生化分析仪原理.ppt

检验科检验科 吴吴 迪迪生化分析仪原理生化分析仪原理1临床生化自动分析仪分类按运行速度：按运行速度：按运行速度：按运行速度：1 1大型生化仪速度大型生化仪速度大型生化仪速度大型生化仪速度600test/600test/小时以上小时以上小时以上小时以上2 2中型生化仪速度中型生化仪速度中型生化仪速度中型生化仪速度300-600test/300-600test/小时小时小时小时3 3小型生化仪速度小型生化仪速度小型生化仪速度小型生化仪速度300test/300test/小时以下小时以下小时以下小时以下按仪器结构：按仪器结构：按仪器结构：按仪器结构：1 1流动式自动生化分析仪流动式自动生化分析仪流动式自动生化分析仪流动式自动生化分析仪2 2离心式自动生化分析仪离心式自动生化分析仪离心式自动生化分析仪离心式自动生化分析仪3 3分立式自动生化分析仪分立式自动生化分析仪分立式自动生化分析仪分立式自动生化分析仪分立式自动分析仪的主要部件加样系统加样系统加样系统加样系统比色系统比色系统比色系统比色系统分光系统分光系统分光系统分光系统供排水系统供排水系统供排水系统供排水系统清洗系统清洗系统清洗系统清洗系统操作控制与数据处理系统操作控制与数据处理系统操作控制与数据处理系统操作控制与数据处理系统加样系统试剂仓试剂仓试剂仓试剂仓样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、测定缓冲区、样本回收区）测定缓冲区、样本回收区）测定缓冲区、样本回收区）测定缓冲区、样本回收区）样品取样单元样品取样单元样品取样单元样品取样单元试剂取样单元试剂取样单元试剂取样单元试剂取样单元混合部件混合部件混合部件混合部件比色系统光源光源光源光源比色杯比色杯比色杯比色杯分立式比色转盘分立式比色转盘分立式比色转盘分立式比色转盘比色杯恒温比色杯恒温比色杯恒温比色杯恒温水浴、空气浴、恒温液循环间接加热水浴、空气浴、恒温液循环间接加热水浴、空气浴、恒温液循环间接加热水浴、空气浴、恒温液循环间接加热比色杯类型比色杯类型比色杯类型比色杯类型硬质石英硬质石英硬质石英硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。分光系统干涉滤光片干涉滤光片干涉滤光片干涉滤光片光栅分光式光栅分光式光栅分光式光栅分光式无相差蚀刻凹面光栅无相差蚀刻凹面光栅无相差蚀刻凹面光栅无相差蚀刻凹面光栅后分光集束式光路系统后分光集束式光路系统后分光集束式光路系统后分光集束式光路系统关于双波长检测的优点通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而获得稳定的测定结果。获得稳定的测定结果。获得稳定的测定结果。获得稳定的测定结果。自动生化分析仪的工作程序计算机进行计算计算机进行计算打印机打印结果打印机打印结果光电感应器检测光电感应器检测样样本本比比色色杯杯比比色色杯杯试试剂剂1比比色色杯杯搅搅拌拌延迟延迟试试剂剂2比比色色杯杯比比色色杯杯搅搅拌拌反应反应比比色色传传输输传输传输自动分析仪的基本分析方法终点法终点法终点法终点法（1 1点）终点法和点）终点法和点）终点法和点）终点法和2 2点终点法点终点法点终点法点终点法速率法速率法速率法速率法速率法和速率法和速率法和速率法和2 2点速率法（固定时间法）点速率法（固定时间法）点速率法（固定时间法）点速率法（固定时间法）终点法被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。的标准曲线。的标准曲线。的标准曲线。通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计算出该标本中待测物的浓度。算出该标本中待测物的浓度。算出该标本中待测物的浓度。算出该标本中待测物的浓度。终点法终点法终点法终点法终点法终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两点终点法。点终点法。点终点法。点终点法。对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点终点法。终点法。终点法。终点法。对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点。此即两点终点法。点。此即两点终点法。点。此即两点终点法。点。此即两点终点法。本质均为终点法。本质均为终点法。本质均为终点法。本质均为终点法。终点法反应曲线举例（单试剂）终点法反应曲线举例（单试剂）终点法反应曲线举例（双试剂）终点法反应曲线举例（双试剂）终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）速率法速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）。连续监测速率法：在可见光区连续监测速率法：在可见光区连续监测速率法：在可见光区连续监测速率法：在可见光区(GGT(GGT、ALPALP：405nm405nm黄色黄色黄色黄色)或紫外（或紫外（或紫外（或紫外（HBDHHBDH、LDHLDH、ALTALT：340nm340nm）在一段时间内）在一段时间内）在一段时间内）在一段时间内连续监测某一物质的生成连续监测某一物质的生成连续监测某一物质的生成连续监测某一物质的生成(或消耗的或消耗的或消耗的或消耗的)速率，计算待测物的速率，计算待测物的速率，计算待测物的速率，计算待测物的活性，一般用于样本中酶活性的检测。活性，一般用于样本中酶活性的检测。活性，一般用于样本中酶活性的检测。活性，一般用于样本中酶活性的检测。