DB41∕T 1746-2018 紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程(河南省).pdf

ICS 65.020.40 B 60 DB41 河南省地方标准 DB 41/T 17462018 紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程 2018 - 12 - 06 发布 2019 - 03 - 06 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB41/T 17462018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由河南省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：河南省农业科学院园艺研究所。 本标准主要起草人：李艳敏、王利民、符真珠、董晓宇、尚泓泉、王慧娟、张和臣、蒋卉、高杰、张晶、师曼、袁欣、王耀瑭、崔巍。 DB41/T 17462018 1 紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了紫叶加拿大紫荆组培快繁技术相关的术语及定义、培养基配制、组培快繁程序、炼苗移栽等内容。 本标准适用于河南省境内紫叶加拿大紫荆组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 紫叶加拿大紫荆 紫叶加拿大紫荆（Cercis Canadensis Forest Pansy）是加拿大紫荆的一个品种，属豆科紫荆属，落叶小乔木或灌木；花粉红色，春季先叶开放，花期34月；叶片心形，春夏秋三季紫红色，是重要的彩叶观赏植物。 3.2 植物组培快繁 在无菌条件下，将离体的植物材料接种到培养基上，在适宜的培养条件下，使其形成完整的植株，达到快速增殖目的的一种繁育方法。 3.3 外植体 用于植物组织培养的离体植物器官、组织及原生质体。 4 培养基配制 按照LY/T 1882的规定执行。 基本培养基采用Woody Plant medium（WPM）和Murashige Skoog medium（MS），成分及用量见附录A和附录B。 培养基中添加的植物生长调节物质的浓度及配制参见附录C。 5 组培快繁程序 DB41/T 17462018 2 5.1 外植体采集与消毒 4月中旬，选择生长健壮、无病虫害植物的半木质去叶新梢作为外植体。 将新梢剪成1 cm2 cm的带腋芽茎段，按下列程序消毒：自来水下冲洗20 min，之后转移至超净工作台上，先用75%的乙醇消毒30 s，再用1%的次氯酸钠消毒10 min，无菌水冲洗1遍后，用0.5%的次氯酸钠消毒10 min13 min，最后用无菌水冲洗34遍。 5.2 培养条件 温度 252，光照强度 25 molm-2s-1，光照时间 12 h/d。 5.3 启动培养 将消毒后的外植体接种至启动培养基：WPM+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L，7 d10 d外植体开始萌发，30 d后芽长至2 cm3 cm时进行增殖培养。 5.4 增殖培养 将启动培养诱导形成的高度为2 cm3 cm幼芽切下，转接至增殖培养基：WPM+6-BA 1.5 mg/L2.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L，增殖周期为30 d。 5.5 生根培养 将高度为4 cm6 cm的无根幼苗进行两步生根培养：第一步转入1/2MS+IBA 5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L培养基，黑暗培养11 d进行根诱导；第二步转入MS+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L培养基，在光照下继续培养。 6 炼苗移栽 6.1 炼苗 生根培养30 d后， 当幼苗基部长出35条长1 cm的新根即可进行炼苗。 将生根瓶苗在温室内放置5 d，然后半开瓶口1 d2 d，是瓶苗逐步适应外界的环境。温室温度在20 30 ，湿度在60%90%。 6.2 基质准备 6.2.1 基质配制 移栽基质选用草炭和珍珠岩的混合基质，二者的体积比为3：1. 6.2.2 基质消毒 移栽前用50%多菌灵可湿性粉剂500倍液喷匀基质，充分搅拌后用薄膜密封，堆置7 d后揭开薄膜，晾24 h即可使用。 6.3 移栽 炼苗结束后，取出培养瓶中的生根组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入6.5 cm6.5 cm的营养钵中，摆放在温室苗床上，并立即浇透水。 6.4 移栽后管理 DB41/T 17462018 3 6.4.1 温、湿度管理 移栽后立即搭小拱棚密闭保湿，保持小苗的生长温度25 3 ，相对湿度90%以上。移栽10 d15 d后，逐渐揭膜，透气通风，直至完全适应外界的环境。 6.4.2 光照管理 组培苗移栽后，用遮光率为50%75%的遮阳网遮阴。小苗长出新叶后，及时撤去遮阳网。 6.4.3 施肥 当新叶出现时进行首次施肥，以后每隔23周追肥一次，施用N-P2O5-K2O 比例为20-20-20的水溶性平衡肥，稀释10002000倍叶面喷施。 DB41/T 17462018 4 A A 附 录 A （规范性附录） WPM 基本培养基母液配制 WPM基本培养基母液配制见表A.1。 表A.1 WPM 基本培养基母液配制 类别 成分 配方用量 mg/L 称取量 mg 配 1L 培养基吸取量 mL 大量元素母液 硝酸铵 400 8000 50 硫酸钾 990 19800 磷酸二氢钾 170 3400 硫酸镁 370 7400 硝酸钙 556 1120 氯化钙 96 1920 微量元素母液 硫酸锰 22.5 4500 5 硫酸锌 8.6 1720 硼酸 6.2 1240 钼酸钠 0.25 50 硫酸铜 0.25 50 铁盐母液 硫酸亚铁 27.8 5560 5 乙二胺四乙酸二钠 37.3 7460 有机物母液 肌醇 100 20000 5 烟酸 0.5 100 盐酸硫胺素 1.0 200 盐酸吡哆醇 0.5 100 甘氨酸 2.0 400 DB41/T 17462018 5 B B 附 录 B （规范性附录） MS 基本培养基母液配制 MS培养基母液的配制见表B.1。 表B.1 MS 培养基母液配制 类别 成分 配方用量 mg/L 配制母液称取量 mg/L 配 1 升培养基 吸取量 mL 大量元素母液 硝酸铵 1650 33000 50 硝酸钾 1900 38000 磷酸二氢钾 170 3400 硫酸镁 370 7400 氯化钙 440 8800 微量元素母液 硫酸锰 22.3 4460 5 硫酸锌 8.6 1720 硼酸 6.2 1240 碘化钾 0.83 166 钼酸钠 0.25 50 氯化钴 0.025 5 硫酸铜 0.025 5 铁盐母液 硫酸亚铁 27.8 5560 5 乙二胺四乙酸二钠 37.3 7460 有机物母液 肌醇 100 20000 5 烟酸 0.5 100 盐酸硫胺素 0.1 20 盐酸吡哆醇 0.5 100 甘氨酸 2 400 DB41/T 17462018 6 C C 附 录 C （资料性附录） 植物生长调节物质的浓度及配制 植物生长调节物质的浓度及配制参见表 C.1。 表C.1 植物生长调节物质的浓度及配制 名称 浓度 mg/mL 配制方法 6-苄氨基腺嘌呤 （6-benzyladenine，简称 6-BA） 1 称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L的 HCl 溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。 -萘乙酸 （ -naphthaleneacetic acid， 简称 NAA） 1 称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L的 NaOH 溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。 吲哚丁酸 （indolebutyric acid，简称 IBA） 1 称取 0.1 g 药品，先用 95%的酒精溶解，然后用蒸馏水定容至 100 mL。 _