国内多囊卵巢综合征动物模型构建的现状及评价.pdf

基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（）；广东省中医药局科研项目面上项目（，）；国家中医药管理局课题（）作者简介：耿红玲（），女，博士，主治医师，研究方向：月经病及不孕症的中医药治疗，：通信作者：陈颐（），女，博士，主任医师，研究方向：妇科疾病的中医药治疗，：思路与方法国内多囊卵巢综合征动物模型构建的现状及评价耿红玲顾春晓徐珉陈颐（广东省中医院妇科，广州，）摘要目的：为全面了解国内多囊卵巢综合征（）动物模型构建现状，以便今后动物造模更加严谨科学。方法：检索 年 月 日至 年 月 日国家知识基础设施数据库（）、中国学术期刊数据库（）和中文科技期刊数据库（）等数据库相关文献，对文献中 造模选用的动物种类、造模药物、造模时长，模型评价等方面进行分析。结果：模型构建最多选用的是大鼠，多选用 日龄，造模使用最多的药物是雄激素及来曲唑，造模时长最多的是 ，模型评价指标可选用阴道脱落细胞涂片、生化指标及病理指标。结论：造模方法多种多样，在动物造模时尽量选用比较成熟的造模方法，同时亦需要不断探索新的造模方法，以求建立更符合临床特征的 动物模型。关键词多囊卵巢综合征；动物模型；模型评价；雄激素；来曲唑 ，（，）：（），：（），（）（），：，：，；中图分类号：文献标识码：多囊卵巢综合征（，）是一种常见的妇科生殖内分泌异常疾病，其发病机制复杂，但确切病因病理尚不明确。针对 动物的造模多种多样，我们检索了相关文献，将文献中对 造模选用的动物品系、造模药物、时长，模型评价等方面进行分析，以期对 造模有所帮助。资料与方法 文献来源中国知识基础设施数据库（，）、中国学术期刊 数 据 库（，）、中文科技期刊数据库（，）。检索策略检索 年 月 日至 年 月 日 、数据库关于 模型的相关文献。发现国内暂未采用猴、猪、兔、羊动物构建 模型，篇采用斑马鱼构建 模型 ，更多采用的是啮齿类动物。、采用题目或关键词：多囊卵巢综合征或 合并摘要鼠。采用题目 关键词：多囊卵巢综合征或 合并任意字段鼠。纳入标准 基础研究，并且文中具体提到 模型构建的方法。排除标准临床类、综述类、会议论文、比较不世界中医药 年 月第 卷第 期同动物模型的文献。数据的规范与数据库的建立 数据的规范由 位研究者检索文献并核实最终获取文献，对来源同一课题组或同一作者（但研究方法一样）的不同文献视为一篇。位研究者录入数据并保证真实准确。数据库的建立建立 表格，分为品系、周龄，造模药物，时长，高脂饮食，造模评价条目，分析文献后逐条填入。数据分析共获取文献中选用的动物品系、鼠龄、造模药物、造模时长、有无高脂饮食，造模评价等条目进行分析。结果 动物品系和鼠龄选择品系：以大鼠使用最多，占比 ，小鼠占比 。鼠龄：大鼠鼠龄多选用 日龄，占比 ，其次是大于 日龄小于 日龄，占比 。在小鼠的文献研究中，鼠龄选用最多的是 ，占比 。见表 。表 品系分布及鼠龄文献数量品系鼠龄（）文献（篇）比例（）大鼠（）未提及 小鼠（）未提及 造模的方法 药物选择目前文献中啮齿类 动物模型通常采用雄激素、芳香酶抑制剂、人绒毛膜促性腺激素（，）胰岛素、雌激素、抗孕激素以及改变光照等手段构建 模型，其中造模方法采用最多的是雄激素造模，占比 ，其次是来曲唑造模，占比 。