酶促反应，在一定条件和测定范围内，当酶促反应，在一定条件和测定范围内，当酶促反应，在一定条件和测定范围内，当酶促反应，在一定条件和测定范围内，当KmKm底物浓底物浓底物浓底物浓度，符合零级速率法，底物消耗度，符合零级速率法，底物消耗度，符合零级速率法，底物消耗度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反生成的速率只与催化反生成的速率只与催化反生成的速率只与催化反应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值（即（即（即（即KK值或值或值或值或factorfactor）连续监测速率法的反应曲线两点速率法两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。速率法的吸光度计算速率法吸光度计算：速率法吸光度计算：速率法吸光度计算：速率法吸光度计算：如读点为如读点为如读点为如读点为21-26;21-26;用最小二乘法，得到测光点用最小二乘法，得到测光点用最小二乘法，得到测光点用最小二乘法，得到测光点21-2621-26间每分钟吸光度的变化量。间每分钟吸光度的变化量。间每分钟吸光度的变化量。间每分钟吸光度的变化量。两点速率法吸光度计算两点速率法吸光度计算两点速率法吸光度计算两点速率法吸光度计算:如读点为如读点为如读点为如读点为21-26;T21-26;T为：为：为：为：(26-21)(26-21)点间隔的时间点间隔的时间点间隔的时间点间隔的时间(A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T(A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T定标方法对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立一条标准曲线。一条标准曲线。一条标准曲线。一条标准曲线。速率法检测的酶类可以采用理论因数法（速率法检测的酶类可以采用理论因数法（速率法检测的酶类可以采用理论因数法（速率法检测的酶类可以采用理论因数法（KK因数或因数或因数或因数或FactorFactor法），不过法），不过法），不过法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法）目前，大多数实验室对酶类（速率法）目前，大多数实验室对酶类（速率法）目前，大多数实验室对酶类（速率法）测试亦采用标准液校正测试亦采用标准液校正测试亦采用标准液校正测试亦采用标准液校正FactorFactor的方式，以消除仪器和试的方式，以消除仪器和试的方式，以消除仪器和试的方式，以消除仪器和试剂的系统误差。剂的系统误差。剂的系统误差。剂的系统误差。定标方法2点定标两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的试剂。曲线的方程为：试剂。曲线的方程为：试剂。曲线的方程为：试剂。曲线的方程为：Y=AXY=AX对于一些特殊试剂如：对于一些特殊试剂如：对于一些特殊试剂如：对于一些特殊试剂如：KK，NaNa，CLCL，因水中痕量离子浓，因水中痕量离子浓，因水中痕量离子浓，因水中痕量离子浓度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的方程为：方程为：方程为：方程为：Y=AX+BY=AX+B。2点定标的标准曲线2点定标的标准曲线定标方法多点定标多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：SPLINESPLINE或或或或LOGIT-LOGLOGIT-LOG法。法。法。法。对于一些通过对于一些通过对于一些通过对于一些通过（胶乳增强）（胶乳增强）（胶乳增强）（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多免疫比浊法测定的试剂，多免疫比浊法测定的试剂，多免疫比浊法测定的试剂，多为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较窄。窄。窄。窄。多点定标的标准曲线多点定标的标准曲线多点定标的标准曲线自动生化分析仪的操作控制系统仪器操作和控制软件的功能：仪器操作和控制软件的功能：仪器操作和控制软件的功能：仪器操作和控制软件的功能：（1 1）设置系统参数）设置系统参数）设置系统参数）设置系统参数（2 2）设置项目参数）设置项目参数）设置项目参数）设置项目参数（3 3）设置试剂参数）设置试剂参数）设置试剂参数）设置试剂参数（4 4）设置校准品和质控品参数）设置校准品和质控品参数）设置校准品和质控品参数）设置校准品和质控品参数（5 5）实施校准和质控测试）实施校准和质控测试）实施校准和质控测试）实施校准和质控测试（6 6）进行样品测试）进行样品测试）进行样品测试）进行样品测试（7 7）结果查询）结果查询）结果查询）结果查询（8 8）反应全程监控）反应全程监控）反应全程监控）反应全程监控（9 9）执行维护）执行维护）执行维护）执行维护自动生化分析仪的上机参数生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程序，主要包括序，主要包括序，主要包括序，主要包括试剂量、样本量、测定方法、校准方法、试剂量、样本量、测定方法、校准方法、试剂量、样本量、测定方法、校准方法、试剂量、样本量、测定方法、校准方法、反应时间、测定波长和控制因素反应时间、测定波长和控制因素反应时间、测定波长和控制因素反应时间、测定波长和控制因素等。通常各个机型性能等。通常各个机型性能等。通常各个机型性能等。通常各个机型性能不同，参数设置也不同。不同，参数设置也不同。不同，参数设置也不同。不同，参数设置也不同。具体情况可上机观看。具体情况可上机观看。具体情况可上机观看。具体情况可上机观看。2024年5月2日37