第一篇第四章动物细胞培养反应器.pptx

第一篇第四章动物细胞培养反应器动物细胞培养方法动物细胞培养方法 贴壁培养(单层细胞培养)分散的细胞悬浮在培养瓶中很快分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时几十分钟至几小时)就贴就贴附在瓶壁上，附在瓶壁上，称为细胞贴壁，称为细胞贴壁，贴壁后的细胞形态形成多态贴壁后的细胞形态形成多态性，性，呈单层生长，呈单层生长，所以此法又叫单层细胞培养。所以此法又叫单层细胞培养。悬浮培养 细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，不贴壁，主要用于细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，不贴壁，主要用于悬浮型细胞培养，如悬浮型细胞培养，如淋巴淋巴细和肿瘤细胞的培养。细和肿瘤细胞的培养。固定化培养 一种包埋培养。对两类细胞都适用一种包埋培养。对两类细胞都适用,细胞生长密度高细胞生长密度高,抗抗剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋,贴贴壁型细胞常用胶原包埋。壁型细胞常用胶原包埋。动物细胞培养方法动物细胞培养方法 动物细胞培养可生产得生物制品1、病毒疫苗、病毒疫苗:口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等2、非抗体免疫调节剂、非抗体免疫调节剂:干扰素(IFN)、白介素(IL)等3、多肽生长因子、多肽生长因子:神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)4、酶、酶:组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA)5、激素、激素:红细胞生成素(EPO)、促黄体生成素(LH)6、病毒杀虫剂、病毒杀虫剂7、肿瘤特异性抗原、肿瘤特异性抗原:癌胚抗原癌胚抗原(CEA)8、单克隆抗体、单克隆抗体9、皮肤重植、皮肤重植10、细胞、细胞动物细胞培养技术得应用动物细胞培养技术得应用动物细胞培养技术得应用动物细胞培养技术得应用 动物细胞培养生产生物制品工艺实例 1、组织纤溶酶激活剂生产工艺流、组织纤溶酶激活剂生产工艺流程程细胞单层细胞悬液细胞培养物培养 培养液提取液 层析液浓缩液层析液tPA成品分散分离提取层析纯化浓缩层析精制冻干2.抗抗HBsAS的单克隆抗体生产工艺流程的单克隆抗体生产工艺流程培养液杂种细胞混合物大鼠骨髓瘤免疫大鼠脾淋巴细胞融合融合混合物筛选克隆化杂交瘤克隆系种质培养细胞种质扩大培养分离粗制McAb精制层析液超虑浓缩液冻干McAb精品 动物细胞培养得特点1、细胞生长缓慢细胞生长缓慢,易受微生物污染易受微生物污染,培养时需要抗生素培养时需要抗生素;2、动物细胞较微生物大得多动物细胞较微生物大得多,无细胞壁无细胞壁,机械强度低机械强度低,适应适应环境能力差环境能力差;3、培养过程需氧量少培养过程需氧量少,且不耐受强力通风与搅拌且不耐受强力通风与搅拌;4、在机体中在机体中,细胞相互粘连以集群形式存在细胞相互粘连以集群形式存在;5、培养过程产物分布于细胞内外培养过程产物分布于细胞内外,成本高成本高,产品价格昂贵产品价格昂贵;6、大规模培养时大规模培养时,不可套用微生物反应得经验不可套用微生物反应得经验;7、原代培养细胞一般繁殖原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。代即退化死亡。动物细胞培养得特点动物细胞培养得特点 无论就是贴壁细胞还就是悬浮细胞无论就是贴壁细胞还就是悬浮细胞,深层培养得操作方式可分深层培养得操作方式可分细胞培养得操作方式细胞培养得操作方式分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。分批式操作分批式操作 操作简单、就是最常用得操作方式。分批式培养过程中操作简单、就是最常用得操作方式。分批式培养过程中,细细胞得生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期胞得生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期分批式培养细胞生长曲线分批式培养细胞生长曲线 流加式操作流加式操作 半连续式操作半连续式操作细胞培养得操作方式细胞培养得操作方式 能够调节培养环境中营养物能够调节培养环境中营养物质得浓度。质得浓度。连续操作连续操作 能提高细胞密度，应用于培能提高细胞密度，应用于培养悬浮型细胞。养悬浮型细胞。灌注培养灌注培养 大大提高细胞密度，有助于大大提高细胞密度，有助于产物的表达和纯化。产物的表达和纯化。9大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器通气搅拌式细胞培养反应器通气搅拌式细胞培养反应器通气搅拌式细胞培养反应器通气搅拌式细胞培养反应器动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 气升式细胞培养反应器气升式细胞培养反应器气升式培养系统得优点气升式培养系统得优点:没有移动部件没有移动部件;完全密封完全密封;便于无菌操作便于无菌操作;设计简单设计简单;便于放大生产便于放大生产;氧得转换率高。氧得转换率高。动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 细胞培养流程细胞培养流程动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 中空纤维细胞培养反应器中空纤维细胞培养反应器动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 中空纤维细胞培养反应器中空纤维细胞培养反应器优点优点:培养体积小培养体积小,细胞高密度生长细胞高密度生长;有浓缩产品得功能有浓缩产品得功能;产物纯度高产物纯度高;自动化程度高自动化程度高,细胞生长周期长。细胞生长周期长。缺点缺点:中空纤维价格昂贵中空纤维价格昂贵,生产成本高。生产成本高。动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 微囊细胞培养反应器微囊细胞培养反应器特点特点:细胞密度大;产物浓度高;分离纯化操作经济简单;抗体活性、纯度好动物细胞培养反应器动物细胞培养反应器 微载体微载体细胞培养反应器细胞培养反应器