生化分析仪的校准.ppt

生化分析仪的校准生化分析仪的校准 重庆医科大学附一院 陈 宏 础一一个个实实验验室室测测定定结结果果的的可可靠靠性性是是由由其其精精密密度度、准准确确性性及及可可比比性性所所决决定定的的，一一般般必必需需从下几方面着手。从下几方面着手。1.选好测定方法；2.购买质量过硬的试剂盒；3.要有质优的测试仪器；4.必需进行正确的校准；5.还要规范化操作；6.搞好过硬的室内质量控制；7.积极参加室间质评活动；8.还要有一支素质高的队伍；现就生化分析仪的校准问题提出个人看法。一、校准的重要性和必要性首先必须明确生化分析仪不论如何先进，它还是一个比较器，它测试出来的标本结果是随着标准限的设置不同而变化的。二、确立测定系统的概念n n对于一个临床检测项目，对于一个临床检测项目，测定系统包括测定原测定系统包括测定原测定系统包括测定原测定系统包括测定原理、试剂、仪器、校准品四要素。理、试剂、仪器、校准品四要素。理、试剂、仪器、校准品四要素。理、试剂、仪器、校准品四要素。在全自动生在全自动生化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立化分析仪上使用配套的试剂和标准品，即日立71707170使用宝灵曼的试剂和校准品（使用宝灵曼的试剂和校准品（c.f.a.sc.f.a.s），），在在贝克曼贝克曼CX-7CX-7生化分析仪上使用贝克曼的试剂和生化分析仪上使用贝克曼的试剂和校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系校准品等。各仪器厂家均有自己的标准测定系统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克统。对于校准品不能乱用，如绝对不能用贝克曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝曼的校准品校准日立生化仪，同样也不能用宝灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。灵曼的校准品去校准贝克曼生化仪。三、校准品和质控品n n校校校校准准准准品品品品（CalibrationCalibrationmaterialsmaterials）含含有有已已知知量量的的欲欲测测物物，用用以以校校准准该该测测定定方方法法的的数数值值，它它与与该该方方法法及及试试剂剂、仪仪器器是是相相关关联联的的。校校准准品品的的作作用用是是为为了了减减少少或或消消除除仪仪器器、试试剂剂等等造造成成的的系系统统误误差差。因因此此最最好好为为人人血血清清基基质质，以以减减少少基基质质效效应应造造成成的误差。的误差。n n 质质质质控控控控品品品品（ControlControlmaterialsmaterials）只只用用于于和和待待测测标标本本同同时时测测定定的的，为为了了控控制制标标本本的的测测定定误误差差，因因此此要要求求保保存存时时间间十十分分稳稳定定。前前者者是是校校准准其其值值而而后后者是控制误差用的。者是控制误差用的。四、校准前准备1.了解灯泡已使用多久？检查飘移是否合乎要求；2.检查比色杯的清洁及磨损情况？必要时进行更换；3.用清洁剂泡洗管道4.测定仪器的精密度及线性是否达到仪器性能要求？五、定值质控血清是否可以校准仪器？n n我们在相同条件下，同时用五个进口产品，每家两种不同浓度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等。表表表表 不同厂家定值质控对不同厂家定值质控对不同厂家定值质控对不同厂家定值质控对TPTP、ALBALB、ASTAST、ALPALP结果与靶值比较结果与靶值比较结果与靶值比较结果与靶值比较TPTPALBALBUREAUREATT偏差偏差%TT偏差偏差%T T偏差偏差%汽巴康宁汽巴康宁1157574.394.3929290 05.05.04.54.5汽巴康宁汽巴康宁2 246464.894.8924242.082.0819.319.3-5.765.76宝灵曼宝灵曼1150502.02.034.834.8-5.175.178.968.960.450.45宝灵曼宝灵曼2 