肝细胞癌患者超声造影特征与其血浆miR-30a水平的相关性研究.pdf

1g临床研究645-生物医学工程与临床2 0 2 3年9 月第2 7 卷第5期BME&Clin Med,September 2023,Vol.27,No.5网络出版时间：2 0 2 3-0 8-2 417:50:15 D0I:10.13339/ki.sglc.20230822.017网络出版地址：https:/ 水平的相关性研究路英，王霞摘要：目的探讨肝细胞癌(HCC)超声造影特征及其与患者血浆miR-30a水平的关系。方法选择2 0 19 年1月至2021年8 月在新疆医科大学第二附属医院接受手术治疗的10 0 例HCC患者（HCC组）,其中男性7 4例,女性2 6 例；年龄32 7 8 岁,平均年龄58.2 4岁；肿瘤数量,1个6 7 例，2 个2 3例；直径3.1cm(标准差0.2 3cm）。同期纳人50 例健康人群（对照组）,其中男性35例,女性15例；年龄30 7 1岁，平均年龄56.2 4岁。对HCC及癌旁组织行超声造影检查。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测两组血浆miR-30a水平。分析超声造影参数(始增时间、达峰时间、峰值加速时间、始增速度及增强速率）与miR-30a水平的关系。结果HCC的始增时间、达峰时间、峰值加速时间均低于癌旁组织(9.93 2.01)s vs(19.84 1.23)s、(2 2.7 3 3.8 2)s v s (37.0 2 4.18)s、(12.43 1.44)s v s (2 3.6 5 3.17)s。均 P0.05,始增速度和增强速率均高于癌旁组织(9.2 10.8 4）dBvs（6.140.6 1）d B、（2.330.11）d B/s v s（1.2 7 0.15）d B/s。均P0.05)。H CC患者血浆miR-30a水平(0.12 0.0 3)低于对照组(0.2 8 0.0 4)(P=0.000)。mi R-30 a 低表达组患者始增时间、达峰时间、峰值加速时间均低于miR-30a高表达组（7.8 40.8 3）svs（11.8 31.0 2）s、（17.37 3.11）s v s（2 4.0 8 2.16）s、（9.0 40.13）s v s-（14.0 31.0 2）s。均P0.05，始增速度和增强速率均高于miR-30a高表达组（10.8 41.03）d Bs（7.2 2 0.36）d B、(2.9 8 0.0 9）d B/s v s（1.8 7 0.11）d B/s。均P0.05)。结论超声造影检查可有效显示HCC 影像学特征,其影像学特征与患者血浆miR-30a 水平存在一定相关性。关键词：肝细胞癌；超声造影；miR-30a中图分类号：R735.7;R445.1文献标识码：A文章编号：10 0 9-7 0 9 0(2 0 2 3)0 5-0 6 45-0 5Correlation between contrast-enhanced ultrasonography and plasma miR-3Oa level in patients with hepatocellulacarcinomaLUYing,WANGXia(Department of Diagnostic Ultrasound,the Second Afiliated Hospital of XinjialMedical University,Uruimqi830063,Xinjiang,China)Corresponding author:WANG Xia.E-mail:W.Abstract:Objective To investigate the characteristics of contrast-enhanced ultrasound(CEUS)in patients with hepatocellularcarcinoma(HCC)and its correlation with plasma miR-30a level.Methods From January 2019 to August 2021,a total of 100patients with HCC who underwent surgical treatment were enrolled,which included 74 males and 26 females,aged 32-78years old with mean age of 58.24 years old;number of tumors was 1 tumor in 67 cases and 2 in 23 cases,and diameter was3.1 cm(standard deviation 0.23 cm).In the same period,50 healthy persons were enrolled as control group,which included 35males and 15 females,aged 30-71 years old with mean age of 56.24 years