微生物综合实验(三个实验综合).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五,微生物大小测定,、,显微镜直接计数,及,微生物的生理生化反应,一、,实验目的,二、,实验原理,三、实验器材,四、,实验内容步骤,主 页,学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法,掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。,返 回,目镜测微尺外观,镜台测微尺外观,全长,1mm,等分,100,格，每格,10um,镜台测微尺放大,放置镜台测微尺,目镜测微尺每格长度的计算,菌体大小的测定,低倍镜,高倍镜,装目镜测微尺,测定结束,返 回,酵母菌 取少量菌液，加在载玻片上，盖上盖玻片，进行观察；随机选取,10,个细胞进行测量，计算平均值,使用后，请将目镜测微尺和镜台测微尺归还到讲台！,不得擦拭测微尺,一、,实验目的,二、,实验原理,三、实验器材,四、,实验内容步骤,主 页,学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法,返 回,显微镜直接计数法,利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目,优点：直观、快速、操作简便,缺点：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察,计数公式,1ml,菌液中的总菌数,=,（,5,个中方格的总菌数,/5,）,1610,4,稀释倍数,或,1ml,菌液中的总菌数,=,（,5,个中方格的总菌数,/5,）,2510,4,稀释倍数,1ml,菌液中的总菌数,=,平均每小格的菌数,40010,4,稀释倍数,本实验中暂规定：,计上不计下，计左不计右,即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中,见图：即本格中计数细胞为,3,个。,返 回,返 回,清洗计数器自然晾干,观察计数室,加样品,酵母菌 取适量菌液，进行系列稀释（已稀释,100,倍）,低倍镜,高倍镜,菌悬液制备,显微镜,计数,用移液器吸取少量摇匀后的菌悬液，从盖玻片边缘滴加,10 ul,样品（自然虹吸）,静置,5min,计数后，及时清洗计数板，并归还到讲台！,不得擦拭计数板,如遇酵母菌出芽，芽体大小达到母细胞一半，即作为两个菌体计数,一、实验目的,二、,实验原理,三、实验器材,四、实验内容步骤,主 页,一、大分子物质水解试验,二、糖发酵试验,三、,IMVC,试验,四、本次实验所用培养基和菌种,五、报告要求,实验原理,大分子物质,微生物,细胞,胞外酶,小分子物质,淀粉,培养基,碘,液,碘液,明,胶,培,养,基,25,以下,实验步骤,淀,粉,水,解,试,验,倒平板,分区标记,接种,培养,观察,加卢戈氏碘液，观察无色透明圈,制固体淀粉培养基,1-,枯草杆菌,5-,大肠杆菌,所接种的细菌菌名代号、组别、日期,实验步骤,明,胶,水,解,试,验,标记明胶培养基试管,穿刺接种,培养,观察,观察明胶液化情况,制明胶培养基,所接种的细菌菌名代号、组别、日期,1-,枯草杆菌,5-,大肠杆菌,糖发酵试验实验原理,糖类物质,细菌,有机酸,气体,溴甲酚紫指示剂,黄色,pH6.8,pH5.2,德,汉,氏,小,管,实验步骤,糖,发,酵,试,验,接种,培养,观察,各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡,标记,所接种的细菌代号,5,大肠杆菌,1,枯草杆菌,IMVC,吲哚,(indol test),试验,甲基红,(methyl red test),试验,伏,-,普,(Voges-Prokauer test),试验,柠檬酸盐,(citrate test),试验,这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌学检查,IMVC,实验原理,蛋白胨中,的色氨酸,吲哚,丙酮酸,对二甲基氨基苯甲醛,玫瑰吲哚,细菌,色氨酸酶,吲哚产生,吲哚试验原理,葡萄糖,有机酸,甲基红指示剂,pH6.3,红色,pH4.2,甲基红试验（,M.R.,试验）,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,二乙酰,蛋白胨中精氨酸的胍基,红色化合物,OH,乙酰甲基甲醇（,V.P.,）试验,原理,NH,2,NH,2,柠檬酸盐,和磷酸铵,碱性化合物,1,溴麝香草酚蓝指示剂,pH6.0-7.0,蓝色,pH,大于,7.6,柠檬酸盐利用,接种,培养,结果观察,5-,大肠杆菌,7-,产气肠杆菌,葡萄糖蛋白胨水培养基 各,2,支,柠檬酸盐斜面培养基 各,1,支,IMVC,实验步骤,甲基红试验,甲基红试剂（,5,滴）,伏,-,普试验,40,KOH,（,5,10,滴）,5,a-,荼酚溶液（等量）,37,温箱中保温（,15,30min,）,柠檬酸盐试验,？,现象观察,反应名称,培养基名称,接种菌名,淀粉水解,淀粉培养基平板（,1,块）,1,、,5,明胶液化,明胶培养基试管（,2,个，半固体）,1,、,5,糖发酵,乳糖发酵培养基（,2,个，紫色）,1,、,5,甲基红试验,葡萄糖蛋白胨水培基（,2,个，黄色）,5,、,7,伏,-,普试验,葡萄糖蛋白胨水培基（,2,个，黄色）,5,、,7,柠檬酸盐试验,柠檬酸盐培养基斜面（,2,个，绿色）,5,、,7,（一）写出目镜测微尺的标定结果,物镜 目尺格数 台尺格数 目尺标定值（,m,）,10,40,（二）分别列表,10,个酵母菌的长和宽，并计算其平均值,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,平均值,长,宽,结果计算 长,m,平均格数,校正值,宽,m,平均格数,校正值,大小表示：宽,m,长,m,实验结果及思考题,（三）显微计数结果,各中格菌数,5,个中方格中总菌数,菌液稀释倍数,两室平均值,菌数,/ml,1,2,3,4,5,酿酒酵母,第,1,室,第,2,室,（四）生理生化反应结果记录表,淀粉水解试验,明胶水解实验,乳糖发酵实验,甲基红实验,伏,-,普实验,柠檬酸盐实验,1,：枯草芽孢杆菌,5,：大肠杆菌,7,：产气肠杆菌,思考题,1.,为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？,2.,假如某些微生物可以有氧代谢葡萄糖，葡萄糖发酵实验应该出现什么结果？,实验名称,实验时间,授课时间,代课教师,抗植物病原真菌的枯草芽孢杆菌筛选及鉴定,2015.11.2-11.11,11月2日下午2:30,3115,微生物实验室,孙燕,抗植物病原真菌的假单胞菌筛选及鉴定,2015.11.11-11.22,11月11日下午2:30,3115,微生物实验室,李治,高效石油降解菌的筛选及初步鉴定,2015.11.23-12.2,11月23日下午2:30,3115,微生物实验室,马小魁,氮素生理群实验,2015.12.2-12.13,12月2日下午2:30,3115,微生物实验室,梁健,植物内生真菌的分离,2015.12.14-12.23,12月14日下午2:30,3115,微生物实验室,魏希颖,2015,年微生物综合实验时间安排,