DB61∕T 954-2015 水果及果汁产品中多种农药残留量测定方法 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS 67.080.01 X24 DB61 陕西省地方标准 DB 61/T 9542015 水果及果汁产品中多种农药残留量测定方法 液相色谱-串联质谱法 Determination of Multiple Pesticide Residues in Fruits and Fruit Juices LC-MS/MS 2015 - 02 - 12 发布 2015 - 05 - 01 实施陕西省质量技术监督局 发 布 DB61/T 9542015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由陕西出入境检验检疫局提出。 本标准由陕西省质量技术监督局归口。 本标准由陕西出入境检验检疫局负责解释。 本标准起草单位：陕西出入境检验检疫局，宝鸡出入境检验检疫局，西安理工大学。 本标准主要起草人：何强、孔祥虹、李建华、邹阳、张璐、巨亚杰、刘学芝、付骋宇、李莹。 本标准首次发布。 联系信息如下： 单位：陕西出入境检验检疫局； 电话：[phone]； 地址：西安市含光北路10号； 邮编：710068。 DB61/T 9542015 1 水果及果汁产品中多种农药残留量测定方法 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了水果及果汁产品中61种农药（见附表A.1）残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于苹果、梨、石榴、猕猴桃、葡萄、柑桔、苹果汁、梨汁、石榴汁、猕猴桃汁、葡萄汁等水果及果汁产品中61种农药残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法提要 试样中加入磷酸氢二钠缓冲溶液，调pH后用乙腈萃取，N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。 4 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 4.1 定量限 Limit of Quantity 是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。 5 试剂和材料 5.1 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.2 乙腈：色谱纯。 5.3 甲醇：色谱纯。 5.4 磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O）。 5.5 氯化钠。 5.6 氢氧化钠。 5.7 无水硫酸钠：650灼烧 4h，贮于密封容器中备用。 5.8 甲酸：色谱纯。 5.9 氢氧化钠溶液（2mol/L） 5.10 称取 8g 氢氧化钠，用水溶解并定容至 100mL。 DB61/T 9542015 2 5.11 磷酸氢二钠缓冲液：称取 50g 磷酸氢二钠、300g 氯化钠，用水溶解并定容至 1000mL。 5.12 乙腈-甲醇（1+1，V/V）：取 50mL 乙腈、50mL 甲醇混合均匀。 5.13 甲酸溶液（0.1%）：取 500mL 超纯水，加入 500L 甲酸，混匀。 5.14 甲醇-甲酸溶液（65+35，V/V）：取 65 mL 甲醇，加入本标准 5.13 条规定的甲酸溶液 35mL，混匀。 5.15 农药标准物质：相关信息见附录 A 中表 A.1。 5.16 标准储备液： 分别称取适量的农药标准物质， 用甲醇配制成 0.5 mg/mL 或 1.0 mg/mL 的溶液。 -18 避光保存。 5.17 混合标准溶液：分别移取各个农药的标准储备液，用甲醇定容，配制成浓度均为 5g/mL 的标准混合溶液，-18避光保存。 5.18 基质混合标准工作溶液：用样品空白溶液配制，现用现配。 5.19 N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱：500mg/3mL 或相当者。使用前在柱上端装填约 2cm 高的本标准 5.7 条要求的无水硫酸钠，然后用 5mL 乙腈活化，保持柱体湿润。 5.20 微孔滤膜：0.2m，有机系。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-串联质谱仪：配有 ESI 电离源、串联四级杆质量分析器。 6.2 分析天平：感量 0.01mg、0.01g。 6.3 组织捣碎机。 6.4 振荡器。 6.5 固相萃取装置。 6.6 离心机：转速不低于 4000r/min。 6.7 减压旋转蒸发器。 7 试样制备与保存 7.1 取代表性水果样品约 500g，将其可食用部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于-18冷冻避光保存。 