248.648.62.882.8833.733.7-5.045.042424-6.776.77RANDOX1RANDOX159.759.76.366.3640.840.83.883.887.677.674.34.3RANDOX2RANDOX239398.338.3326.926.95.985.9821.621.6-5.675.67Human1Human172724.184.1846.746.7-4.184.183.783.785.165.16Human2Human229.829.8-2.682.6829.829.8-2.762.7625.125.1-5.085.08Bio-Red1Bio-Red163630 039391.281.287.17.10 0Bio-Red2Bio-Red242421.791.7927270 018.018.0-4.444.44ASTASTALPALPT T偏差偏差%T T偏差偏差%汽巴康宁汽巴康宁1 14343-10.510.596964.24.2汽巴康宁汽巴康宁2 2184184-11.711.72652650.20.2宝灵曼宝灵曼1 158.358.3-11.211.22422422.72.7宝灵曼宝灵曼2 214.14.-12.312.33843842.72.7RANDOX1RANDOX16262-17.717.7214214-16.116.1RANDOX2RANDOX2144144-12.712.7394394-17.717.7Human1Human133.533.5-7.5-7.5168168-2.22.2Human2Human2151151-11.7-11.7287287-9.19.1Bio-Red1Bio-Red12424-14.6-14.625252222Bio-Red2Bio-Red2201201-14.3-14.32982980.840.84n n通过上述结果比较，说明不同厂家生产的定值质控血清靶值之间有的相差较大，提示我们决不能用定值决不能用定值质控血清代替校准品作校准用。质控血清代替校准品作校准用。六、校准方法n n例例 如如 日日 立立(Hitachi)Hitachi)系系 列列 您您 必必 须须 购购 买买 宝宝 灵灵 曼曼(BoehringerBoehringer)的的试试剂剂及及其其校校准准品品c.f.a.s.(Calibratorc.f.a.s.(Calibratorforforautomatedautomatedsystems)systems)，同同时时准准备备1010至至2020份份新新鲜鲜血血清清。按按宝宝灵灵曼曼试试剂剂盒盒内内的的说说明明书书设设置置参参数数，用用c.f.a.s.c.f.a.s.校校准准血血清清进进行行校校准准，即即可可获获得得各各项项目目的的校校准准K K值值，同同时时观观察察一一下下各各项项目目测测定定时时反反应应进进程程图图，检检查查各各项项目目参参数数设设置置是是否否在在最最佳佳位位置置，如如不不在在最最佳佳位位置置应应予予以以重重新新设设置置并并测测定定。此此时时得得到到的的K K值值即即为为准准确确的的校校准准K K值值，然然后后测测定定待待测测的的1010至至2020份份新新鲜鲜血血清清三三次次取取其其平平均均值值，应应该该说说此此结结果果是是用用Hitachi-Hitachi-BoehringerBoehringer检检测测系系统统所所获获的的测测定定值值。然然后后用此血清值校准其它测定系统。用此血清值校准其它测定系统。TPTPALBALB ALTALTASTASTCreaCreaUreaUrea UAUAMenMen30173017 69469430233023 27742774 147561475626732673 15431543SDSD8686 6.696.69 636347.947.9 1448144850.250.216.116.1CV%CV%2.82.8 1.01.0 2.12.11.71.7 9.89.8 1.91.9 1.11.1表日立7170、BM试剂每天进行校准(n=81)K值的变化TGTGCholCholGluGluCaCaCKCKGGTGGTMeanMean1172117214491449174417445925923864386426032603SDSD16.916.917.417.4 18.118.156.856.8 61.161.167.967.9CV%CV%1.41.4 1.21.2 1.01.0 9.69.6 1.61.6 2.62.6表日立7170、BM试剂每天进行校准(n=81)K值的变化七、关于酶活性测定校准问题n n酶活力（u/l）=A/minV106/(v1)n n令k=V106/（v）n