骨髓增生异常综合征患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达变化及其与临床特征和预后的关系.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 28 期骨髓增生异常综合征患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达变化及其与临床特征和预后的关系姜铭1，徐娟2，贲海祥2，丁林林2，尹红31 如皋市人民医院检验科，江苏如皋226500；2 如皋市人民医院血液内科；3 南通大学附属医院血液病研究室摘要：目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达变化及其与临床特征和预后的关系。方法选择MDS患者76例（MDS组）、健康志愿者32例（对照组），采集所有研究对象空腹外周静脉血，离心留取血清，采用RT-qPCR法检测血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达。比较两组血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达；分析血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达与MDS患者临床特征和预后的关系。结果MDS组血清miR-125b-5p相对表达量低于对照组，血清miR-17-5p相对表达量高于对照组（P均0.05）。IPSS-R分级高危+极高危MDS患者血清miR-125b-5p表达低于IPSS-R分级低危+中危MDS患者，血清miR-17-5p表达高于IPSS-R分级低危+中危MDS患者（P均0.05）。以血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达的均数为临界值，将MDS患者分为血清miR-125b-5p低表达者与高表达者、血清miR-17-5p低表达者与高表达者。血清miR-125b-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均低于血清miR-125b-5p高表达者，血清miR-17-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均高于血清miR-17-5p高表达者（P均0.05）。结论MDS患者血清miR-125b-5p表达下调、血清miR-17-5p表达上调，二者表达变化与IPSS-R分级高危、极高危以及预后不良有关。关键词：骨髓增生异常综合征；微小RNA-125b-5p；微小RNA-17-5p；临床特征；预后doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.28.006 中图分类号：R733.3 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）28-0023-04Expression changes in serum miR-125b-5p and miR-17-5p and their relationships with the clinical features and prognosis in patients with myelodysplastic syndromeJIANG Ming1，XU Juan，BEN Haixiang，DING Linlin，YIN Hong1 Laboratory Department，Rugao Peoples Hospital，Rugao 226500，ChinaAbstract：Objective To investigate the expression changes in levels of serum miR-125b-5p and miR-17-5p and their relationships with the clinical features and prognosis in patients with myelodysplastic syndrome（MDS）.Methods Seventy-six patients with MDS（MDS group）and 32 healthy volunteers（control group）were selected.Fasting peripheral venous blood of all subjects was collected，serum was collected by centrifugation，and the expression of miR-125b-5p and miR-17-5p in serum was detected by RT-qPCR.The expression levels of miR-125b-5p and miR-17-5p in serum were compared between the two groups.The relationships between serum miR-125b-5p and miR-17-5p expression and clinical characteristics and prognosis of MDS patients was analyzed.Results The relative expression level of serum miR-125b-5p in the MDS group was lower than that in the control group，and the relative expression level of serum miR-17-5p was higher than that in the control group（both P0.05）.The serum miR-125b-5p expression in patients with high-risk+extremely high-risk MDS classified with IPSS-R was lower than that in patients with low-risk+medium-risk MDS classified with IPSS-R，and the serum miR-17-5p expression was higher than that in patients with low-risk+medium-risk MDS classified with IPSS-R（both