7.2 取代表性果汁样品约 500g，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于 4避光保存。 7.3 在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 8 测定步骤 8.1 提取净化 8.1.1 称取 2.0g（精确至 0.01g）试样于 50 mL 离心管中，加入 6 mL 磷酸氢二钠缓冲液，振摇 1 min，用氢氧化钠溶液调节 pH 至 89，加入 10.0 mL 乙腈，振荡提取 10 min，4000r/min 离心 5min。 8.1.2 准确取 5.0mL 上层乙腈提取液，上样于活化好的 N-丙基乙二胺（PSA）固相萃取柱，然后用 5mL乙腈-甲醇洗脱，固相萃取过程保持流速 23mL/min，收集上样液和洗脱液于 50 mL 玻璃浓缩瓶中。 8.1.3 收集液于 40旋转蒸发至近干，用 1.00mL 甲醇-甲酸溶液溶解定容，过 0.2m 微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱仪检测。 8.2 测定 DB61/T 9542015 3 8.2.1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：HSS T3柱1)，长100mm，内径2.1mm，粒径1.8m，或相当者； b) 流动相：甲醇-甲酸溶液梯度洗脱，参见表 1，梯度变化模式为线性递增或递减； 表1 流动相条件 时间（min） 流速（mL/min） 甲醇（%） 甲酸溶液（%） 0.00 0.30 20 80 3.00 0.30 60 40 6.00 0.30 60 40 9.50 0.30 95 5 12.00 0.30 95 5 12.20 0.30 20 80 14.00 0.30 20 80 a) 柱温：35C； b) 进样量：5.0L； c) 61 种农药的参考色谱保留时间参见附录 B 中表 B.1。 8.2.2 质谱参考条件 a) 电离方式：ESI+； b) 毛细管电压：3kV； c) 萃取电压：3V； d) 脱溶剂气：氮气，纯度99.9%，500L/h； e) 锥孔气：氮气，纯度99.9%，50L/h； f) 碰撞气：氩气，纯度99.999%，0.2mL/min； g) 脱溶剂气温度：400C； h) 离子源温度：115C； i) 采集模式：多重反应监测模式（MRM）； j) 多重反应监测条件参见附录 B 中表 B.1。 注：8.2.2为典型的质谱检测参数，选用不同仪器，可根据具体情况进行调整。 8.3 定量测定及定性确证 8.3.1 定性鉴定 对标准工作液及样液按本标准8.2规定的条件进行测定时，如果样液与标准工作液的选择离子流图中，样液中目标物质的保留时间与相近浓度标准溶液的保留时间偏差在2.5%以内；且定性离子对的相对丰度与相近浓度标准溶液对应定性离子对的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 1) 1) HSS T3 柱是商品名称，给出这一信息只是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 DB61/T 9542015 4 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/(%) 50 20 至 50 10 至 20 10 允许的相对偏差/(%) 20 25 30 50 8.3.2 定量测定 根据样液中农药残留含量情况， 选定与样液浓度相近的标准工作溶液， 标准工作溶液和样液中农药的响应值均应在仪器检测线性范围内，如果样液中农药含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，外标法定量。 8.4 空白试验 除不加试样外，均按上述检测步骤进行。 8.5 结果计算和表述 8.5.1 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中各个农药残留量。 10001000=mAVcAXss （1） 式中： X 试样中农药的含量（mg/kg）； A 样液中农药的色谱峰面积； cs 标准工作液中农药的浓度(g/mL)； V 样液最终定容体积(mL)； As 标准工作液中农药的色谱峰面积； m 最终样液所代表的试样量(g)。 8.5.2 计算结果保留两位有效数字。 9 检出限、定量限、回收率 9.1 检出限、定量限 本方法中61种农药的检出限均为0.003mg/kg，定量限均为0.01mg/kg。 9.2 回收率 不同样品基质中61种农药的加标回收率均在65%125%范围内， 平均回收率均大于75%， 回收率相对标准偏差均低于15%。 DB61/T 9542015 5 附 录 A （规范性附录） 农药标准物质信息 表A.1 农药标准物质基本信息 序号 化合物 英文名称 CAS.