人体寄生虫学实验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,实验课注意事项,一、实验室规则,1.,进实验室上课时必须穿白大衣，按编号入座,（编号,=,座位号,=,标本盒号,=,显微镜号）；,2.,实验前做好预习，明确实验目的和要求。,3.,严格遵守操作程序，爱护教学标本、仪器、试剂、动物。,1,4.,实验操作时要耐心细致，自己动手，独立思考。,5.,上课要准时，不得无故缺席、迟到或早退。遵守课堂纪律。,6.,严格遵守生物安全规定。动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按要求放到指定地点。,7.,值日生应负责搞好实验室的清洁卫生，离开实验室前应关好水、电、门窗及签名。,2,1,.,每位同学,：,离开实验室之前按顺序放好玻片标,本；放好显微镜；整理好自己的台,面和清洁实验用具。,动物尸体、玻片、器皿、垃圾应按,要求放到指定地点。,2.,值日生,:,抹实验台、黑板、整理桌面等；,拖地、倒垃圾；,值日组长签名；,关好水、电、门窗。,清洁与值日,3,二、赔偿制度,1.,损坏公物要赔偿,2.,重点为玻片标本，损坏要登记赔偿（,蠕虫标本每人一盒，每盒,18,张玻片标本）,。,3.,要求,课前课后检查标本,课前：上课前检查或老师课前讲话后,5min,内检查,课后：离开实验室之前,4.,标本损坏赔偿：（,206,室登记，）,4,三、显微镜的使用,1.,搬动显微镜时要轻，对号使用，对号放回。,2.,插、拔电源前要检查显微镜灯泡的亮度是否已,拨至最低处，开关是否关了,。,3.,看玻片标本要注意的问题,(1),成虫玻片标本：用肉眼、解剖镜、低倍镜,(2),虫卵玻片标本：用低倍镜、高倍镜,虫卵玻片标本的特点及对焦方法,低倍,对焦,对靶,高倍,(3),原虫玻片标本：高倍镜油镜,5,虫卵玻片标本的,对焦方法,低倍,对焦,对靶,高倍,6,显微镜故障处理,1.,放在边台桌面，无需放入柜内,2.,写张小纸条注明故障情况夹于玻片夹处,3.,可取无人使用的后备显微镜使用，用完后放回原处。,四、实验安排,操作：,自己用显微镜看,小组操作：,一般,4,人一组,小班示教,：在小班实验室看,示教：,分两组，到,208,示教室和大厅看。,每组,12,分钟，带上实验指导,示教时间：,15:00-15:25,组别,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,座位号,1-4,5-8,8-12,13-16,17-20,21-24,25-28,29-32,33-35,36-38,8,五、作业要求,在每次作业首页的左上角写上,“,报告日期：,2012,年,月,日,”,标注图：,用平行线标注各部位的名称,绘图：,用铅笔描绘，点、线图,绘虫卵图要求,：,1.,外形特征,内含物结构特点,2.,卵壳用双线表示厚薄、是否均匀等特征,3.,标注主要结构,生活史线条图：,简答题：,简明扼要，或用表格列出,报告：,写目的原理、方法（步骤）、,结果、分析,9,实验课的总目的和要求,1.,掌握常见人体寄生虫的,辨认,，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常见寄生虫的病原学,检查方法,，了解免疫学诊断技术及高新技术诊断方法。,2.,培养动手能力、分析问题和解决问题的能力及创新能力。,3.,验证理论课中所学的基本理论，对重要理论内容加深理解。,10,实验一,华支睾吸虫（,Clonorchis sinensis,）,布氏姜片虫（,Fasciolopsis buski,）,11,实验目的和要求,1.,以华支睾吸虫为代表，掌握吸虫基本形态和生活史的基本特点。,2.,掌握两种吸虫的虫卵形态特征和病原学诊断方法。,3.,熟悉,两种吸虫的感染途径、感染方式、寄生部位与致病作用及防治要点。,12,实验内容,一、操作,1.,华支睾吸虫,(,成虫,、,虫卵,),2.,布氏姜片虫,(,成虫,、,虫卵,),二、小组操作,1.,检查猫肝（找华支睾吸虫成虫,注意病理变化,）,2.ELISA,法检测待测血清中的抗华支睾吸虫抗体,三、示教,：,成虫液浸标本,、中间宿主（,淡水螺,、淡水鱼）、,植物媒介,、,生活史各期,、,病理标本,四、录像：,华支睾吸虫,五、,作业,六、,小结,13,华支睾吸虫成虫,注意观察：,外形,口、腹吸盘（位置和大小比例）,生殖系统,消化系统,14,华支睾吸虫卵,大小：,2917m,形状：,芝麻状,（或灯泡状）,颜色：,黄褐色,内含物：,毛蚴,其它：,卵盖疣状突起（小瘤）,小瘤,15,布氏姜片虫成虫,腹吸盘,口吸盘,睾丸,卵巢,注意观察：外形,口、腹吸盘,生殖系统,消化系统,16,布氏姜片虫卵,大小：,人体吸虫中最大者,形态：,长椭圆形,颜色：,淡黄色,内含物：,一个卵细胞,许多卵黄细胞,其它：,卵壳薄,卵盖不明显,卵盖,卵细胞,卵黄细胞,17,ELISA,法检测待测血清中抗,华支睾吸虫抗体（小组操作）,实验原理