见表 。造模时长各种造模方法中造模时长最多的 ，占比 。见表 。是否添加高脂高糖饮食文献中 造模过程中联合高脂高糖饲料喂食。模型评价文献中造模后未对模型是否成功进行评价的占比 ，对模型进行评价的占比 。所采用的模型评价方法中：单纯选用阴道涂片方法的占比 ，其次是阴道涂片联合血清学的方法，占比 。见表 。表 造模药物药物文献（篇）比例（）雄激素 高脂 高糖饮食 氢化可的松 甲状腺素及利血平 链脲佐菌素及高脂高糖饮食 半乳糖 普拉睾酮钠 丙酸睾丸酮 双氢睾酮 来曲唑 胰岛素 孕激素 米非司酮 雌激素 光照 单独高脂高糖饮食 注：为脱氢表雄酮硫酸酯表 造模时长造模时长文献（篇）比例（）未提及 表 模型评价模型评价文献（篇）比例（）未评价 单纯阴道涂片 阴道涂片 血清学 单纯卵巢病理 阴道涂片 卵巢病理 阴道涂片 血清 卵巢病理 单纯血清 血清 卵巢病理 只提模型检测未提及具体方法 中医证型的选择文献中专门针对中医证型建立 模型，分别为肾阴虚 、肾阳虚 及痰湿型 。讨论 动物选择大鼠因对性激素敏感，有较稳定的动情周期，而且对于实验研究又经济方便，因此是研究 的首选动物。大鼠 周龄时性成熟，哺乳期为 。小鼠 日龄性成熟，哺乳期 。文献中最多选用的是刚脱离哺乳期的鼠，其次是选用哺乳期后至性成熟期前的鼠，根据大鼠年龄与相 ，当于人的年龄的换算，周龄的大鼠相当于人的年龄的 岁，表明绝大多数文献选用的动物在青春前期或青春期，并非处于性成熟期的育龄期。根据“青春期发育亢进学说”，假性性早熟已被确定为儿童日后发展成 的危险因素之一，故刚离乳幼年雌性大鼠最为常用 。未断乳的鼠在饲养及造模过程中容易死亡，故采用较少。篇选用 周动物造模与其研究氧化损伤及组织退行性变化的亚急性衰老有关 。对年幼阶段动物的研究是否也适用育龄女性的 的认识，不同年龄段的 动物模型是否存在差异，对于从来没有规律的性周期与既往有过规律的性周期的动物造模，有无区别，值得进一步实验验证。造模方法采用最多的是雄激素及来曲唑构建模型。雄激素造模原理：脱氢表雄酮硫酸酯的原料药不溶于水，硫酸普拉睾酮钠是脱氢表雄酮硫酸酯的硫酸钠盐制剂。因脱氢表雄酮硫酸酯为油剂，不易吸收，在造模时可采用溶液酒精灯加热溶解均匀后，并轻轻揉按注射部位促进吸收 。注射脱氢表雄酮硫酸酯是外源性途径提高脱氢表雄酮硫酸酯水平，造成雄烯二酮水平增高，进而睾酮及雌酮水平升高，造成 高雄激素血症。升高的雌酮水平对促卵泡素负反馈使促卵泡素相对不足，从而导致卵泡发育障碍及卵巢多囊改变。长期暴露于 、丙酸睾酮可导致大鼠排卵功能障碍。但是人 与通过外源注射雄激素所建立起来的动物模型在对治疗的反应、形态及激素改变等许多方面都有很大差别，故停用脱氢表雄酮硫酸酯后恢复排卵的周期仍有待进 步商榷 。来曲唑造模原理：来曲唑为芳香酶抑制剂，通过抑制雄激素向雌激素转化的限速酶 芳香化酶的活性，导致体内雄激素的增加，形成高雄激素血症，进而发展为多囊卵巢。来曲唑诱导动物模型表现为 生殖和代谢两方面症状，但停止来曲唑诱导后，小鼠生殖功能恢复。同时，该模型不适合研究雌激素高的多囊卵巢综合征 。胰岛素法造模原理：胰岛素能刺激卵巢卵泡膜细胞和间质细胞合成雄激素，降低血中性激素结合蛋白，使雄激素浓度增加。发挥类促黄体素的作用，在卵泡早期使用，可导致卵泡闭锁。