ELISA在食品检验中的应用.ppt

4/17/2024酶联免疫分析法酶联免疫分析法(ELISA)(ELISA)是把抗原是把抗原抗体反应的特异抗体反应的特异性和酶的高效催性和酶的高效催化作用有机结合化作用有机结合起来的一种非放起来的一种非放射性标记免疫检射性标记免疫检测技术。测技术。ELISA技术流程第1页/共15页4/17/2024ELISA在食品检验中的应用在食品检验中的应用食品中农药残留的检测食品中农药残留的检测食品中药物残留的检测食品中药物残留的检测食品中毒素的检测食品中毒素的检测食品中微生物的检测食品中微生物的检测食品中转基因产品的检测食品中转基因产品的检测食品中其他成分的检测食品中其他成分的检测第2页/共15页4/17/20241.1 食品中农药残留的检测食品中农药残留的检测 自自19831983年以来，年以来，ELISAELISA成为许多国际权威分析机构成为许多国际权威分析机构(如如AOAC)AOAC)分析残留农药分析残留农药的首选方法。有些发达国家，如美国、德国已开发出商品检测试剂盒应用于的首选方法。有些发达国家，如美国、德国已开发出商品检测试剂盒应用于食品、蔬菜和环境中的农药残留的检测分析。食品、蔬菜和环境中的农药残留的检测分析。迄今为止，应用迄今为止，应用ELISAELISA检测食品中的残留农药主要是除草剂、杀菌剂和杀检测食品中的残留农药主要是除草剂、杀菌剂和杀虫剂。虫剂。Clegg Clegg等建立了分析草甘膦的等建立了分析草甘膦的ELISAELISA；余万俊等用抗杀虫脒单克隆抗体为试；余万俊等用抗杀虫脒单克隆抗体为试剂，建立了间接竞争法、直接竞争法和标记抗原竞争法等三种测出大米中杀剂，建立了间接竞争法、直接竞争法和标记抗原竞争法等三种测出大米中杀虫脒的虫脒的ELISAELISA；浙江大学的朱国念等研究出；浙江大学的朱国念等研究出ELISAELISA试剂盒来检测克百威。试剂盒来检测克百威。第3页/共15页4/17/20241.2 食品中药物残留的检测食品中药物残留的检测 为了促进动物生长，预防动物的各种传染病、寄为了促进动物生长，预防动物的各种传染病、寄生虫病的发生，越来越多的激素类兽药、抗菌药、抗生虫病的发生，越来越多的激素类兽药、抗菌药、抗寄生虫药，常常被用作饲料添加剂，小剂量长期喂养寄生虫药，常常被用作饲料添加剂，小剂量长期喂养禽畜水产等动物，导致肉类食品中的兽药残留超标现禽畜水产等动物，导致肉类食品中的兽药残留超标现象日益严重。现在国际上比较重视的残留药物有抗生象日益严重。现在国际上比较重视的残留药物有抗生素、磺胺类、呋喃类、喹喏酮类、激素类和转基因类素、磺胺类、呋喃类、喹喏酮类、激素类和转基因类药物。人们都在寻求适用的检测方法药物。人们都在寻求适用的检测方法第4页/共15页4/17/20248O8O年代后期，年代后期，ELISAELISA在残留分析中发展迅速，在残留分析中发展迅速，吴定等制备了兔抗氨苄西林钠血清，建立了快吴定等制备了兔抗氨苄西林钠血清，建立了快速测定乳中氨苄西林钠含量的速测定乳中氨苄西林钠含量的ELISAELISA方法方法 。20032003年，年，LoomansE LoomansE 等用新霉胺作为免疫原建等用新霉胺作为免疫原建立立ELISAELISA方法同时检测牛奶中的庆大霉素、卡方法同时检测牛奶中的庆大霉素、卡那霉素和新霉素。那霉素和新霉素。第5页/共15页4/17/20241.3 食品中毒素的检测食品中毒素的检测食品中的毒素有三种：食品中的毒素有三种：一、细菌产生的毒素；一、细菌产生的毒素；二、真菌所产生的毒素二、真菌所产生的毒素三、一些动植物中含有天然毒性蛋三、一些动植物中含有天然毒性蛋白。白。第6页/共15页4/17/2024采用辣根过氧化氢酶采用辣根过氧化氢酶(HRP)标准高亲和力的黄曲霉标准高亲和力的黄曲霉B1抗抗体，可以建立直接竞争抑制体，可以建立直接竞争抑制ELISA 快速筛选法。快速筛选法。在获得抗河豚毒素在获得抗河豚毒素(TXX)的单克隆抗体的基础上建立了检的单克隆抗体的基础上建立了检测测TXX的间接的间接ELISA方法，其最低检出浓度为方法，其最低检出浓度为1.0103mg/I，明显优于传统方法。，明显优于传统方法。与传统方法相比，间接与传统方法相比，间接El ISA方法的样品提取方法比较方法的样品提取方法比较简单。简单。第7页/共15页4/17/20241.4 食品中微生物的检测食品中微生物的检测 常规的微生物学检验：常规的微生物学检验：以分离培养、生化试验及血清学试验来以分离培养、生化试验及血清学试验来进行判断，不仅需要大量的手工劳动，而且检验周期长进行判断，不仅需要大量的手工劳动，而且检验周期长(6(67d)7d)。ELISA ELISA检测：检测：不受各种样品成分的影响，而且在不受各种样品成分的影响，而且在2 23d3d内即可内即可完成样品筛选。粪样、鱼粉、奶样，其敏感性和特异性分别高达完成样品筛选。粪样、鱼粉、奶样，其敏感性和特异性分别高达100100和和97.697.6。