重组DNA的基本步骤课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。,重组DNA的基本步骤,获得目的基因,DNA分子的体外重组,重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定,获得目的基因的途径,限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段,人工合成DNA,反转录酶酶促合成法,聚合酶链(式)反应扩增特定的基因片段,这样就可以用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小的基因组来说，可以直接用标记地探针来获取在通过特定的方法，对于比较大的基因组，可以先制作基因文库，然后钓取所需要的带有目的基因的片段。,限制性内切酶对DNA的切割方式有两种，一种切割方式是完全酶切，另一种方式为部分酶切。,体外重组连接常用的方法1 黏性末端连接法2 平齐末端连接发,平齐末端连接法：用化学合成法、逆转录酶酶促合成法获得的DNA片段或cDNA片段，以及某些限制酶酶切产生的DNA片段，称为平齐末端。固然平齐末端可用T4 DNA连接酶连接，所需底物的浓度高，效率低。因此通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造的方法是加人工接头或结尾,这一过程分为两个步骤1 重组DNA引入宿主细胞 2 重组体克隆的筛选与鉴定,谢谢观看,