：,特异性抗原与特异性抗体反应,包埋已知抗原（,GST2,，基因工程重组抗原）,抗原抗体复合物,底物的显色反应,加待测血清,酶标记的二抗,实验目的：,熟悉免疫学诊断方法和意义,终止反应,ELISA,法检测待测血清中抗,华支睾吸虫抗体（小组操作）,操作步骤,100ul,100ul,100ul,1.,加样,待测样品,1,或,2,2.,温育,封板，,3725,分钟,3.,洗涤,洗涤液,3,次，,200ul,，拍干,4.,加酶标记二抗,100ul,，封板，,3720,分钟,5.,洗涤,洗涤液,4,次，拍干,6.,显色、加终止液,&,结果判定,显色液,A,、,B,各加一滴,37,10,分钟；加终止液,一滴,操作注意事项,:,1.,每一步的反应液要垂直滴入反应孔,加样后轻轻,摇匀；,2.,每一步反应完后都要抛尽，并注意抛尽的方向,以防交叉反应；,3.,每次冲洗、抛尽后要在吸水纸上拍干。,实验报告,:,实验目的,/,原理,实验方法（步骤）,实验结果,实验结果分析,21,22,23,25,26,在鱼肉中的囊蚴,(0.138-0.15mm),27,1.,绘虫卵图（华支睾吸虫、布氏姜片虫）,2.,标注成虫形态图（华支睾吸虫、布氏,姜片虫）,3.,绘华支睾吸虫,生活史线条图,4.,写出,ELISA,法检测待测血清中抗华支,睾吸虫抗体的实验报告,（实验目的,/,原理、实验方法,/,步骤、,实验结果,/,实验结果分析）,作业,28,小结,一、虫卵的鉴别及病原学诊断方法,大小、形状、颜色、内含物、卵壳、其他（卵盖）,29,两种虫卵的鉴别要点,华支睾吸虫卵,布氏姜片虫卵,卵盖,有卵盖（大）,肩峰明显,有卵盖（小）,无肩峰,大小,较小,2735,m12,20m,（小）,较大,130140,m8085m,，（大）,形态,低倍镜下看似芝麻,高倍镜下看似灯泡,（上窄下宽），,底端有一小疣,椭圆形,颜色,黄褐色,淡黄色,内含物,毛蚴,卵内含一个卵细胞和,20-40,个卵黄细胞,卵壳,较薄,薄,离开人体的载体（诊断材料）,粪便,（胆汁）,粪便,30,二、成虫的鉴别,外形,口、腹吸盘,生殖系统,消化系统,寄生部位,31,32,两种成虫鉴别要点,华支睾吸虫成虫,布氏姜片虫成虫,吸盘,（附着、运动器官）,口吸盘比腹吸盘略大，腹吸盘在虫体前,1/5,处,腹吸盘比口吸盘大,4-5,倍，两吸盘距离很近。腹吸盘漏斗状，肌肉发达。,生殖系统,睾丸一对在体后,1/3,处前后排列，树枝状。,卵巢在体中部分叶，有受精囊、劳氏管，无阴茎、阴茎袋。,与左相似，但睾丸分支细而多，卵巢也分支，无受精囊，有劳氏管、阴茎袋。卵黄腺发达。,消化系统,肠管较直,肠管弯曲,体表,无体棘,有体棘,体形,狭长，葵花子形,长椭圆形，为人体最大的吸虫,寄生部位,终宿主肝胆管,终宿主小肠,33,三、生活史,寄生虫完成一代的生长、发育及繁殖的整个过程。,终宿主 保虫宿主,宿主第一中间宿主,第二中间宿主植物媒介,感染期,感染途径、感染方式,定居部位致病,离开人体的时期诊断,34,华支睾吸虫生活史：,虫卵 毛蚴 胞蚴 雷蚴 尾蚴 囊蚴 成虫 虫卵,粪便 水 淡水螺,（纹沼螺等）淡水鱼虾 人,粪便,哺乳动物肝胆管,第一中间宿主第二中间宿主终宿主（,1M,）,布氏姜片吸虫生活史：,虫卵毛蚴胞蚴母雷蚴子雷蚴尾蚴囊蚴 成虫 虫卵,粪便水淡水螺（扁卷螺）水生植物 人 粪便,猪、野猪小肠,中间宿主 植物媒介终宿主,(1-3M),（感染期）,（感染期）,35,两种吸虫生活史鉴别要点,华支睾吸虫,布氏姜片虫,终宿主保虫宿主,人猪、狗、猫、豹、虎等哺乳动物,人猪、野猪,第一中间宿主,纹沼螺、长角涵螺、赤豆螺,扁卷螺,第二中间宿主植物媒介,淡水鱼（鲤科鱼）、淡水虾,水生植物，菱角、荸荠（马蹄）,感染期,囊蚴,囊蚴,感染途径,经口（被动）,经口（被动）,定居部位,人或哺乳动物的胆管（肝胆管）内,人、家猪、野猪等小肠内,离开人体的时期,（诊断取材）,虫卵（粪便）,虫卵（粪便）,致病,肝，胆管炎、肝肿大、肝硬变、胆结石、胆管癌,消化道症状，机械损伤，坏死脱落，炎症、出血、水肿、溃疡,36,四、,ELISA,法检测华支睾吸虫感染的结果分析,应结合病史，临床症状,等综合判断,。,血清中无特异性抗体,未感染华支睾吸虫,感染早期，特异性抗体未出现,病人已治愈，无,抗体存在,假阴性,血清中有特异性抗体,已感染华支睾吸虫,曾感染经治疗未治愈,经治疗病人已治愈，抗体仍存在,假阳性,阳性,阴性,37,五、复习名词慨念,1.,寄生虫,（,parasite,）,2.,宿主,（,host,）,3.,中间宿主,（,intermediate host,）,4.,终宿主,（,definitive host,）,5.,保虫宿主（储蓄宿主）,（,reservoir host,）,6.,感染期,（,infective stage,）,7.,生活史,（,life cycle,）,8.,媒介植物,(vector),9.,人兽共患寄生虫病,（,parasitic zoonoses,）,10.,雌雄同体,（,hermaphrodite,）,38,