号 应用 分子式 分子质量 表 B.1中序号1 苯醚甲环唑 Difenoconazole 119446-68-3杀菌剂 C19H17Cl2N3O3 405.0647 53 2 吡虫啉 Imidacloprid 138261-41-3杀虫剂 C9H10ClN5O2 255.0523 6 3 吡虫清 Acetamiprid 135410-20-7杀虫剂 C10H11ClN4 222.0672 7 4 丙环唑 Propiconazole 60207-90-1杀菌剂 C15H17Cl2N3O2 341.0698 45 5 残杀威 Propoxur 114-26-1 杀虫剂 C11H15NO3 209.1052 13 6 除虫脲 Diflubenzuron 35367-38-5杀虫剂 C14H9ClF2N2O2 310.0321 38 7 哒螨灵 Pyridaben 96489-71-3杀螨剂/杀虫C19H25ClN2OS 364.1376 61 8 敌百虫 Trichlorfon 52-68-6 杀虫剂 C4H8Cl3O4P 255.9226 8 9 敌敌畏 Dichlorvos 62-73-7 杀螨剂/杀虫C4H7Cl2O4P 219.9459 12 10 毒死蜱 Chlorpyrifos 2921-88-2 杀虫剂 C9H11Cl3NO3PS 348.9263 58 11 多菌灵 Carbendazim 10605-21-7杀菌剂 C9H9N3O2 191.0695 3 12 多效唑 Paclobutrazol 76738-62-0生长调节剂 C15H20ClN3O 293.1295 32 13 二嗪磷 Diazinon 333-41-5 杀虫剂 C12H21N2O3PS 304.1011 46 14 氟苯嘧啶醇 Nuarimol 63284-71-9杀菌剂 C17H12ClFN2O 314.0622 30 15 氟虫脲 Flufenoxuron 101463-69-8杀螨剂/杀虫C21H11ClF6N2O3 488.0362 60 16 氟硅唑 Flusilazole 85509-19-9杀菌剂 C16H15F2N3Si 315.1003 39 17 氟菌唑 Triflumizole 99387-89-0杀菌剂 C15H15ClF3N3O 345.0856 51 18 环氟菌胺 Cyflufenamid 180409-60-3杀菌剂 C20H17F5N2O2 412.121 48 19 甲胺磷 Methamidophos 10265-92-6杀螨剂/杀虫C2H8NO2PS 141.0013 1 20 甲基嘧啶磷 Pirimiphos-meth29232-93-7杀虫剂 C11H20N3O3PS 305.0963 44 21 甲萘威 Carbaryl 63-25-2 杀虫剂 C12H11NO2 201.079 17 22 甲霜灵 Metalaxyl 57837-19-1杀菌剂 C15H21NO4 279.1471 22 23 腈菌唑 Myclobutanil 88671-89-0杀菌剂 C15H17ClN4 288.1142 34 24 抗蚜威 Pirimicarb 23103-98-2杀虫剂 C11H18N4O2 238.143 9 25 克百威 Carbofuran 1563-66-2 杀虫剂 C12H15NO3 221.1052 14 26 氯苯嘧啶醇 Fenarimol 60168-88-9杀菌剂 C17H12Cl2N2O 330.0327 36 27 氯吡脲 Forchlorfenuron 68157-60-8生长调节剂 C12H10ClN3O 247.0512 24 28 嘧啶磷 Pirimiphos-ethy23505-41-1杀虫剂 C13H24N3O3PS 333.1276 55 29 嘧菌环胺 Cyprodinil 121552-61-2杀菌剂 C14H15N3 225.1266 31 30 嘧菌酯 Azoxystrobin 131860-33-8杀菌剂 C22H17N3O5 403.1168 27 DB61/T 9542015 6 表A.1 (续) 序号 化合物 英文名称 CAS.号 应用 分子式 分子质量 表 B.1中序号31 嘧霉胺 Pyrimethanil 53112-28-0杀菌剂 C12H13N3 199.1109 19 32 灭多威 Methomyl 16752-77-5杀虫剂 C5H10N2O2S 162.0463 4 33 灭线磷 Ethoprophos 13194-48-4杀虫剂C8H19O2PS2 242.0564 37 34 灭幼脲 Chlorbenzuron 57160-47-1杀虫剂 C14H10Cl2N2O2 308.0119 40 35 扑灭津 Propazine 139-40-2 除草剂 C9H16ClN5 229.1094 29 36 噻菌灵 Thiabendazole 148-79-8 杀菌剂 C10H7N3S 201.0361 5 37 噻螨酮 Hexythiazox 78578-05-0杀螨剂 C17H21ClN2O2S 352.1012 59 38 三环唑 Tricyclazole 41814-78-2杀菌剂 C9H7N3S 189.0361 