现已发现有些细菌，如副溶血性弧菌、幽门螺杆菌、大肠杆现已发现有些细菌，如副溶血性弧菌、幽门螺杆菌、大肠杆菌等在低温贫营养的条件下，可以进入菌等在低温贫营养的条件下，可以进入“活的非可培养态活的非可培养态”，在，在适当状态下还可以复苏，仍具有致病力。常规的培养法无法检测适当状态下还可以复苏，仍具有致病力。常规的培养法无法检测到处于这种状态的细菌，造成漏检。而到处于这种状态的细菌，造成漏检。而ELISAELISA在这方面具有一定的在这方面具有一定的潜力。潜力。第8页/共15页4/17/20241.5 食品中转基因产品的检测食品中转基因产品的检测RoganRogan等人用等人用ELISAELISA法检测出传统大豆加工产品中混有的法检测出传统大豆加工产品中混有的CP4 EPSPSCP4 EPSPS蛋白质。这种蛋白质检测方法具有商业可利用蛋白质。这种蛋白质检测方法具有商业可利用性，并具有高度选择性和灵敏性。性，并具有高度选择性和灵敏性。FDA FDA 已研究了用双夹心已研究了用双夹心ELISAELISA法来检测食品是否含转基因法来检测食品是否含转基因玉米成分。玉米成分。Envimlogix ELISAEnvimlogix ELISA测试盒可用于测定玉米中的测试盒可用于测定玉米中的cry9ecry9e蛋白，共测试了蛋白，共测试了9 9种含玉米的食品，结果的重现性相种含玉米的食品，结果的重现性相当好。当好。第9页/共15页4/17/20241.6 食品中其它成分的检测食品中其它成分的检测免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunoglobulin(Immunoglobulin，简称，简称Ig)Ig)指具有抗体活性，能与相指具有抗体活性，能与相应抗原发生特异结合的球蛋白，是构成体液免疫的重要的物质。应抗原发生特异结合的球蛋白，是构成体液免疫的重要的物质。牛乳中特别是初乳中免疫球蛋白的含量相当高，最近开发的免疫牛乳中特别是初乳中免疫球蛋白的含量相当高，最近开发的免疫奶，就是通过对乳牛进行免疫注射从而提高牛奶中的免疫球蛋白奶，就是通过对乳牛进行免疫注射从而提高牛奶中的免疫球蛋白的含量；再有市场中强化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也的含量；再有市场中强化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也是一种蛋白质，具有蛋白质的共性，但其在上述制品中含量又相是一种蛋白质，具有蛋白质的共性，但其在上述制品中含量又相对的少，常规的蛋白测定法无法测出免疫球蛋白的含量。用对的少，常规的蛋白测定法无法测出免疫球蛋白的含量。用ELISA ELISA 即可成功解决这个问题，且同时可完成含量与活性的检测。即可成功解决这个问题，且同时可完成含量与活性的检测。第10页/共15页4/17/2024以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A抗抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉，检出率均血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉，检出率均在在95以上，经与其他血清学方法比较，证实用该法以上，经与其他血清学方法比较，证实用该法鉴别不同肉类具有较高的敏感性和特异性，而且方法鉴别不同肉类具有较高的敏感性和特异性，而且方法简便，设备简单，判断指标客观真实。简便，设备简单，判断指标客观真实。目前，目前，ELISA可检测可检测14种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为1时即可检出。时即可检出。第11页/共15页4/17/2024ELISA优势优势高特异性高特异性和灵敏性和灵敏性检测范围在检测范围在ng-pg水平。水平。属于超微量属于超微量分析技术分析技术结果准确结果准确重现性好重现性好廉价廉价操作简单操作简单处理量大处理量大第12页/共15页4/17/2024 对试剂的选择性高对试剂的选择性高,很难同时分析多种成分很难同时分析多种成分对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应分析分子量很小的化合物或分析分子量很小的化合物或很不稳定的化合物有一定的困难很不稳定的化合物有一定的困难缺缺陷陷第13页/共15页4/17/2024 许多学者致力于改进和完善这种技术，许多学者致力于改进和完善这种技术，重点在多克隆抗体转向单克隆抗体，重点在多克隆抗体转向单克隆抗体，纯化抗体纯化抗体和抗原，和抗原，改进抗体的载体和反应环境，定量方改进抗体的载体和反应环境，定量方式等几个方面。我们相信随着免疫技术的不断式等几个方面。我们相信随着免疫技术的不断提高，提高，ELISA在食品中的应用前景相当广阔。在食品中的应用前景相当广阔。第14页/共15页组员：组员：第15页/共15页