5-3四-理化鉴别.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第六节 生药的理化鉴定方法和步骤,生药的理化鉴定,（,physical and chemical identification,）,利用,物理的或化学,的方法，对生药中所含,主要,化学成分,或,有效成分,进行,定性定量,分析，以鉴,定生药生药,真伪优劣的,方法。,是生药,真实性鉴定,的方法之一。,一、一般理化鉴别,1 物理常数的测定,测定内容：相对密度、旋光度、折光率、硬度、,粘稠度、沸点、凝固点、熔点等。,适合：挥发油、油脂、树脂类、液体类,（蜂蜜）、加工品类（阿胶）药材,如：蜂蜜中掺水就会影响粘稠度，使比重降低。,相对密度、旋光度、折光率、凝点、熔点等。对于油脂类、挥发油类及树脂类药材的,真实性和纯度鉴别,具有特别重要的意义。,相对密度,熔点,区别或检,查生药的,纯杂程度,区别或检,查生药的,纯杂程度,折光率,区别不同,的油类或,检查生药,纯杂程度,旋光度、凝点,2 理化鉴定,中药理化鉴定发展很快，新的分析手段和方法不断出现。,可确定中药的真伪优劣；,开发利用新资源；,指导中药材的栽培加工，扩大药用部分；,制订中药质量标准。,发展方向：从宏观和微观的形态学鉴定向,有效成分,和,药效鉴定,方向发展。,常用的理化鉴定方法,（1）,显微化学,（2）显色、沉淀反应,（3）泡沫反应和溶血指数的测定,（4）,微量升华,（5）,荧光分析,定义,方法,直接将生药切片或粉末置载,玻片上，滴加试液，加盖玻,片在显微镜下观察产生的结,晶、沉淀或颜色。,生药的提取物置载玻片上，,滴加试液，加盖玻片在显微,镜下观察反应。,显微化学定位,化学定性反应,（1）,显微化学反应,（2）,显色、沉淀反应,：,利用生药某些化学成分能与某些试剂产生特殊的颜色和沉淀反应来鉴别。,甘草粉末 硫酸 橙黄色,生物碱 碘化汞钾 沉淀,（3）,泡沫反应和溶血指数的测定,皂苷,（5）荧光分析,利用生药中所含的某些化学成分，在紫外光或自然光下能产生一定颜色的荧光性质进行鉴别。,中药化学成分紫外光、自然光,荧光,例如,黄连饮片显,金,黄色荧光；,浙贝母粉末显,亮淡绿色荧光,；,大黄粉末显,深棕色荧光,。,荧光分析：,（）中药饮片、粉末、浸出物 紫外光灯。,浙贝母,粉末显亮淡绿色,（）本身不产生荧光,酸、碱或其它化学方法处理紫外光灯,下产生荧光。,枳壳,喷0.5%醋酸镁甲醇溶液显淡蓝色,荧光分析法鉴别药材举例,品名,观察,结果（,365 nm,）,国产沉香,粉末,部分显海蓝色，部分显灰绿色荧光,进口沉香,粉末,部分显竹,篁,绿色，部分显枯绿色荧光,常山,新鲜切片,显亮绿色荧光（含有伞形花内酯成分的药材）,浙贝母,粉末,显亮淡绿色荧光,秦皮,水浸液,在自然光下显碧蓝色荧光,芦荟,水溶液与硼砂共热,即显黄绿色荧光（芦荟素）,枳壳,乙醇浸液滴滤纸上,干后喷,0.5%,醋酸镁甲醇液，烘干显淡蓝色荧光,黄连,折断面,金黄色荧光,荧光效率,主要与物质的结构有关，具有,-,共轭结构的物质才能产生较强的荧光，共轭结构加长，荧光增强。,含有,黄酮、蒽醌、香豆素、木脂素,成分的生药，一般具有较强的荧光反应。,（6）,浸出物测定,对象：有效成分不明确或尚无精确定量方法,的中药。,降香,的乙醇浸出物不得少于8.0%；,黄芪,的水溶性浸出物不得少于l7.0%。,（7）,膨胀度检查,膨胀度是衡量药品膨胀性质的指标,系指按干燥品计算，每1g药品在水或其他规定,的溶剂中，在一定的时间与温度条件下膨胀后,所占有的体积毫升数。,如：,蛤士蟆油,水泡后可膨胀15倍。,（8）,酸败度检查,含油脂类成分,（9）,色度检查,含挥发油类成分的中药“走油”。,白术,，药典规定检查色度，比色鉴定法检,查有色杂质的限量,（10）,有害物质检查,有机农药、黄曲霉素、重金属、砷盐等,二、分光光度法,1 紫外-可见分光光度法200-760nm,总黄酮、总皂苷、总蒽醌,2 红外分光光度法,3 原子吸收分光光度法 无机元素,三、色谱法,1 纸色谱与薄层色谱(PC&TLC),薄层扫描法、薄层-分光光度法等,2 气相色谱（GC),3 高效液相色谱(HPLC),四、化学指纹图谱,：,20头三七,三七剪口,三七花,五、定量分析与方法学验证,1 定量分析,容量法（滴定法）,重量法,分光光度法,薄层扫描法 薄层-分光光度法等,气相色谱法,高效液相色谱法,药典含量测定方法举例,品名,方法,成分,含量,石,膏,容量法,CaSO,4,2H,2,O,95.0%,芒,硝,重量法,Na,2,SO,4,99.0%,半枝莲,分光光度法,总黄酮以野黄芩苷计,1.50%,（,335nm,）,牛,黄,分光光度法,胆红素,35.0%,丁,香,气相色谱法,丁香酚,11.0%,人,参,高效液相色谱法,人参皂苷,Rg,1,和,Re,0.25%,（总量）,三,七,薄层扫描法,人参皂苷,Rb,1,和,Rg,1,3.8%,（总量）,防,己,薄层,-,分光光度法,粉防己碱,0.70%,马钱子,高效液相色谱法,士的宁碱,1.2%,八角茴香,水蒸汽蒸馏,挥发油,4.0%,2 方法学验证,2.1 准确度,回收率 9,5%-105%,RSD,5%,2.2 精密度 RSD,5%,2.3 线性关系,第七节 DNA分子遗传标记技术,1 方法与原理,1.1 限制性内切酶酶切片段长度多态性（RFLP）,1.2 聚合酶链式反应（PCR）技术,（1）随机扩增多态性DNA（DNA RAPD）,任意引物PCR（AP-PCR）技术,（2）扩增片段长度多态性（AFLP）,（3）简单重复序列和简单序列重复区间扩增多态性SSR,（4）DNA测序方法,2 在生药鉴定中的应用,2.1 生药鉴别,2.2 道地药材鉴定,2.3 原植物进化、分类研究,The End,