P0.05）.With the mean of serum miR-125b-5p and miR-17-5p as the critical value，MDS patients were divided into those with low and high expression of serum miR-125b-5p，and those with low and high expression of serum miR-17-5p.The 3-year overall survival rate and 3-year progression-free survival rate of those with low expression of serum miR-125b-5p were lower than those with high expression of serum miR-125b-5p，and the 3-year overall survival rate and 3-year 基金项目：南通市卫生健康委员会科研课题（QNZ2022065）。第一作者简介：姜铭（1981-），女，副主任检验技师，主要研究方向为临床血液细胞形态学。E-mail：通信作者简介：徐娟（1977-），女，副主任医师，主要研究方向为骨髓增生异常综合征、淋巴瘤、骨髓瘤疾病诊治。E-mail：开放科学（资源服务）标识码（OSID）23山东医药2023 年第 63 卷第 28 期progression-free survival rate of those with low expression of serum miR-17-5p were higher than those with high expression of serum miR-17-5p（all P18岁。排除标准：合并急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、淋巴瘤等其他血液系统恶性肿瘤者；合并自身免疫性疾病者；合并严重肝肾功能障碍者；合并严重神经或精神疾病者；妊娠期或哺乳期妇女。其中，男52例、女24例，年龄5377（68.12 7.65）岁；WHO 分型：病态造血（SLD）13例，多系病态造血（MLD）14例，难治性贫血（RA）18例，原始细胞增多（EB）21例，不能分类（U）10 例；国际预后评分系统（IPSS-R）分级6：低危 20例，中危23例，高危17例，极高危16例。同期选择在如皋市人民医院体检健康的志愿者 32 例（对照组），男 19例、女 13例，年龄 5078（67.95 7.02）岁。两组性别、年龄具有可比性。本研究经如皋市人 民 医 院 伦 理 委 员 会 批 准（审 批 编 号：KY20200161），所有研究对象或其家属知情同意并签署书面知情同意书。1.2血清miR-125b-5p、miR-17-5p检测观察组入组次日，对照组体检当日，采集空腹外周静脉血3 mL，注入干燥试管中，待血液凝固后，3 204 g离心5 min，留取上层血液，80 保存待测。采用TRIzol法提取血清总 RNA，Multiskan SkyHigh微孔板分光光度计鉴定，OD260/OD280为1.82.0。按PrimeScript RT试剂盒说明将总 RNA 逆转录为 cDNA。逆转录条件：42 30 min，85 5 min。以 cDNA 为模板，按SYBR Premix Ex Taq试剂盒说明进行PCR扩增。所有引物序列设计由美国Thermo Fisher Scientific公司完成。引物序列：miR-125b-5p上游引物5-TCCCTGAGACCCTAACTTGTGA-3、下游引物 5-AGTCTCAGGGTCCGAGGTATTC-3；miR-17-5p 上游引物5-TCTAGATCCCGAGGACTG-3、下游引物5-ATCGTGACCTGAACC-3；-actin 上 游 引 物 5-TGTCCACCTTCCAGCAGATGT-3、下游引物5-GCTCAGTAACAGTCCGCCTAGA-3。PCR反应体系共50 L：cDNA模板2 L，上下游引物各1 L，Premix Ex Taq DNA 聚合酶 25 L，RNase-Free ddH2O 21 L；反应条件：95 2 min，95 15 s、60 30 s 共 40 个循环。扩增反应结束，获取循环阈值（CT）。以-actin为内参，采用2CT法计算目的基因相对表达量。1.3随访MDS患者均接受化疗（小剂量阿糖胞苷基础上联合阿克拉霉素或高三尖杉酯碱或去甲氧柔红霉素）、支持对症治疗（输血、血小板，粒细胞集落刺激因子升白细胞治疗）等，完成足够疗程化疗且无严重并发症，病情平稳后出院。出院后通过电话和门诊复查形式定期随访3年，第1、2年每3个月随访一次，第3年每6个月随访一次。随访截至2023年1月。统计3年无进展生存率和总体生存率。无进展生存期定义为从开始治疗至观察到疾病进展或因任何原因死亡的时间，总体生存期定义为从开始治疗至因任何原因死亡的时间。24山东医药2023 年第 63 卷第 28 期1.4统计学方法采用SPSS25.0统计软件。符合正态分布的计量资料以-x s表示，结果比较采用单因素方差分析或独立样本t检验。计数资料比较采用2检验。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比较采用Log-rank检验。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1两组血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达比较观察组血清miR-125b-5p、miR-17-5p相对表达量分别为1.02 0.24、3.65 1.24，对照组分别为 2.97 0.75、1.52 0.33。观察组血清 miR-125b-5p 相对表达量低于对照组，血清 miR-17-5p相对表达量高于对照组（t分别为20.425、9.552，P均0.05）。2.2血清 miR-125b-5p、miR-17-5p 表达与 MDS 患者临床特征的关系见表1。2.3血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达与MDS患者预后的关系随访截至2023年1月，失访3例，死亡33 例，复发 16 例。以血清 miR-125b-5p、miR-17-5p表达的均数为临界值，将 MDS 患者分为血清 miR-125b-5p低表达者（1.02，39例）与血清miR-125b-5p高表达者（1.02，34例）、血清miR-17-5p低表达者（3.65，35例）与血清miR-17-5p高表达者（3.65，38 例）。