该模型卵巢呈多囊化、无排卵，大鼠体内持续促黄体素样作用，出现高胰岛素血症和高雄激素血症。虽然该模型的研究数量不如雄激素模型那么多，但该模型呈典型 特征与临床症状高度相似 ，并认为胰岛素（，）法诱导的大鼠模型其生殖及代谢指标的变化较来曲唑更具优势 。孕激素 法原理：皮下埋避孕棒，可抑制下丘 脑 垂 体 卵 巢（，）轴，使性激素分泌呈低水平，导致不排卵。此种造模方法时间较短。篇左炔诺孕酮硅胶棒联合 ，造模时间 。篇皮下埋植左旋 甲基炔诺酮硅胶棒（），后次皮下注射 ，共注射 。此种模型卵巢与 患者病理形态学和血浆激素水平相似。但该模型对 轴相关的 的病因分析具有局限性 。米非司酮造模原理：抗孕激素米非司酮作为一种强效的抗孕激素药物，具有较强的抑制排卵作用。使用抗孕激素米非司酮造模后卵巢持续不排卵与血清促黄体素升高的同时作用促进卵巢多囊样改变的形成；同时高水平的促黄体素能够促进抑制素水平的升高，从而导致促卵泡素下降，促黄体素高表达能促进雄激素的合成，表现为睾酮水平明显升高，促使卵泡闭锁，具有 的不排卵，雄激素增高的典型特征 。该种方法造模时间不长，文献 分别为 、。雌激素造模原理：长期雌激素刺激可致下丘脑神经元退化，垂体出现代偿性增生，并对促性腺激素释放激素刺激出现异常反应，导致促黄体素显著升高，同时促卵泡素也会升高。虽然戊酸雌二醇诱导啮齿动物 模型中卵巢的生理学和解剖学与人类相似，但未见人类典型代谢异常数据，该模型不适合下丘脑 卵巢轴相关研究。此外，雌激素模型的性激素特征和卵巢形态特征也不一致 。光照造模原理：啮齿动物发情周期与昼夜系统相关，光暗周期可以控制动物促性腺激素和排卵情况。持续光照在无激素条件下可诱导 模型，但该模型转至正常光照周期环境，特征可恢复正常 。因此，需要进一步评估该模型在 病因和发病机制与 患者的相似性。其他还有单纯高糖高脂饮食构建 模型，该造模方法并非由外源激素诱导或通过改变类固醇生成途径诱导，高脂高糖饮食可导致大鼠出现高胰岛素血症，胰岛素水平升高可导致卵巢卵泡膜细胞的雄激素产生增加。雄激素水平升高与无排卵有关，并加速大鼠卵泡闭锁，从而导致生殖健康受损及代谢紊乱 。亦提示高脂高糖饮食为 潜在病因，但此种造模时间较长，造模时间为 周以上。针对造模时长张萍等 研究发现脱氢表雄酮世界中医药 年 月第 卷第 期硫酸酯诱导 的 大鼠模型，经历 周后，不存在自愈，与持续造模相比更为简便易行，同时其卵巢形态结构以及激素水平变化也更符合临床表现，但此模型因其药物未被完全吸收，如研究激素水平，需要预留一定时间使其吸收。另一项模型研究表明来曲唑联合高脂膳食连续喂养 ，可成功复制符合 胰岛素抵抗患者病理特征及内分泌、代谢紊乱的大鼠模型 。对于多长时间可以造模成功，可能与造模药物种类及方法有关。虽然 造模方法多种，但没有哪一种可以比较全面反映 的特征，也体现出 疾病的复杂性及高度的异质性，需要不断探索，寻找更贴近 本质的造模方法。是否添加高脂高糖饮食 的文献提到造模过程中联合高脂高糖饲料喂养，考虑到 是一种代谢异常的疾病，常合并糖脂代谢的异常，故在行药物造模的同时常采用高脂高糖饲料喂养，是否添加高脂高糖饮食与自己所研究的方向及目的相关。模型评价动物实验模型成功的建立是前提，是进行下一步研究的基础，只有动物的造模是成功的，其研究结果才有可信性。