高效液相测阿司匹林.pptx

高效液相色谱法（HPLC）第五组顾慧君许梦伶邰九锦管振雪练国峰吉喆分离原理 色谱法的分离原理是：溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。S固定相 X组分 XS固定相中组分分子 Xm流动相中组分子m流动相 Y溶剂分子 YS固定相中溶剂 Ym流动相中溶剂分子仪器基本结构高效液相色谱仪高压输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统1、储液器2、高压输液泵3、过滤器4、梯度洗脱装置1、六通阀进样器2、自动进样器-色谱柱、色谱柱恒温装置1、通用型检测器（常用：紫外可见检测器）2、专用型检测器高效液相色谱分析方法建立的一般步骤：1、了解样品的基本情况2、明确分离目的3、了解样品的性质和需要的预处理4、检测器的选择5、分离模式的选择6、固定相和流动相的选择种类特点应用表孔硅胶（薄壳硅胶）出峰快，柱效较高。表面积小，样品容量小，峰易拖尾。适用于极性范围较宽的混合样品的分析。全多孔硅胶表面积大，柱效高。应用最广泛的固定相，适用于极性化合物的分离。固定相（1）固定相的种类固定相粒径10m (2）固定相的选择依据分析样品的性质，吸附剂的形状、粒度、比表面积等。（3）对试样的保留时间顺序 醛酮 醇胺 砜 亚砜 酰胺 羧酸流动相溶剂与固定相互不相溶，保持色谱柱的稳定性。纯度高，以免微量杂质在色谱柱中积累，引起柱性能改变。溶剂性能与检测器匹配：紫外吸收检测器不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂。示差折光检测器，不能使用梯度洗脱。溶剂对样品有足够的溶解能力。低粘度（易流动）和适当低的熔点。溶剂的毒性小仪器操作1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。7)设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。8)进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。10)填写登记本，由负责人签字定量与定性一、定性方法1、利用已知标准样品定性2、利用检测的选择性定性3、利用紫外检测器全波长扫描功能定性二、定量方法1、归一化法：要求所有组分都能分离并有响应2、外标法:标准曲线法、直接比较法3、内标法：在被测组分中加入一种被测组分中不含有的参比物。阿司匹林含量测定一、试验仪器及试剂仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、紫外可见分光光度计、超声波清洗器、电子天平试剂：甲醇、冰乙酸、阿司匹林对照品、样品二、溶液的配制1、阿司匹林对照品溶液称取阿司匹林对照品0.005g，置于50mL容量瓶，加冰乙酸-甲醇（1：10）溶液使之溶解并稀释至刻度，摇匀。2、样品溶液的配制称取样品适量，置于100mL容量瓶，加冰乙酸-甲醇（1：10）溶液使之溶解并稀释至刻度，摇匀。三、检测波长的测定取阿司匹林对照品溶液，在200-400nm处用紫外分光光度法测最大吸收波长，以冰乙酸-甲醇（1：10）溶液作参比液。（本组为277nm）四、色谱条件流动相为甲醇-水-冰乙酸（8：4：1），检测波长由三测得，流速为1mL/min，每次进样体积为20L。五、操作步骤1、标注曲线的绘制取阿司匹林对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL分别置于10mL容量瓶中,加冰醋酸一甲醇(1:10)溶液稀释至刻度摇匀,作为标准溶液。各吸取20L做液相色谱分析。以峰面积为纵坐标，阿司匹林浓度为横坐标，得到标准曲线。2、阿司匹林样品含量的测定将配制好的样品溶液，按照20L进样，测定。平行测定三次。谢谢观赏