羔羊源沙门菌的分离鉴定与药敏试验.pdf

312023年/第11期实 验 研 究作者简介：李红娟（1984.10-）女，中级兽医师，研究方向：畜牧业养殖与发展。羔羊源沙门菌的分离鉴定与药敏试验李红娟（青海省大通县桥头镇元朔畜牧兽医站青海西宁810100）摘要：为了解某地区规模化养殖场及散养户中引起腹泻死亡羔羊的沙门菌流行情况。采集20222023年规模化养殖场及散养等腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等病料组织123份，采用细菌分离培养、形态学观察及生化鉴定试验对采集的123份病料组织进行沙门菌的分离鉴定，并采用K-B药敏纸片法对分离的菌株的进行耐药性分析。结果显示：从20222023年规模化养殖场及散养户中腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等123份病料组织中分离得到78株沙门菌，其分离率为63.4%（78/123）。分离的78株沙门菌对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、新霉素、庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药性较高，耐药率分别为100.0%、97.4%、94.9%、83.3%、79.5%、66.7%；78株沙门菌对头孢噻呋、头孢噻肟、多西环素 氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素、林可霉素等8种药物的耐药率为7.7%29.5%之间，可以在临床中推广与应用。关键词：羔羊；沙门菌；分离鉴定；药敏试验 随着我国肉羊养殖业的快速发展，在我国许多地区养羊业已经形成了规模化和集约化的养殖模式。肉羊养殖数量增加的同时，肉羊的相关疾病也随之增多，尤其是在养殖过程中常见的腹泻性疾病、呼吸道疾病等，其中腹泻性疾病对羔羊的危害较厉害。引起羔羊腹泻的病原有许多，临床中常见的病原主要以细菌性和病毒性为主，死亡率较高，其死亡率达到50%80%1-3。国内外相关研究表明，引起羔羊细菌性病原菌有许多，如大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、奇异变形杆菌、C型产气荚膜梭菌等，其中致病性大肠杆菌和致病性沙门菌可造成羔羊严重腹泻，这两种细菌也是引起羔羊高致死率的主要原因4。沙门菌是临床中常见的人畜共患的病原菌之一，该菌具有多种血清型高达2500多种，该菌可以引起多种动物发病，尤其对幼龄动物的危害大5。羔羊沙门菌病是由不同血清型的沙门菌引起的羔羊的一种肠道腹泻性疾病，临床通常表现为腹泻、严重脱水6。目前，临床中主要依靠抗生素对沙门菌进行治疗，但是在肉羊养殖过程中随着中多种抗生素的不合理的使用，导致沙门菌等多种细菌性疾病的耐药性产生，同时降低抗菌药敏的治疗效果，还导致其药物残留问题，严重危害人们的健康7。本试验于20222023年采集规模化养殖场及散养等腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等病料组织123份，并进行了病原菌沙门菌的分离鉴定，采用K-B药敏纸片法分析不同临床抗生素耐药性，为该羔羊沙门菌病防治提供参考。1材料与方法1.1菌株来源 采集20222023年规模化养殖场及散养户中腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子以及内脏等病料组织123份。1.2细菌分离与培养 将采集到的123份病料组织样品，无菌接种于SS培养基上37恒温培养1824 h后，挑取SS培养基上典型的菌落，在同样的条件下接种于沙门菌显色鉴别培养基、37培养1218 h后，挑取沙门菌显色鉴别培养基上的单个菌落进行革兰氏染色镜检进行形态学观察。1.3生化试验鉴定 参照革兰氏阳性菌的生化鉴定检测试剂盒说明书对分离菌株的生化特性进行检测是否符合沙门菌生化特性，确定分离菌株。1.4药敏试验 将分离的菌株接种于普通营养肉汤中，在37条件下震荡培养至对数期调整分离菌株的菌液浓度为0.5个麦氏浊度，无菌条件下分别涂布在90 mm平板中，贴上药敏纸片，37条件下培养1218 h，用直尺测量抑菌圈直径，分离菌株的药敏试验参照2013年美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的药敏试验法标准进行操作与结果判定。特种经济动植物PECIAL ECONOMIC ANIMALS AND PLANTSS322023年/第11期2结果与分析2.1细菌分离培养 从腹泻死亡羔羊的粪便、肛拭子及内脏等123份病料组织中发现疑似沙门菌的分离菌株在SS培养基中长出圆形的、大小一致、中间带黑心的菌落，在沙门菌显色鉴别培养基上长出圆形的、大小一致蓝色的菌落，分离菌株的革兰氏染色显微镜下观察，发现其形态学与沙门相似。图1 沙门菌显色培养基菌落 图2 革兰氏染色镜检图（1000）表 1分离菌株分布情况病料来源样品/份菌株/株 分离率/%粪便532822.8肛拭子422923.6内脏262117.1合计1237863.4表 2 药敏试验结果药物耐药菌数/株耐药率/%药物耐药菌数/株耐药率/%头孢噻呋67.7多西环素2025.6头孢噻肟56.4磺胺间甲氧嘧啶5266.7青霉素78100.0氟苯尼考2734.6阿莫西林7697.4恩诺沙星1620.5氨苄西林7494.9环丙沙星1721.8新霉素6583.3大观霉素2329.5庆大霉素6279.5林可霉素1417.92.2细菌生化试验 参照革兰氏阳性菌的生化鉴定检测试剂盒说明书，对疑似沙门菌的分离菌株进行生化试验。