10 39 三唑醇 Triadimenol 55219-65-3杀菌剂 C14H18ClN3O2 295.1088 35 40 三唑酮 Triadimefon 43121-43-3杀菌剂 C14H16ClN3O2 293.0931 33 41 杀扑磷 Methidathion 950-37-8 杀虫剂 C6H11N2O4PS3 301.9619 25 42 莎稗磷 Anilofos 64249-01-0除草剂 C13H19ClNO3PS2367.0233 43 43 水胺硫磷 Isocarbofos 24353-61-5杀虫剂 C11H16NO4PS 289.0538 21 44 四螨嗪 Clofentezine 74115-24-5杀螨剂 C14H8Cl2N4 302.0126 49 45 速灭威 Metolcarb 1129-41-5 杀虫剂 C9H11NO2 165.079 11 46 特丁硫磷 Terbufos 13071-79-9杀虫剂 C9H21O2PS3 288.0441 56 47 戊菌唑 Penconazole 66246-88-6杀菌剂 C13H15Cl2N3 283.0643 41 48 戊唑醇 Tebuconazole 107534-96-3杀菌剂 C16H22ClN3O 307.1451 42 49 西玛津 Simazine 122-34-9 除草剂 C7H12ClN5 201.0781 15 50 烯唑醇 Diniconazole 70217-36-6杀菌剂 C15H17Cl2N3O 325.0749 52 51 辛硫磷 Phoxim 14816-18-3杀虫剂 C12H15N2O3PS 298.0541 47 52 亚胺硫磷 Phosmet 732-11-6 杀虫剂 C11H12NO4PS2 316.9945 26 53 氧环唑 Azaconazole 60207-31-0杀菌剂 C12H11Cl2N3O2 299.0228 23 54 乙硫磷 Ethion 563-12-2 杀螨剂 C9H22O4P2S4 383.9876 57 55 乙霉威 Diethofencarb 87130-20-9杀菌剂 C14H21NO4 267.1471 28 56 乙酰甲胺磷 Acephate 30560-19-1杀虫剂 C4H10NO3PS 183.0119 2 57 异丙威 Isoprocarb 2631-40-5 杀虫剂 C11H15NO2 193.1103 18 58 异柳磷 Isofenphos 25311-71-1杀虫剂 C15H24NO4PS 345.1164 50 59 抑霉唑 Imazalil 35554-44-0杀菌剂 C14H14Cl2N2O 296.0483 16 60 茚虫威 Indoxacarb 144171-61-9杀虫剂 C22H17ClF3N3O7 527.0707 54 61 莠去津 Atrazine 1912-24-9 除草剂 C8H14ClN5 215.0938 20 DB61/T 9542015 7 A B 附 录 B （资料性附录） 质谱参考条件及色谱参考保留时间 表B.1 61 种农药测定的参考 MRM 条件及色谱参考保留时间 序号 化合物 定量离子对 定性离子对 锥孔电压（V） 碰撞能量（eV） 保留时间（min） 表 A.1中序号1 甲胺磷 142.0/94.0 142.0/124.920 15，12 1.34 19 2 乙酰甲胺磷 184.0/142.9 184.0/124.915 10，15 1.50 56 3 多菌灵 192.1/159.9 192.1/132.028 18，25 2.12 11 4 灭多威 163.0/88.0 163.0/106.010 10，10 2.28 32 5 噻菌灵 202.1/175.0 202.1/130.921 20，25 2.47 36 6 吡虫啉 256.1/174.9 256.1/208.922 20，15 2.81 2 7 吡虫清 222.9/125.8 222.9/89.9 28 25，30 3.15 3 8 敌百虫 256.9/108.9 256.9/220.820 18，10 3.20 8 9 抗蚜威 239.0/72.1 239.4/182.025 20，15 3.36 24 10 三环唑 189.9/162.8 189.9/135.840 20，25 3.72 38 11 速灭威 166.0/108.9 166.0/90.9 15 8，25 4.03 45 12 敌敌畏 221.0/109.0 221.0/79.1 25 18，28 4.22 9 13 残杀威 210.2/110.9 210.2/167.815 15，10 4.29 5 14 克百威 222.2/164.9 222.2/122.920 15，20 4.33 25 15 西玛津 202.0/131.9 202.0/123.930 20，20 4.38 49 16 抑霉唑 297.0/158.8 297.0/254.830 20，18 4.39 59 17 甲萘威 202.2/145.0 