old.The CEUS was performed on HCC andadjacent normal liver tissues.The plasma miR-30a level was detected by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR).Correlation between CEUS parameters(initial increase time,peak time,peak acceleration time,initial increase speed andenhancement rate)and plasma miR-30a level was analyzed.Results The initial increase time,peak time and peakacceleration time of HCC were significantly lower than those of adjacent normal liver tissues(9.93 2.01)seconds vs(19.84 1.23)seconds,(22.73 3.82)seconds vs(37.02 4.18)seconds,(12.43 1.44)seconds vs(23.65 3.17)seconds.P0.05).Theinitial growth rate and enhancement rate of HCC were significantly higher than those of normal liver tissues(9.21 0.84)dB s(6.14 0.61)dB,(2.33 0.11)dB/s vs(1.27 0.15)dB/s.P 0.05J.The level of plasma miR-30a in HCC group(0.12 0.03)was significantly lower than that in control group(0.28 0.04)(P=0.000).The initial increase time,peak time and peakacceleration time of patients in miR-30a low expression group were lower than those in miR-30a high expression group(7.84 0.83)seconds vs(11.83 1.02)seconds,(17.37 3.11)seconds us(24.08 2.16)seconds,(9.04 0.13)seconds vs(14.03 1.02)seconds.P 0.05,and the initial increase speed and enhancement rate in miR-30a low expression group were higher than those作者单位：新疆医科大学第二附属医院超声科，新疆乌鲁木齐8 30 0 6 3作者简介：路英(19 8 7-),女，新疆乌鲁木齐市人，硕士，主治医师，主要从事超声诊断与治疗研究工作。电话：152 9 2 8 7 2 0 2 5。E-mail:261721730qqcom。基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目（2 0 2 0 D01C184）通信作者：王霞(19 7 8 一),女，新疆乌鲁木齐市人，硕士，主任医师，主要从事超声诊断与治疗研究工作。E-mail:W。版权保护，不得翻录。646-BME&ClinMed,eptember2023,Vol.27,No.5生物医学工程与临床2 0 2 3年9 月第2 7 卷第5期in miR-30a high expression group(10.84 1.03)dB us(7.22 0.36)dB,(2.98 0.09)dB/s vs(1.87 0.11)dB/s.P0.05）,具有可比性。1.2方法1.2.1超声检查采用美国Philips公司EPIQ7彩色多普勒超声仪（中国江苏）进行检查，探头频率3.5 5.0 MHz。使用Bracco公司研制的SonoVue造影剂。患者仰卧于检查床，对肝脏常规检查，包括肿瘤位置、大小、数量、边界、内部回声、血流信号及周围组织结构。用0.9%氯化钠溶液（生理盐水）溶解SonoVue，混匀后由肘部静脉注人，再用0.9%氯化钠溶液（生理盐水）冲管，记录4min内肿瘤内部增强及消退特征。将结果进行时间-强度曲线分析，记录始增时间、达峰时间、峰值加速时间、始增速度及增强速度1.2.2逆转录聚合酶链式反应检测血浆miR-30a表达所有患者的血样在入院后2 4h内采集，对照组血样在登记时采集。所有血样在4C、16 0 0 g 条件下离心10 min。随后，将上清液转移到Eppendorf管中，于4、12 0 0 0 g条件下离心10 min。保留血浆并储存在-8 0 冰箱中。采用实时定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测miR-30a在血浆中的含量。