微生物血球计数板直接计数法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物血球计数板直接计数法,一、目的要求,二、基本原理：,此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。,这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形态个体较大的菌体或孢子。,计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。,计数室刻度有2种：一种是25中格,16小格，而另一种为16中格 25小格，它们都是由400个小格组成。每个大方格边长1mm，则每个大方格面积为1 1=1mm,2,。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个计数室(大方格)的体积为0.1,1 1=0.1mm,3,每个大格有400个小格，所以每个小方格体积0.1/400=1/4000mm,3,=1/4000,000ml。,显微镜直接计数法,使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。,优点,：操作简便，计数直观。活菌,死菌都计在内,与微生物大小相同的杂质也计在内.,三、材料与仪器：,1、待测样品：灵芝孢子粉菌悬液,2、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等,。,四、方法与步骤:,1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。,2、取稀释到一定程度（34个/小格）孢子数，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。静置约5min，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察并计数。,3、如用16,25计数板，只计四个角上中方格的菌数。若是25,16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数23次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线。以减少误差。,4、计数方法：,设：每个中方格的菌数为A，则,每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80,样品中菌数/ml=每小格平均菌数,4000 1000 稀释倍数,本实验采用25 x 16规格，要求数这些方格中的全部小格即80个小格。,四、测定注意事项:,测定时，菌液要摇匀，防止菌液凝聚沉淀。,