法医DNA分型技术前沿.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,800电话：800-810-9761,DNA,分型技术前沿,SNP技术,随着人类基因组测序工作的完成,单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的筛选及其检测正成为研究者们广泛关注的焦点一个SNP 的含义是给定的一个群体中超过1%的个体在给定的遗传区域内发生一次核苷酸改变不包括其它遗传变化比如插入和缺失重复序列拷贝的变化等SNP 被认为是一个物种中不同个体表型的主要遗传来源。,以PCR 为基础的方法,1 单管双向等位基因专一性扩增,2 单核苷酸引物延伸分析,(SNPE),3 特异等位基因PCR,3.M A L D I-T O F 质谱分析,适当大小的有机分子晶体(介质)用接近其吸收光谱的激光瞬时激发,会发生能量转移及解吸附过程如将低浓度的蛋白质或核酸分子加入介质溶液中并加以干燥,蛋白质或核酸分子将嵌入到介质晶体中将该晶体放入质谱仪的真空小室,用瞬时(纳秒)强激光激发,晶体中的蛋白质或核酸分子就会解吸附,转变成气相的离子态,此时可通过质谱分析这些离子。,MALDI-TOFMS分析核酸的优点,(1)速度快,核酸分子的离子化分离及检测仅在几毫秒内完成;,(2)分析结果的绝对性,质谱对核酸分子的分离仅与其自身的质量/电荷(m/z)有关,而传统的电泳或杂交方法易受核酸二级结构的影响；,(3)自动化操作,从样品制备到数据的采集加工都可自动化完成适合大规模筛查,有广泛用于检测已知和未知SNP及基因分型和定位研究的前景。,基因芯片技术,基因芯片技术是90年代中期以来影响最为深远的重大科技进展之一，是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新,技术,，具有重大的基础,研究,价值，又具有明显的产业化前景。,DNA芯片（DNA chip）技术是将大量寡核苷酸探针固定于硅片、玻片、聚丙烯或尼龙膜等固相支持物上制成芯片，与标记的样品DNA进行杂交，通过杂交信号强度而获取样品的信息。该技术应用广泛，具有高通量、高信息量的特性。在个体识别方面，STR芯片、SNPs芯片是研究的热点，一旦得到运用，将可使法医学检验更为便捷、准确、高效。,基因芯片技术,特点-GeneChip独特的原位光刻技术，定量分析、重复性好-GeneChip独特的PM-MM探针专利设计，有效解决芯片非特异杂交问题，真正提高检测的灵敏度和特异性-GeneChip表达谱芯片独特的每一个基因多段25mer探针设计，有效区分同源序列，极大提高检测的特异性和准确性-GeneChipGenotyping芯片对每个SNP位点进行40次独立的检测，保证检测的准确性-单色荧光信号适于多张芯片结果的灵活比较，降低用户成本-强大的网上数据分析功能，为后续功能研究提供有力保障,基因表达谱和基因分型研究的完美技术平台,Affymetrix基因芯片操作平台1套系统，便可完成多物种的表达谱分析、人类SNP分析、高通量测序分析-专用芯片杂交箱HybridizationOven640-全自动洗涤工作站FluidicsStation450-高分辨率芯片分析检测系统（GeneChipScanner3000）,变性高压液相色谱法,变性高压液相色谱（DHPLC）是一种高新的高通量的DNA序列多态性分析技术。是用离子对反向高压液相色谱分离检测异源双链。该技术最早由美国stanford大学 Oefner及Underhill等报道的，其原理利用不同的DNA链与色谱柱之间的吸附力差异来分离不同的DNA分子。在两个DNA分子没有长度差异时，如果碱基组成不同，他们与色谱柱的吸附力就有差异，吸附力有差异的DNA分子洗脱时间不同。利用这一原理，可将两个长度一样的DNA分子置高温变性，后置低温复性。若两个DNA分子序列相同，复性后只产生一条双链DNA分子，经色谱分析只产生一个单独的峰；若两个DNA分子序列不同，复性后会产生同源双链（homoduplex）及异源双链（heteroduplex）等不同的DNA分子，这些DNA分子与色谱柱的与色谱柱的吸附力不同，洗脱时间不同，根据DNA片段大小和片断单链的组成顺序 从柱上洗脱下来，以峰的形式被记录下来，第一个峰为掺入的引物峰，然后是引物延伸产物峰，根据峰的个数和对称性，确定基因型。杂合子个体出现二个峰，但在分离度不够的情况下，往往出现肩峰及不对称峰。,该方法的优点是加样和分析的自动化，引物延伸后不需要进行纯化过程，是比较简便的SNP分析方法，而且多个SNP可以复合在一起。,10.DNA芯片技术在法医中的应用,