n则酶活力（u/l）=A/minka)理理论论K值值：根据理论摩尔消光系数（）来计算，如NADH为6.22103b)实实测测K值值：由于仪器波长的精密及半宽度不同，而应根据实测值来设定K值c)厂厂家家给给的的K值值：厂家生产试剂盒说明书上提供的K值（有的厂家提供6.3103）d)校校准准K值值：通过校准物直接校准得到的K值常用K值有以下几种：在在日日立立71707170A A全全自自动动生生化化分分析析仪仪上上可以得到几种不同的酶可以得到几种不同的酶K K值，见下表值，见下表 在在日日立立71707170A A全全自自动动生生化化分分析析仪仪上上可以得到几种不同的酶可以得到几种不同的酶K K值，见下表值，见下表表表表表 日立日立日立日立71707170A A全自动生化分析仪上用不同方法全自动生化分析仪上用不同方法全自动生化分析仪上用不同方法全自动生化分析仪上用不同方法 得到几种酶的得到几种酶的得到几种酶的得到几种酶的KK值值值值指示物指示物波长波长理论理论K K值值实测实测K K值值校准校准K K值值ALTALTNADHNADH340340nmnm244424442642226422（8.1%8.1%）30263026（23.8%23.8%）ASTASTNADHNADH340340mmmm2444244426422642（8.1%8.1%）27752775（13.5%13.5%）CKCKNADPHNADPH340340mmmm3878387838783878（8.1%8.1%）38863886（8.3%8.3%）GGTGGT4NA4NA405405mmmm1418141815391539（8.5%8.5%）16121612（13.7%13.7%）GGTGGT4NB4NB405405mmmm1475147517391739（17.9%17.9%）ALPALP4NA4NA（PH10PH10）405405mmmm757757825825（8.9%8.9%）注：1校准物为宝灵曼c.f.a.s，试剂也用宝灵曼的配套试剂。2括 号 内 数 字 是 该 K值 与 理 论 K值 相 比 的 变 化 率825（8.9%）以上摘自张克坚文章中*从上述从上述K K值中不难发现实测值中不难发现实测K K值大于理论值大于理论K K值，值，这说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误这说明生化分析仪的测光系统还存在着一定误差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达差，如波长、半宽度及光径等偏差，使仪器达不到理论上的最佳状态；不到理论上的最佳状态；*校准校准K K值与实测值与实测K K值之间也存在一定的差距，即值之间也存在一定的差距，即使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校使指示物和仪器相同，其差异可能由试剂及校准品造成的；准品造成的；*作者认为最好使用校准作者认为最好使用校准K K值，但必须由两个先值，但必须由两个先决条件：决条件：1 1必须使用配套的试剂；必须使用配套的试剂；2 2必须使用配必须使用配套的高质量的校准品，但校准套的高质量的校准品，但校准K K值应有其溯源值应有其溯源性。性。n n关于酶活标准品，欧洲标准局（BCR）和美国国家标准技术研究院（NIST）均发表了人血清基质的酶活性标准物，相信不久将会有公认的标准（校准）品问世。八、必须拟订校准计划（文件）n n校准工作不是仅进行一次就可万事无忧一劳永逸，而必须经常化。按照“临床实验室质量控制（QC）的要求（草案）”必须要求拟定校准计划，其内容包括：1建立校准方法选择合适（配套）的校准品，包括校准品数目、类型和浓度；如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质；确定校准的频度。至少每六个月进行一次校准；*改变试剂的种类，或者批号更换了。如果实验室能说明改变试剂批号并不影响结果的范围，则可以不进行校准；*仪器或者检验系统进行一次大的预防性维护或者更换了重要部件，这些都有可能影响检验性能；*质控反映出异常的趋势或偏移，或者超出了实验室规定的接受限，采取一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时；如有下列情况发生时，必须进行校准如有下列情况发生时，必须进行校准2每个实验室对每台仪器必需要有校准计划。每次校准必须有详情的记录和分析。每次校准记录必须保存备查。谢谢