使用PureZOLRNA分离试剂(Bio-Rad)从血浆中提取总RNA。使用RT-PCRQuick Master Mix(Toyobo)进行cDNA的反转录。使用 SYBR Green Real-time PCR Master Mix(Toyobo)进行PCR,miR-30a的相对表达量使用2-AC表示，内参为U6。引物序列：miR-30a上游序列,5-ACACACTCC-AGCTGGTCCCTGAGACCCTTTAAC-3,下游序列,5-TGTCGTGGAGTCGGAATTC-3;U6 上游序列,5-CTCGCTTCGGAGCACATACTA-3,下游序列,5-AC-GAATTTGTGTCATCCTGC-3。根据miR-30a中位数将患者分为低表达组和高表达组。1.2.3观察指标HCC病灶及癌旁组织超声造影特征；HCC组及对照组血浆miR-30a水平；miR-30a表达水平与超声造影特征的关系1.3统计学方法使用SPSS24.0软件（IBM)进行统计分析，并使用GraphPadPrism7.01软件绘制图。使用分位数图(Q-Q图)检查连续变量的正态性，正态或近似正态分布计量资料用均值土标准差表示，两组间采用t检验比较。P0.05为差异有统计学意义,P0.01为差异有显著统计学意义。647-BME&Clin Med,September 2023,Vol.27,No.5生物医学工程与临床2 0 2 3年9 月第2 7 卷第5期2结果2.1肝细胞癌与癌旁组织超声造影特征比较HCC 病灶的始增时间、达峰时间、峰值加速时间均低于癌旁组织,始增速度和增强速率均高于癌旁组织(均 P0.05)。见图 1,表 1。2.2肝细胞癌患者与健康人血浆 miR-30a 水平比较HCC 组患者血浆miR-30a 水平(0.12 0.0 3)低于对照组(0.2 8 0.0 4),差异有显著统计学意义(t=7.945,P=0.000)。BA:在肝右叶发现一个直径为 3.9 cm 的低回声结节,动脉期呈不均匀高增强(箭头所示);B:肿瘤在门静脉相呈现低增强(箭头所示)图1HCC典型超声造影图像Fig.1 Typical contrast-enhanced ultrasound images of HCC表1HCC与癌旁组织超声造影指标比较Tab.1 Comparison of contrast-enhanced ultrasound indexes between HCC and adjacent tissues项目病灶数始增时间/s达峰时间/s峰值加速时间/s始增速度/dB增强速率/dB/sHCC1009.93 2.0122.73 3.8212.43 1.449.21 0.842.33 0.11癌旁组织10019.84 1.2337.02 4.1823.65 3.176.14 0.611.27 0.15t8.0436.1497.9624.0214.836P0.0000.0000.0000.0010.0032.3不同miR-30a表达水平患者超声造影特征根据miR-30a中位数将患者分为低表达组（43例)和高表达组(57 例）。低表达组患者始增时间达峰时间、峰值加速时间均低于高表达组，始增速度和增强速率均高于高表达组（均P35kg/m。随后,研究人员还测试了受试者记忆、执行功能和注意力三个领域的认知表现。所有基因中，NUDT2、A M PH、U NC5B、O A T 是与认知关联最显著的。NUDT2突变与智力残疾有关,AMPH 编码是轻度认知障碍和阿尔兹海默病中显著改变的蛋白之一，OAT编码鸟氨酸氨基转移酶，在神经递质合成中有重要作用。虽然它们的中枢功能原本就与认知相关，但这是首次发现它们在脂肪组织中的表达也与认知有关。在另一个队列中，包括了2 2 例年龄2 357 岁肥胖受试者，接受了同样的认知测试,并对内脏脂肪和皮下脂肪进行了RNA测序。综合这两个队列的发现，筛选出至少与3个认知领域之一有关的基因，总共发现了18 8 个重合的基因，它们在突触功能和炎症途径中有显著作用。通过偏最小二乘法分析(PLS),研究人员尝试找到脂肪组织与认知背后的机制。分析结果显示，磷脂代谢、炎症反应、维生素A代谢、突触功能是潜在的机制解释。研究人员在果蝇中检验了脂肪组织-脑轴的具体作用。他们下调了果蝇脂肪体中的AMPH、UNC5B、NU D T 2、O A T、NR4A 2/NR4A 3和EZR的同源物Amph、u n c-5、D a t p、O a t、H r 38 和Moe，果蝇的学习指数（LI)出现了显著的变化。在前两个队列中，参与神经递质释放的基因RIMSI和SLC18A2与不同认知领域具有最多的显著关联。仅在小鼠脂肪组织中下调SLC18A2显著逆转了高脂饮食诱导的认知障碍，而过表达果蝇中RIMSI的同源基因Rim也带来学习能力的改善。由于研究关注的队列主要涉及的是BMI35kg/m的肥胖者，以上的结论未必能够推广到普通人群。不过，至少能够得出结论，脂肪组织-脑轴的确存在，而且影响还挺明显，或许将来可以通过靶向脂肪组织给药来治疗大脑的问题，安全性应该是有保障的。研究中提及的各种基因和它们的产物也可以作为潜在的生物标志物发挥作用。