动物模型评价使用最多的是单纯阴道涂片，此种方法简单易行，可帮助判断动物是否存在规律的性周期变化，是否处于无排卵状态。如果连续 个性周期阴道上皮细胞持续角化现象，并失去规律的动情周期则提示无排卵。其次是采用生化指标评价，此种评价方法包括检测性激素、生化指标等协同判断模型的成功与否，较单纯的阴道涂片更进一步。此外是病理学指标，病理主要是观察卵巢的镜下改变是否符合 改变，一般是随机抽取判断。病理学指标是评价 模型的类指标，可准确、直接说明 的病变组织形态特点，权重系数 ，光镜下见卵巢呈多囊样改变，白膜增厚，闭锁卵泡数目增多，卵泡膜细胞层增厚，可见黄体和白体明显减少。颗粒细胞层增厚，颗粒细胞层数减少，仅为数层，颗粒细胞排列致密、染色加深是 典型表现。生化指标是类指标，模型建立后性激素及胰岛素抵抗指数会出现变化，生化指标变化是 发生、发展、康复过程的机体反映，也是模型成功与否的指征，但特异性稍低，权重系数为 。表观指标是类指标，最直接的判定标准是表观指标的变化，模型建立后，可见模型动物闭经、体质量明显增加、卵巢表面苍白，卵巢包膜增厚明显，体积增大，重量增大。根据表观指标的特点，有利于模型的判断，但由于其特异性不强，表观指标权重系数 。模型评价尽量选用权重系数较高的指标，虽然阴道脱落细胞涂片未被列入评价指标中，但因其方便快速，简易可行被研究者广泛采用。同时对模型评价不应局限于一种方法，可 种甚至 种方法联合来判断模型的成功与否。此外，造模后研究者时常进行治疗药物干预，在治疗药物干预期间，模型鼠是否会恢复正常状态亦是需要考虑的问题，所以也有在治疗药物干预期间继续进行造模药物的使用，防止大鼠恢复排卵 ，保证疾病模型的持续存在，但是此种情况存在造模药物的持续使用是否对治疗药物的治疗效果产生影响的问题。中医证型选择方证对应是中医辨证方法及理论的最终体现，也是中医药发挥临床疗效的最终落脚点。所以在对中医药进行实验研究时，应考虑与中医药相对应的证型问题。在获取的文献中，有篇专门针对中医证型建立 模型，虽然有的文献提到痰湿证但其造模方法与非痰湿证模型并无明显不同。此外亦有来曲唑联合细菌内毒素法建立 肾虚血瘀的模型 。临床中患者中医证型不同，其 的表现及生物学指标不尽相同，在动物实验时，尤其是涉及到中医药的研究，可能考虑到病证结合才能做到与临床更为贴近，更加符合中医药的辨证论治，才能更好研究辨证用药的作用机制，才会有更强的说服力。综上所述，造模采用最多的是雄激素及来曲唑构建模型，并且对于药物剂量及干预时长较统一稳定。在动物造模时尽量选用比较成熟的造模方法，以保证造模的成功，同时亦需要不断地尝试和探索新的造模方法，以求建立更符合临床特征的 动物模型。利益冲突声明：无。参考文献 刘聪聪 斑马鱼模型中睾酮对 易感基因表达及生育行为的影响 济南：山东大学，吕宣宣，傅萍，邢佳，等 加味蒌石汤对肾阴虚型多囊卵巢综合征模型小鼠卵巢功能的保护作用 甘肃中医药大学学报，（）：邢佳，傅萍，陈婷婷 滋肾育胎丸对肾阳虚型多囊卵巢综合征模型小鼠血清抑制素 及干细胞因子的影响 浙江中医杂志，（）：陈央娣，傅萍，邢佳 复方星夏汤对痰湿型多囊卵巢综合征模型小鼠肿瘤坏死因子 、白细胞介素 的影响 中华中医药学刊，（）：，（下接第 页），利益冲突声明：无。