结果显示，从羔羊腹泻死亡的粪便、肛拭子及内脏等123份病料组织中分离得到78株沙门菌，其沙门菌的生化特性的符合率介于98.0%99.6%之间，分离菌株被鉴定为沙门菌。通过统计分离菌株得到78株沙门菌，分布在不同的病料组织中。其分离率为63.4%（78/123）（表1）。2.3耐药性分析 采用K-B药敏纸片法对分离的菌株进行耐药性分析，结果显示，78株沙门菌对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、新霉素、庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药性较高，耐药率分别为100.0%、97.4%、332023年/第11期实 验 研 究94.9%、83.3%、79.5%、66.7%；78株沙门菌对头孢噻呋、头孢噻肟、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素、林可霉素等8种药物的耐药率为7.7%29.5%。说明临床中分离的78株沙门菌对临床中常用的药物具有不同的耐药性。3讨论与结论在肉羊养羊过程中，养殖环境对羔羊的养殖具有重要的影响，其中外界的环境可对羔羊的成活率造成严重影响，当外界环境改变时（温度下降、湿度过高、寒冷），羔羊机体免疫力下降，引起羔羊发病，严重者可导致其死亡8-9。在规模化养殖场中当羔羊刚出生时，此时羔羊机体的免疫力较弱，胃肠道未发育完全，导致其羔羊的消化机能不健全，免疫力下降10-11。环境中病原可以引起腹泻，环境中大肠杆菌和沙门菌进入羔羊的体内，并在羔羊肠道中定值引起腹泻，其羔羊的发病数占养殖总量的50%以上。刚出生羔羊及未断乳的羔羊的感染率和死亡率均较高，给我国的养羊业造成了较大的经济损失12。本试验研究表明，从20222023年规模化养殖场及散养户中羔羊腹泻死亡的粪便、肛拭子及内脏等病料组织123份试验样品中分离得到78株沙门菌，其分离率为63.4%（78/123）。说明在规模化养殖场及散养户中，沙门菌是引起羔羊腹泻的主要病原菌之一。沙门菌在规模化养殖场及散养户中流行严重，应该引起重视，同时应该注意羔羊的饲养管理，消除诱因，减少羔羊沙门菌腹泻性疾病的发生13。临床中许多研究表明，抗生素对临床中常见的抗菌药物产生严重的耐药性14。本试验研究表明，分离的78株沙门菌对青霉素、阿莫西林、氨苄西林、新霉素、庆大霉素、磺胺间甲氧嘧啶耐药性较高，耐药率分别为100.0%、97.4%、94.9%、83.3%、79.5%、66.7%；78株沙门菌对头孢噻呋、头孢噻肟、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素、林可霉素等8种药物的耐药率为7.7%29.5%。说明临床中分离的78株沙门菌对临床中常用的药物具有不同的耐药性。因此，在临床中应该选择头孢噻呋、头孢噻肟、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素、林可霉素等8种敏感的药物对羔羊沙门菌病进行治疗，同时注意环境的消毒，加强饲养管理，预防羔羊沙门菌病的发生与流行。参考文献：1刘凯伟，吕慧源，屠焰，等.复合植物提取物对羔羊腹泻、血清免疫、炎症反应和抗氧化能力的影响J.饲料工业，2023，44(2):39-44.2刘蒙恩，刘洋，左春生.致羔羊腹泻沙门菌的分离鉴定及耐药性检测J.中国兽医杂志，2022，58(10):100-103.3尚立宏，张啸，许伟，等.甘肃部分羊场羔羊腹泻病原菌分离鉴定及其耐药性研究J.中兽医医药杂志，2022，41(4):7-11.4王勇，徐本全.羔羊腹泻的病因分析及其防控技术研究J.中国畜牧业，2022(22):90-91.5王恒月.羔羊致病性沙门菌分离鉴定与药敏试验J.中国兽医杂志，2019，55(7):64-65.6简莹娜，张学勇，李秀萍，等.一例羔羊腹泻疾病中沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验J.青海畜牧兽医杂志，2018，48(2):11-13.7张兴民.四川部分地区山羊腹泻主要病原菌检测及山羊源志贺菌部分生物学特性研究D.西南民族大学，2018.8喻华英，王颜颜.羔羊腹泻的细菌分离与鉴定J.中国兽医杂志，2010，46(5):43-45.9张兴民，张焕容，汤承.山羊4种腹泻病原菌多重PCR检测方法的建立J.中国预防兽医学报，2018，40(2):122-126.10包红朵，呼圣杰，王冉.沙门氏菌噬菌体在动物和食品中的生物防控研究进展J.食品安全质量检测学报，2022，13(2):605-611.11余佳敏，周瑄，杨焕焕，等.应用SE-PADs法检测库尔勒市动物源食品中沙门菌的效果评价J.现代食品，2021，6(20):216-218.12龚倩梅，王晓明，孙乃岩，等.新疆与宁夏部分地区沙门菌的流行特征及耐药性调查J.畜牧与兽医，2022，54(5):81-89.13宋强强，轩慧勇，刘雪连，等.新疆焉耆地区4种动物源的沙门菌耐药性及耐药基因检测J.湖南农业大学学报：自然科学版，2021，47(6):705-711.14房鑫，刘又铭，张海文.不同动物源抗菌肽对沙门氏菌杀菌机制比较研究J.饲料研究，2021，44(10):54-58