浆或培养液上清n细胞凋亡等信号传导通道蛋白n肿瘤研究，疾病诊断、预后判断、病程检测n多参数同时分析nSLE，新生儿脓血症等免疫疾病的监控n药物研发，疫苗研究总体免疫功能分析n免疫性疾病：自身免疫病、过敏等炎症反应，白血病、淋巴瘤、癌症等第26页/共30页BD CBA Flex Set-NewFlex Set微球带有近红外和红色两种荧光，分别在流式细胞仪的FL3（近红外荧光）和FL4（红色荧光）通道检测，通过这个二维矩阵（对应于微球上的特定序号）识别捕获微球，从而定性目的蛋白，PE标记的检测抗体在FL2通道来对目的蛋白定量。第27页/共30页CBA Kit与CBA Flex Set比较 CBA Kitn同时检测5或者6个n捕获微球、标准品、检测抗体、缓冲液和稀释液等全部试剂n灵敏度0.3pg/mln检测范围 0-5000pg/mlnCBA Analysis Software和FCAP Array SoftwarenKit中包括全部试剂CBA Flex Set 1-72个 捕获微球、标准品、检测抗体 灵敏度0.3pg/ml 检测范围 0-5000pg/ml FCAP Array Software 需另购相应的Buffer kit第28页/共30页CBA Kit和CBA Flex Set产品n磷酸化蛋白类n人细胞因子类n大鼠细胞因子类n小鼠细胞因子类第29页/共30页谢谢大家！谢谢大家！第30页/共30页