参考文献 孙忠人，赵晗璐，尹洪娜 由中风病病机发展史论治中风 辽宁中医药大学学报，（）：樊永平 中医脑病历代文献 太原：山西科学技术出版社，：丁霞，李园，李萍，等 基于关联规则探讨中医药防治新型冠状病毒肺炎协定处方的用药规律 北京中医药大学学报，（）：陈雪梅，张文将 中医药治疗急性缺血性中风用药规律分析 中医学报，（）：张笑男，焦富英 探析古今中风病的发病机制 中国民间疗法，（）：吴明慧，高霞，宋立公 中风病内外风之争并非从唐宋分界 世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊），（）：，王少卿，樊永平 浅谈熄风法在缺血性中风急性期治疗中的运用 中西医结合心脑血管病杂志，（）：王丹阳，李晓琳，常静玲 外风在中风病中的作用探析 环球中医药，（）：马思田，王欢，杨永锋，等 基于经典医籍挖掘唐宋以后中风病“外风致中”思想 中医药学报，（）：张怀璧，周叶“外风”学说指导下的小续命汤治疗中风病临证实践 上海中医药杂志，（）：常佳慧，赵晖，王蕾，等 侯氏黑散化学成分对脂多糖诱导 细胞活化中炎性反应因子分泌平衡的影响 首都医科大学学报，（）：于荣，王泽颖 大秦艽汤治疗进展性中风的应用研究 世界最新医学信息文摘（连续型电子期刊），（）：王楠，朱平 风药在内科疾病中的运用 河南中医，（）：王雅茹，胡建鹏，王键，等 中风病病因病机理论的形成与发展 中医药临床杂志，（）：丁元庆，陈哲，唐赛雪 金匮要略 对中风研究的贡献与影响 山东中医药大学学报，（）：张惜燕，邢玉瑞 论中风病因病机理论及其层级划分 山东中医杂志，（）：田德禄 中医内科学 北京：人民卫生出版社，：王建伟，张允岭，贺立娟，等 从气 血 脑神关系谈中风病病机演变 新中医，（）：唐璐，张明慧 从脑肾相关理论探讨中风病急性期临床治疗的思路 世界中医药，（）：刘向哲 扶正固本法在重症中风病恢复期的应用 中华中医药杂志，（）：（收稿本文编辑：王明）（上接第 页）中华中医药学会中药实验药理专业委员会 多囊卵巢综合征动物模型制备规范（草案）中华中医药杂志，（）：史成良，宋春雨，齐晓娟 小檗碱对 半乳糖诱导多囊卵巢综合征模型小鼠的影响 中国现代医学杂志，（）：罗佩，侯丽莹，邓丽玲，等 补肾化瘀方对多囊卵巢模型大鼠子宫内膜胞饮突及 、蛋白表达的影响 中医学报，（）：亓妍妍，孟欣，张琳，等 多囊卵巢综合征模型的构建与分析 产业与科技论坛，（）：苗晋鑫，李秀敏，苗明三 多囊卵巢综合征动物模型数据挖掘及分析 中国比较医学杂志，（）：，魏巍，徐泰安，王秋实，等 两种多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠模型的比较研究 哈尔滨医科大学学报，（）：王莉，侯俐，王海燕 助仙丹与炔雌醇环丙孕酮对多囊卵巢综合征大鼠血清雄激素及卵巢形态的影响对比 临床和实验医学杂志，（）：刘秀兰，杨宏新，武瑞兵，等 多囊卵巢颗粒细胞凋亡中 的作用机制 临床与实验病理学杂志，（）：杨智莺，肖国宏，侯棚钟，等 米非司酮诱导大鼠 动物模型的实验研究 现代妇产科进展，（）：和梦珂，张静，李昕，等 苍附导痰汤对米非司酮诱导 大鼠卵巢形态及雄激素的影响 湖南中医药大学学报，（）：马金平，李红娟，李艳敏 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