血清 miR-125b-5p 低表达者与血清 miR-125b-5p 高表达者 3 年总体生存率分别为 41.03%（16/39）、70.59%（24/34），3年无进展生存率分别为17.95%（7/39）、50.00%（17/34）；血清miR-17-5p低表达者与血清miR-17-5p高表达者3年总体生存率分别为62.86%（22/35）、47.37%（18/38），3年无进展生存率分别为 42.86%（15/35）、23.68%（9/38）。血清 miR-125b-5p低表达者 3年总体生存率和 3年无进展生存率均低于血清 miR-125b-5p 高表达者（Log-rank 2分别为5.815、12.030，P均0.05），血清miR-17-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均高于血清miR-17-5p高表达者（Log-rank 2分别为4.557、6.237，P均0.05）。3 讨论 作为一种抑癌基因，miR-125b-5p在恶性肿瘤的发生、发展和治疗耐药中发挥重要作用。在胰腺癌中，miR-125b-5p可通过抑制己糖激酶 2、丙酮酸激酶肌肉同工酶2表达，阻止有氧糖酵解，降低葡萄糖发酵速率，进而抑制胰腺癌细胞增殖 8。miR-125b-5p过表达可通过靶向黏附连接蛋白KIAA1522抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移9。miR-125b-5p还可靶向己糖激酶 2抑制磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶 B信号通路，继而抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭10。miR-125b-5p与血液系统恶性肿瘤也存在一定关联。有研究报道，miR-125b-5p在白血病细胞中表达下调，上调miR-125b-5p表达可通过靶向抑制其下游靶标人髓细胞白血病基因1，抑制白血病细胞增殖并促进其凋亡11。本研究结果发现，MDS 组血清 miR-125b-5p相对表达量低于对照组；IPSS-R分级高危+极高危MDS患者血清miR-125b-5p表达低于IPSS-R分级低危+中危MDS患者；血清miR-125b-5p低表达者3年总体生存率和3年无进展生存率均低于血清miR-125b-5p 高表达者。提示 miR-125b-5p 能够参与MDS的发生、发展。目前，miR-125b-5p参与MDS表1血清miR-125b-5p、miR-17-5p表达与MDS患者临床特征的关系（-x s）临床特征性别 男 女年龄 65岁 65岁WHO分型 SLD MLD RA EB UIPSS-R分级 低危+中危 高危+极高危n5224423413141821104333miR-125b-5p相对表达量1.00 0.231.06 0.210.99 0.251.06 0.201.02 0.211.03 0.221.01 0.201.03 0.191.00 0.231.17 0.100.82 0.12F/t1.0861.3250.05413.862P0.2810.1890.9940.05miR-17-5p相对表达量3.69 1.053.60 1.263.70 1.093.59 1.273.67 1.213.66 1.203.62 1.203.65 1.193.66 1.183.02 0.534.43 0.20F/t0.3260.4060.00414.493P0.7460.6860.9960.0525山东医药2023 年第 63 卷第 28 期的分子机制尚不清楚。有研究认为，Janus激活激酶2（JAK2）和信号传导与转录激活因子 3（STAT3）信号通路激活促使细胞周期 G0/G1期进展，下调抗凋亡基因的表达，增强 MDS 细胞的增殖活性12，而STAT3 的 3-UTR 区域存在 miR-125b-5p 的结合位点13，miR-125b-5p可通过抑制JAK2/STAT3信号通路，从而抑制MDS的发生、发展。因此，miR-125b-5p表达缺失可能促进MDS的发生、发展并导致患者预后不良。miR-17-5p可通过靶向抑制基质金属蛋白酶组织抑制剂2促使基质金属蛋白酶表达，进而促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移14。miR-17-5p还可靶向抑制CADM2表达激活促肿瘤表型，从而促进结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移15。近年发现，miR-17-5p还能参与血液系统肿瘤的发生、发展。有研究报道，miR-17-5p 可通过调控 BCL11B 过表达诱导急性淋巴细胞白血病细胞增殖并抑制其凋亡16。本研究结果发现，MDS组血清 miR-17-5p相对表达量高于对照组；IPSS-R 分级高危+极高危MDS患者血清miR-17-5p表达高于IPSS-R分级低危+中危MDS患者；血清 miR-17-5p低表达者 3年总体生存率和 3年无进展生存率均高于血清 miR-17-5p 高表达者。提示miR-17-5p能够参与MDS的发生、发展。究其原因，组蛋白赖氨酸甲基转移酶SETD2表达缺失可激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路，促使S100钙结合蛋白A9表达，诱导MDS向急性髓系白血病进展，从而导致 MDS患者预后不良 17。SETD2是miR-17-5p的靶基因，miR-17-5p 可负向调控 SETD2 表达，促使MDS细胞增殖并抑制其凋亡18，最终导致MDS恶性进展和预后不良。综上所述，MDS 患者血清 miR-125b-5p 表达下调、血清miR-17-5p表达上调，二者表达变化与IPSS-R分级高危、极高危以及预后不良有关。参考文献：1PETZER V，THEURL I，WEISS G，et al.EnvIRONmental aspects in myelodysplastic syndromeJ.Int J Mol Sci，2021，22（10）：5202.2WEBER S，PARMON A，KURRLE N，et al.The clinical significance of iron overload and iron metabolism in myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia J.Front 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