202.2/127.015 10，25 4.58 21 18 异丙威 194.1/95.0 194.1/137.020 15，8 5.25 57 19 嘧霉胺 200.2/107.0 200.2/167.935 25，33 5.36 31 20 莠去津 216.1/173.8 216.1/145.830 15，22 5.37 61 21 水胺硫磷 290.9/230.9 290.9/120.912 10，30 5.59 43 22 甲霜灵 280.1/220.0 280.1/192.020 13，17 5.61 22 23 氧环唑 299.9/158.8 299.9/230.830 25，18 5.66 53 24 氯吡脲 248.0/128.9 248.0/154.826 15，15 5.72 27 25 杀扑磷 302.9/144.9 302.9/85.0 17 10，18 5.97 41 26 亚胺硫磷 317.9/159.8 317.9/132.920 15，40 6.36 52 27 嘧菌酯 404.0/372.0 404.0/344.025 15，25 6.88 30 28 乙霉威 268.1/225.9 268.1/179.815 10，18 6.92 55 29 扑灭津 230.1/145.9 230.1/187.933 24，18 6.96 35 30 氟苯嘧啶醇 314.9/251.8 314.9/81.0 35 20，25 6.97 14 DB61/T 9542015 8 续表B.1 （续） 序号 化合物 定量离子对 定性离子对 锥孔电压（V） 碰撞能量（eV） 保留时间（min） 表 A.1中序号31 嘧菌环胺 226.1/92.9 226.1/107.935 35，25 7.55 29 32 多效唑 294.1/70.1 294.1/124.920 20，30 7.68 12 33 三唑酮 293.9/196.9 293.9/224.928 15，12 7.96 40 34 腈菌唑 289.1/70.2 289.1/125.125 15，26 7.98 23 35 三唑醇 296.2/70.1 296.2/99.0 15 15，13 8.30 39 36 氯苯嘧啶醇 330.9/268.0 330.9/258.935 23，25 8.36 26 37 灭线磷 243.2/130.9 243.2/96.8 25 20，30 8.50 33 38 除虫脲 311.0/140.9 311.0/113.022 33，50 8.73 6 39 氟硅唑 316.0/165.0 316.0/247.025 25，18 8.74 16 40 灭幼脲 309.0/155.9 309.0/138.925 18，30 9.02 34 41 戊菌唑 284.0/158.9 284.0/172.925 25，20 9.02 47 42 戊唑醇 308.0/70.0 308.0/124.828 20，28 9.08 48 43 莎稗磷 367.9/198.9 367.9/170.925 15，20 9.12 42 44 甲基嘧啶磷 306.1/164.0 306.1/277.835 20，20 9.18 20 45 丙环唑 342.0/158.8 342.0/204.930 30，18 9.20 4 46 二嗪磷 305.0/169.0 305.0/153.035 20，20 9.20 13 47 辛硫磷 299.0/128.9 299.0/96.9 20 15，15 9.30 51 48 环氟菌胺 413.0/295.0 413.0/241.020 16，22 9.34 18 49 四螨嗪 302.9/137.8 302.9/101.920 15，35 9.39 44 50 异柳磷 346.0/244.8 346.0/216.910 10，20 9.45 58 51 氟菌唑 346.0/278.0 346.0/205.920 10，30 9.51 17 52 烯唑醇 325.9/70.1 325.9/158.935 25，30 9.53 50 53 苯醚甲环唑 406.0/251.0 406.0/188.040 25，45 9.55 1 54 茚虫威 528.0/149.9 528.0/202.930 20，40 9.57 60 55 嘧啶磷 333.9/197.8 333.9/169.835 22，35 9.99 28 56 特丁硫磷 289.0/103.0 289.0/232.910 10，5 10.03 46 57 乙硫磷 384.9/198.9 384.9/170.815 10，18 10.14 54 58 毒死蜱 349.9/198.0 349.9/96.9 20 20，35 10.25 10 59 噻螨酮 353.0/227.9 353.0/167.923 15，25 10.26 37 60 氟虫脲 489.0/157.9 489.0/140.921 20，35 10.31 15 61 哒螨灵 365.0/147.0 365.0/309.018 28，13 10.73 7 _